劉肖挺 王 安 楊小然 張 括

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究所，黑龍江哈爾濱 150030)

色氨酸是動(dòng)物維持和生長(zhǎng)的必需氨基酸，參與機(jī)體蛋白的合成和代謝，是5-羥色胺、褪黑素、色胺、NAD、NADP、煙酸等的前體物質(zhì)，在動(dòng)物體內(nèi)具有多種生理功能，被認(rèn)定是家禽繼蛋氨酸、賴(lài)氨酸之后第三限制性氨基酸[1-2]。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外出現(xiàn)了飼糧中添加色氨酸飼喂雛雞的報(bào)道[3]，在蛋雛鴨上還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本文在玉米-豆粕型飼糧中添加色氨酸，探討其對(duì)蛋雛鴨生長(zhǎng)性能、抗氧化功能及免疫器官發(fā)育的影響，以確定色氨酸的適宜添加量，為蛋鴨飼糧的配制提供理論依據(jù)，從而更好地指導(dǎo)生產(chǎn)，促進(jìn)養(yǎng)鴨業(yè)的發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)用色氨酸,純度＞99.8%(哈爾濱華達(dá)飼料公司)。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與日糧

選用1日齡健康、體重相近的金定蛋雛鴨288只，初始體重經(jīng)方差分析無(wú)顯著差異(P＞0.05)。蛋鴨基礎(chǔ)日糧參照NRC（1998）營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)和臺(tái)灣畜牧學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)中產(chǎn)蛋鴨營(yíng)養(yǎng)需要配制，為玉米-豆粕型飼糧，具體配方和營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選用1日齡288只金定蛋雛鴨隨機(jī)分為6個(gè)處理，每個(gè)處理6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8只鴨。Ⅰ組為對(duì)照組，飼喂玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組在基礎(chǔ)飼糧的基礎(chǔ)上分別添加0.02%、0.04%、0.06%、0.08%、0.24%的色氨酸，試驗(yàn)期4周。試驗(yàn)鴨飼養(yǎng)于3層重疊式育雛籠中，保證鴨舍有良好的通風(fēng)和光照，自由采食和飲水，按時(shí)記錄日期、室溫、死亡數(shù)，每周統(tǒng)計(jì)耗料重量。

1.4 樣品采集與處理

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)從每個(gè)重復(fù)中選取健康、接近平均體重的試?guó)?只進(jìn)行頸靜脈采血，3 500 r/min離心15 min，分離血清，-20℃保存?zhèn)溆?；采血后將鴨完全放血處死，摘取肝臟（不包括膽囊），保存在-20℃冰柜中待用。摘取免疫器官（脾臟、胸腺、法氏囊），去除結(jié)締組織和脂肪，稱(chēng)重。

1.5 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.5.1 生長(zhǎng)性能指標(biāo)

試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)稱(chēng)鴨初重，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)空腹稱(chēng)末重，稱(chēng)重前1 d晚上20:00停料，于第2 d早晨8:00空腹稱(chēng)重，統(tǒng)計(jì)耗料量，計(jì)算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比(F/G)。

1.5.2 免疫器官指數(shù)

免疫器官（胸腺、脾臟、法氏囊）指數(shù)=免疫器官重量(g)/屠體重(kg)。

1.5.3 血清生化指標(biāo)

測(cè)定血清及肝臟組織中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性，總抗氧化能力（T-AOC）和丙二醛（MDA）含量，采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定組織中蛋白的含量。以上指標(biāo)在UV-2401紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上進(jìn)行測(cè)定，方法參照南京建成生物工程研究所的試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS 8.1統(tǒng)計(jì)軟件的One-way ANOVA過(guò)程進(jìn)行方差分析，差異顯著時(shí)進(jìn)行Duncan's法多重比較，以P＜0.05為顯著標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（Mean±SD）表示。

2 結(jié)果

2.1 色氨酸對(duì)蛋雛鴨生長(zhǎng)性能的影響（見(jiàn)表2）

表2 不同色氨酸水平對(duì)蛋雛鴨生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，添加0.04%色氨酸組（Ⅲ組）的平均日增重顯著高于對(duì)照組和其它試驗(yàn)組（P＜0.05），其余各組平均日增重與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05）。添加0.04%色氨酸組平均日采食量顯著高于對(duì)照組和其它試驗(yàn)組（P＜0.05），其余各試驗(yàn)組平均日采食量與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05）。各組料重比差異不顯著（P＞0.05），以第Ⅴ組料重比最高。

2.2 色氨酸對(duì)蛋雛鴨抗氧化功能的影響

2.2.1 色氨酸對(duì)蛋雛鴨血清和肝臟中GSH-Px、SOD活性的影響（見(jiàn)表3）

表3 不同色氨酸水平對(duì)蛋雛鴨血清和肝臟中GSH-Px、SOD活性的影響

由表3可知，飼糧中添加色氨酸對(duì)血清中SOD活性無(wú)顯著影響（P＞0.05）。與對(duì)照組相比，第Ⅱ組血清GSH-Px活性顯著升高（P＜0.05），第Ⅲ組血清和肝臟中GSH-Px活性顯著升高（P＜0.05），第Ⅲ組肝臟中SOD活性與對(duì)照組相比顯著升高（P＜0.05）。

2.2.2 色氨酸對(duì)蛋雛鴨血清和肝臟中T-AOC能力、MDA含量的影響（見(jiàn)表4）

表4 不同色氨酸水平對(duì)蛋雛鴨血清和肝臟中T-AOC能力、MDA含量的影響

由表4可知，第Ⅱ組血清T-AOC能力（水平）和第Ⅲ組肝臟T-AOC能力（水平）顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），第Ⅲ組血清中MDA含量顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），各試驗(yàn)組肝臟中MDA的含量與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異（P＞0.05），第Ⅵ組肝臟中MDA含量顯著高于第Ⅲ組（P＜0.05）。

2.3 色氨酸對(duì)蛋雛鴨免疫器官的影響（見(jiàn)表5）

表5 不同色氨酸水平對(duì)28日齡蛋雛鴨免疫器官的影響(g/kg)

由表5可知，與對(duì)照組相比，第Ⅳ組的胸腺指數(shù)顯著升高（P＜0.05），第Ⅲ組和第Ⅳ組的脾臟指數(shù)顯著升高（P＜0.05）。各試驗(yàn)組的法氏囊指數(shù)與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異（P＞0.05），第Ⅵ組的法氏囊指數(shù)顯著低于第Ⅱ和第Ⅲ組（P＜0.05）。

3 討論

3.1 色氨酸對(duì)蛋雛鴨生長(zhǎng)性能的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明：添加色氨酸組(Ⅱ～Ⅳ組)的平均日增重高于對(duì)照組(第Ⅰ組)，其中添加0.04%色氨酸組(第Ⅲ組)達(dá)到了顯著水平，過(guò)高添加組反而有降低平均日增重的趨勢(shì)。鄺聲耀[4]研究報(bào)道，色氨酸是神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺的前體，5-羥色胺能夠作用于人和動(dòng)物下丘腦的采食中樞，從而調(diào)節(jié)動(dòng)物的采食，提高采食量；并且色氨酸可以調(diào)節(jié)機(jī)體的蛋白質(zhì)代謝，使機(jī)體蛋白質(zhì)合成增加；而且色氨酸又通過(guò)調(diào)節(jié)家禽的采食量而達(dá)到提高其飼料轉(zhuǎn)化率的效果。還有一些研究認(rèn)為，色氨酸可直接作用于氨基酸受體或通過(guò)增加外周5-羥色胺含量而調(diào)節(jié)采食作用。吳妙宗等[5]研究報(bào)道，日糧中略微添加色氨酸(0.03%)，可顯著提高肉雛雞的平均日增重、平均日采食量和降低料肉比。席鵬彬等[6]報(bào)道,日糧中添加色氨酸顯著改善了黃羽肉雞生產(chǎn)性能,提高機(jī)體蛋白質(zhì)沉積和5-羥色胺濃度。據(jù)Borg等[7]研究報(bào)道，飼糧中色氨酸水平的變化（0.03%）可顯著影響斷奶仔豬的采食量、日增重和料重比，同時(shí)莫棣華等[8]研究報(bào)道，日糧中添加0.02%、0.04%的色氨酸，可提高雛雞第1、第2周齡體重，降低料重比，添加過(guò)多色氨酸反而降低雛雞體重，增加料重比，本試驗(yàn)研究結(jié)果與前人研究一致。

正常情況下，需氧生物體內(nèi)有完善的抗氧化防御系統(tǒng)，機(jī)體抗氧化系統(tǒng)處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，一旦這種狀態(tài)被破壞就會(huì)導(dǎo)致過(guò)多的自由基攻擊機(jī)體的生物膜，引起脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物——MDA的含量增加。體內(nèi)的SOD（超氧化物歧化酶）、GSH-Px（谷胱甘肽過(guò)氧化物酶）、T-AOC(總抗氧化能力)等都是動(dòng)物體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)中的重要組成部分，有清除自由基、抗氧化損傷和維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)等重要作用。MDA作為脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物的分解產(chǎn)物，測(cè)試其含量可反映細(xì)胞受損傷的程度。本試驗(yàn)中，添加0.04%色氨酸可顯著提高蛋雛鴨肝臟中SOD、GSH-Px活性及總抗氧化能力（T-AOC），顯著降低血清中MDA含量。由此說(shuō)明，適宜的色氨酸添加水平具有間接和直接的抗氧化損傷功能。高晶[9]研究報(bào)道，色氨酸分子中的氨基和氧化劑結(jié)合，阻止氧化反應(yīng)，減少了體內(nèi)MDA含量；同時(shí)色氨酸經(jīng)過(guò)氫化酶途徑分解代謝產(chǎn)生5-羥色胺，而5-羥色胺是褪黑素的前體，褪黑素具有抗氧化作用。周斌[10]研究報(bào)道，飼糧中適量添加色氨酸（0.04%～0.08%），蛋雞血清中的MDA含量顯著降低，GSH-Px活性有上升趨勢(shì)。Tan等[11]研究報(bào)道，褪黑素為強(qiáng)·OH清除劑，其清除能力是還原型谷胱甘肽（GSH）的4倍、甘露醇的14倍。張全江等[12]研究表明，連續(xù)51 d服用褪黑素后，小鼠腎臟SOD活性與總抗氧化能力（T-AOC），心肌TAOC及腦SOD活性與T-AOC顯著升高，心肌與腦MAD含量顯著下降。這與本試驗(yàn)研究結(jié)果一致。由此說(shuō)明，添加適宜水平的色氨酸可提高蛋雛鴨抗氧化功能，進(jìn)而促進(jìn)機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育。

3.2 色氨酸對(duì)免疫器官發(fā)育的影響

胸腺、法氏囊是形成、誘導(dǎo)和分化淋巴細(xì)胞的中樞免疫器官，對(duì)體液免疫功能的發(fā)揮起重要作用，脾臟是機(jī)體最大的外周免疫器官，可清除機(jī)體衰老死亡的紅細(xì)胞和血液中的大部分抗原，免疫器官的相對(duì)重量被認(rèn)為是一種反映動(dòng)物機(jī)體免疫機(jī)能的重要指標(biāo)。色氨酸作為褪黑素的前體可促進(jìn)雛鴨免疫器官的生長(zhǎng)發(fā)育，提高機(jī)體的免疫力。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加0.04%的色氨酸可顯著提高蛋雛鴨脾臟指數(shù)，添加0.06%的色氨酸可顯著提高胸腺指數(shù)。張括等[13]研究表明，在日糧中添加0.05%的色氨酸，顯著增加育成鴨胸腺、法氏囊和脾臟免疫器官重量，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。Pertsov[14]報(bào)道，在正常狀態(tài)下給予大鼠褪黑素，能增加胸腺和脾臟重量，在應(yīng)激狀態(tài)下能對(duì)抗應(yīng)激所致的胸腺萎縮。由此可見(jiàn)，適宜劑量的色氨酸可促進(jìn)雛鴨免疫器官的發(fā)育。

4 結(jié)論

①飼糧中添加0.04%的色氨酸顯著提高蛋雛鴨的日增重、日采食量。飼糧中過(guò)高或過(guò)低的色氨酸含量不利于蛋雛鴨生長(zhǎng)發(fā)育；0.04%的色氨酸可顯著提高蛋雛鴨脾臟指數(shù)，添加0.06%的色氨酸可顯著提高蛋雛鴨胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。

② 飼料中添加0.02%、0.04%色氨酸,有提高SOD、T-AOC、GSH-Px活性、降低MDA含量的作用。

③根據(jù)以上結(jié)論，飼料中添加0.04%的色氨酸對(duì)改善蛋雛鴨生長(zhǎng)性能、提高機(jī)體抗氧化能力、促進(jìn)免疫器官發(fā)育的效果最好。