黃衛(wèi)平，程 曉

（1.四川省涼山州畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究所，四川 西昌 615042；2.四川省涼山州祖代種豬場，四川 西昌 615042）

口蹄疫是對養(yǎng)豬業(yè)危害較嚴(yán)重的一類疫病。我國一般采取強(qiáng)制免疫的方式對其進(jìn)行預(yù)防與控制。但即使規(guī)?；i場，疫苗免疫后產(chǎn)生的抗體水平也有良莠不齊的現(xiàn)象，如何確定仔豬免疫程序，使仔豬對口蹄疫病毒具有理想的保護(hù)效果，是所有豬場疫病防治的關(guān)鍵，因此研究仔豬母源抗體的獲得方式，仔豬體內(nèi)母源抗體的持續(xù)時(shí)間，仔豬不同免疫程序的免疫效果對養(yǎng)豬生產(chǎn)具有極其重大的意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)豬及選用的疫苗

1.1.1 疫苗 豬口蹄疫O型滅活疫苗（中農(nóng)威特公司生產(chǎn)，批號：0803079J）。

1.1.2 試驗(yàn)豬 將涼山州祖代種豬場2010年1～6月間15頭健康母豬所產(chǎn)的163頭仔豬作為試驗(yàn)對象，分為6組（試驗(yàn)1組為對照組），執(zhí)行以下免疫程序：

1.2 樣品采集 仔豬血清采集：按試驗(yàn)要求于0、3、7日齡～147日齡間在乳豬、仔豬前肢靜脈采血，然后分離血清于-20℃冰箱保存。

1.3 檢測與分析方法

1.3.1 血清中口蹄疫抗體的檢驗(yàn)方法 采用ELISA方法，按照武漢某動物生物制品有限公司的試劑盒操作說明完成。用酶標(biāo)儀讀取OD值，口蹄疫OD值≥0.4為陽性，＜0.4為陰性。國家標(biāo)準(zhǔn)要求口蹄疫抗體保護(hù)率≥70%。

1.3.2 數(shù)據(jù)分析 采用Excel軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示；兩組間抗體離散度差異性的分析采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 仔豬母源抗體的獲得及在體內(nèi)的持續(xù)時(shí)間 對6個(gè)組163頭仔豬血清中口蹄疫抗體的檢測顯示，在出生未哺乳前仔豬血清口蹄疫抗體全呈陰性，哺乳后1 d在血清檢測中發(fā)現(xiàn)了明顯的口蹄疫抗體（見柱形圖 1）。

圖1 哺乳前后仔豬體內(nèi)口蹄疫抗體柱形圖

試驗(yàn)1組26頭仔豬在77d里不進(jìn)行任何免疫，其血清抗體水平在7日齡左右達(dá)到最高；35日齡后隨著日齡的增加，母源抗體逐漸消退（期間還有一頭仔豬死亡）；在63日齡左右，有40%的仔豬喪失母源保護(hù)力，但仍有部分仔豬的母源抗體可持續(xù)到77日齡以后（見表 1）。

表1 對照組仔豬母源抗體的變化情況

2.2 免疫時(shí)間對仔豬的影響 試驗(yàn)1組不作任何免疫的仔豬，其體內(nèi)的抗體水平是持續(xù)下降的。試驗(yàn)2組的仔豬只在35日齡進(jìn)行一次1頭份（2mL）口蹄疫疫苗免疫，其仔豬血清在63～77日齡時(shí)檢測到較高的免疫抗體（見表2）；試驗(yàn)3組也只在49日齡進(jìn)行一次1頭份（2 mL）口蹄疫疫苗免疫，其仔豬血清在81～95日齡檢測到較高的免疫抗體（見表3）。這表明，不管在35日齡還是49日齡對仔豬進(jìn)行口蹄疫疫苗首免，無論仔豬體內(nèi)母源抗體水平是否完全消失，在免疫后21 d，仔豬體內(nèi)的免疫抗體都有明顯的上升趨勢，并在免疫后28d血清抗體值達(dá)到最高。

表2 試驗(yàn)2組（31頭仔豬）35日齡免疫1次后體內(nèi)抗體水平變化

表3 試驗(yàn)3組（28頭）49日齡免疫1次后體內(nèi)抗體水平變化

2.3 免疫劑量對仔豬的影響 試驗(yàn)4組和試驗(yàn)5組采用不同劑量的口蹄疫疫苗在35日齡對仔豬進(jìn)行免疫，其免疫結(jié)果與2組對比（見表4）發(fā)現(xiàn)：仔豬體內(nèi)的抗體水平隨著疫苗免疫劑量的增加而上升，其中2頭份（4mL）劑量免疫組與1頭份（2mL）劑量免疫組的差異極顯著；而且不同劑量組仔豬體內(nèi)的抗體水平皆在免疫后3周開始升高，4周達(dá)到高峰，119日齡后抗體保護(hù)率降至70%以下，其中第4組在133日齡的抗體保護(hù)率只有52%，第5組在133日齡的抗體保護(hù)率也只有54.2%，明顯低于國家規(guī)定的口蹄疫疫苗抗體保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)；同時(shí)，我們也發(fā)現(xiàn)，第5組的仔豬免疫抗體水平雖較高，但抗體離散度與第2組相比明顯增大，部分仔豬血清抗體水平為“+++”，呈高免狀態(tài)。經(jīng)t檢驗(yàn)，除63日齡外其余各組的差異極顯著。對各組離散度進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)采用1.5倍（3mL）劑量免疫的第4組的效果比較理想。

2.4 免疫次數(shù)對仔豬的影響 試驗(yàn)6組仔豬在第35日齡和49日齡分別采用1頭份（2 mL）和1.5頭份（3 mL）口蹄疫疫苗進(jìn)行2次免疫，將其體內(nèi)抗體水平變化與試驗(yàn)2組比較（見表5）發(fā)現(xiàn)：進(jìn)行2次免疫的試驗(yàn)6組仔豬體內(nèi)的口蹄疫抗體水平在首免21 d后開始上升，28d后達(dá)到最高，但133日齡后仍維持在較高的水平，并且抗體離散度低于35%，整齊度較好；147日齡時(shí)抗體水平仍大于70%，161日齡后抗體保護(hù)率還有41.4%。

表4 口蹄疫疫苗不同免疫劑量組的抗體水平對比表

表5 口蹄疫疫苗不同免疫次數(shù)組的抗體水平對比表

3 分析與結(jié)論

3.1 初生仔豬遵守被動免疫傳遞規(guī)律 豬屬上皮絨毛膜性胎盤動物，胎兒不能從母體獲得抗體，新生仔豬只能通過吸收初乳來獲得母源抗體，建立被動免疫系統(tǒng)，提高自身免疫水平，抵抗外界病原菌的入侵。這就是母源抗體的轉(zhuǎn)移和幼畜被動免疫系統(tǒng)的建立機(jī)制。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，仔豬出生當(dāng)天血清中的口蹄疫抗體呈陰性，哺乳后3～7日齡達(dá)到峰值。35日齡后逐漸下降，這與殷紅、單虎等的報(bào)道一致，再一次驗(yàn)證了豬的被動免疫傳遞規(guī)律。因此，規(guī)?；i場必須對基礎(chǔ)母豬群的免疫狀態(tài)進(jìn)行監(jiān)測，確定母源抗體對新生仔豬的保護(hù)程度，以便制定與實(shí)施仔豬的免疫程序。母源抗體堅(jiān)強(qiáng)時(shí)按我們的試驗(yàn)結(jié)果確定仔豬的免疫程序；如果母源抗體不堅(jiān)強(qiáng)，則必須對仔豬進(jìn)行超前免疫。

3.2 仔豬口蹄疫的首免時(shí)間應(yīng)在35日齡為宜 在母源抗體堅(jiān)強(qiáng)的狀態(tài)下，仔豬體內(nèi)的抗體水平有自己的消長規(guī)律，從35日齡開始下降，63日齡降到60%以下，77日齡后降至24%。而仔豬首次免疫后抗體的產(chǎn)生需要21～28d，如果顧慮母源抗體對仔豬免疫效果的干擾而等到49日齡后進(jìn)行首免，那么仔豬在63～77日齡間會出現(xiàn)一個(gè)免疫空白期。因此，仔豬口蹄疫的首次免疫時(shí)間應(yīng)安排在35日齡左右，既考慮了母源抗體的干擾因素，又回避了仔豬免疫空白期，從試驗(yàn)結(jié)果看，免疫效果也比較理想。

3.3 仔豬應(yīng)在35、49日齡進(jìn)行兩次口蹄疫疫苗的免疫 試驗(yàn)1組不進(jìn)行任何免疫，仔豬體內(nèi)的抗體水平呈持續(xù)下降趨勢；35日齡進(jìn)行1次免疫的試驗(yàn)2組，首免后會有一個(gè)抗體水平的上升期，抗體的保護(hù)時(shí)間可以持續(xù)到119日齡；在56日齡進(jìn)行2次免疫的試驗(yàn)6組仔豬，其體內(nèi)的抗體水平可以維持到147日齡左右，并且抗體離散度比較均衡，這對養(yǎng)豬生產(chǎn)來說是一個(gè)理想狀態(tài)，意味著肥豬出欄前不用再次進(jìn)行口蹄疫疫苗的免疫。但豬場中6月齡轉(zhuǎn)群的后備母豬和沒有及時(shí)出欄的肥豬，日齡超過147d的應(yīng)根據(jù)疫情威脅情況進(jìn)行口蹄疫滅活疫苗的第3次免疫。

3.4 仔豬口蹄疫首免與二免的劑量分別以2mL、3mL為宜 試驗(yàn)組仔豬體內(nèi)的口蹄疫免疫抗體水平隨著疫苗劑量的加大而升高，但其產(chǎn)生和衰減的時(shí)間各試驗(yàn)組間是一致的，并且采用1頭份劑量和1.5頭份劑量免疫，仔豬體內(nèi)的抗體保護(hù)率均能達(dá)到96.6%以上。各組仔豬體內(nèi)的抗體離散度表現(xiàn)出極大的差異性，尤其是試驗(yàn)5組的部分仔豬有高免現(xiàn)象，說明大劑量地使用疫苗，短期內(nèi)會提高仔豬的保護(hù)力。但規(guī)?；i場種豬生產(chǎn)是持續(xù)和有規(guī)律的，這就要求同期豬群的抗體水平處于一個(gè)均衡的水平，以便長期而有規(guī)律地執(zhí)行免疫程序，從整體上抵御口蹄疫病毒的入侵。第5組試驗(yàn)豬的抗體水平雖高，但其離散度過大，部分仔豬呈高免狀態(tài)。這種抗體水平的不均衡性，會給規(guī)?；i場整體免疫程序?qū)嵤碛绊?，尤其會對仔豬口蹄疫二免造成很大的干擾，使豬群極易在受疫病威脅的地區(qū)或季節(jié)暴發(fā)口蹄疫，給生產(chǎn)帶來嚴(yán)重影響。因此，從成本角度分析，生產(chǎn)中首次免疫使用1頭份（2 mL）劑量，二免采用1.5頭份（3mL）劑量是比較經(jīng)濟(jì)和科學(xué)的。

由于試驗(yàn)豬群數(shù)量有限，前期試驗(yàn)結(jié)果與陳方志等的結(jié)果大體一致，所以本試驗(yàn)沒有對仔豬口蹄疫疫苗2次免疫的間隔時(shí)間和劑量作對比試驗(yàn)，請規(guī)?；i場參考執(zhí)行此免疫程序。

參與文獻(xiàn)：

[1] 黃衛(wèi)平，龐繼光.母豬豬瘟、口蹄疫血清抗體與乳中母源抗體的相關(guān)性分析及其免疫程序制定[J].四川畜牧獸醫(yī)，2011，38（12）：23-25.

[2] 殷紅，徐坤，單虎，等.初乳對新生仔豬免疫功能的影響[J].萊陽農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002.

[3]單虎.初乳在新生仔豬被動免疫轉(zhuǎn)移和代謝信息傳遞中的作用研究[D].南京農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士論文，1995.

[4] 陳方志.豬口蹄疫O型合成肽疫苗抗體水平檢測[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009，30.