馬玲，王漢卿，冷曉紅，賀凱，王英華#（.寧夏回族自治區(qū)藥品檢驗(yàn)所，銀川75000；.寧夏醫(yī)科大學(xué)，銀川 750004；.寧夏職業(yè)技術(shù)學(xué)院，銀川 75000）

苦豆子（Sophora alopecuroides L.）為豆科槐屬植物，屬中旱生植物，根系發(fā)達(dá)，有極好的防沙固沙作用，同時(shí)又是重要的藥用植物資源，具有清熱解毒、止痢的功效，用于治療咽喉腫痛、肺熱咳嗽等癥[1～3]。其藥用部位為花期的干燥地上部分，稱為“苦豆草”，以及成熟的果實(shí)，稱為“苦豆子”。自20世紀(jì)70年代以來，已有學(xué)者以苦豆子為原料提取出了苦參堿、氧化苦參堿等成分，并制成了苦參素膠囊、婦炎栓等制劑。但各版《中國藥典》均未收載苦豆子藥材，也未見有關(guān)苦豆子藥材質(zhì)量研究的報(bào)道。筆者參考有關(guān)文獻(xiàn)[4～8]，采用薄層色譜（TLC）法對苦豆子藥材進(jìn)行定性鑒別，用高效液相色譜（HPLC）法測定藥材中氧化苦參堿和槐定堿的含量，為藥材的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

TU-1901雙光束紫外-可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；HPLC儀，包括1100 LC色譜工作站、G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A柱溫箱、G1315B二極管陣列檢測器、G1311A四元泵、G1379A脫氣機(jī)（美國Agilent公司）；JU-1000超聲儀（杰恩普超聲設(shè)備有限公司）。

苦豆子藥材采于寧夏鹽池縣花馬池鎮(zhèn)等地，共10批，經(jīng)寧夏回族自治區(qū)藥品檢驗(yàn)所邢世瑞主任藥師鑒定為豆科槐屬植物苦豆子S.alopecuroides L.的干燥成熟果實(shí)?；倍▔A、氧化苦參堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為110805-2003、060780-2004）；乙腈、磷酸二氫鉀為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別

2.1.1 槐定堿的TLC鑒別 取10批藥材粉末各4 g，分別加濃氨試液浸潤12 h以上，加甲醇20 mL超聲（功率：100 W，頻率：40 kHz）提取40 min，濾過，濾液作為供試品溶液；另取槐定堿對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作為對照品溶液。照TLC法[9]試驗(yàn)，吸取上述2種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-乙酸乙酯（8∶3∶3）為展開劑，置氨蒸汽飽和的層析缸內(nèi)，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液，日光下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)?；倍▔A的TLC見圖1。

2.1.2 氧化苦參堿的TLC鑒別 取氧化苦參堿對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作為對照品溶液；以“2.1.1”項(xiàng)下供試品溶液作為本試驗(yàn)的供試品溶液。照TLC法[9]試驗(yàn)，吸取上述2種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液（5∶0.6∶0.3）10 ℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液，日光下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。氧化苦參堿的TLC見圖2。

圖1 槐定堿的TLCFig 1 TLC of sophridine

圖2 氧化苦參堿的TLCFig 2 TCLof dxymatine

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Waters X-Bridge C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動(dòng)相：乙腈-0.05 mol·L－1的磷酸二氫鉀溶液（2.0 mL·L－1三乙胺）＝10∶90；檢測波長：205 nm；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：25℃。理論板數(shù)按氧化苦參堿色譜峰計(jì)算應(yīng)不低于4000，槐定堿、氧化苦參堿和樣品中的其他組分色譜峰均達(dá)到了基線分離，槐定堿和氧化苦參堿與其相鄰色譜峰的分離度均＞1.5。色譜見圖3。

圖3 高效液相色譜圖Fig 3 HPLC chromatograms

2.2.2 混合對照品溶液的制備 取槐定堿、氧化苦參堿對照品各適量，加甲醇制成含槐定堿0.0871 mg·mL－1和含氧化苦參堿0.1794 mg·mL－1的溶液，作為混合對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品粉末約0.5 g，精密稱定，置錐形瓶中，加10%NaOH浸潤12 h后，精密加入甲醇20 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率：250 W，頻率：33 kHz）40 min，放置至室溫，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45μm的濾膜濾過，即得。

2.2.4 線性關(guān)系考察 精密量取槐定堿（0.1741 mg·mL－1）和氧化苦參堿（0.3587 mg·mL－1）的混合對照品溶液2、3、4、5、6、10 mL，分別置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣10 μL，按上述色譜條件測定。分別以槐定堿、氧化苦參堿進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得槐定堿、氧化苦參堿的回歸方程分別為Y＝－93.592+41.778X（r＝0.9997）、Y＝－265.525+40.354X（r＝0.9991）。結(jié)果表明，槐定堿、氧化苦參堿的進(jìn)樣量分別在34.82～174.10、71.74～358.70 μg范圍內(nèi)與各自峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一混合對照品溶液10 μL，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，測定峰面積。結(jié)果，槐定堿、氧化苦參堿峰面積積分值的RSD分別為0.8%、0.6%（n均為5），表明儀器精密度良好。

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批樣品適量，共6份，分別按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測定。結(jié)果，樣品中槐定堿的平均含量為0.58%，RSD＝2.6%（n＝6）；氧化苦參堿的平均含量為1.12%，RSD＝2.8%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液適量，按上述色譜條件分別于0、2、4、8、12、16、20 h進(jìn)樣測定。結(jié)果，槐定堿、氧化苦參堿峰面積積分值的RSD分別為1.4%、1.9%（n均為7），表明供試品溶液在20 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的苦豆子藥材適量，共6份，置錐形瓶中，加10%NaOH浸潤12 h后，分別精密加入混合對照品溶液和甲醇各適量至20 mL，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測定，并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 1 Results of recovery tests

2.2.9 樣品含量測定 分別取10批不同產(chǎn)地的樣品粉末約0.5 g，精密稱定，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測定，用外標(biāo)法計(jì)算槐定堿、氧化苦參堿含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（%，n＝3）Tab 2 Results of content determination of samples（%，n＝3）

3 討論

3.1 提取條件的選擇

筆者分別采用了（1）10%NaOH浸潤12 h以上后，加入甲醇20 mL超聲提取40 min；（2）10%NaOH浸潤12 h以上后，加入氯仿20 mL超聲提取40 min，濾過，精密量取濾液10 mL至蒸發(fā)皿中蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，濾過；（3）10%NaOH浸潤12 h以上后，加入65%乙醇20 mL超聲提取40 min等提取方法進(jìn)行提取。結(jié)果，用（1）法得到的色譜峰數(shù)目多、面積大、分離效果好。

3.2 流動(dòng)相的選擇

分別選擇了0.05 mol·L－1的磷酸二氫鉀-甲醇（83∶17）、甲醇-水-三乙胺（55∶45∶0.2）、甲醇-乙腈-0.02 mol·L－1的醋酸銨緩沖液（0.5 mL·L－1的三乙胺）（5∶19∶79）、乙腈-0.05 mol·L－1的磷酸二氫鉀溶液（2.0 mL·L－1的三乙胺）（10∶90）等流動(dòng)相進(jìn)行檢測。結(jié)果，以乙腈-0.05 mol·L－1的磷酸二氫鉀溶液（2.0 mL·L－1三乙胺）＝10∶90為流動(dòng)相，樣品分離效果好，基線穩(wěn)定。

3.3 檢測波長的選擇

分別取適宜濃度的2種生物堿的對照品溶液在190～400 nm波長范圍進(jìn)行掃描。結(jié)果，2種生物堿均在205 nm波長處有最大吸收。

綜上，所建標(biāo)準(zhǔn)可用于苦豆子藥材的質(zhì)量控制。

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