黃琳蕓 郭力城 余勝民 陳少鋒 楊東愛(ài) 廖安妮

（廣西民族醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530001）

葫蘆鉆為天南星科植物石柑子Pothos chinensis(Raf.)Merr.的全草，性微溫，味苦辛，無(wú)毒，入心、胃二經(jīng)，具有清熱，解毒，祛風(fēng)濕的功效。是瑤族傳統(tǒng)治癌“打藥”【1】。前期對(duì)葫蘆鉆進(jìn)行抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，葫蘆鉆提取物具有抗腫瘤作用【2】。為闡明葫蘆鉆的抗腫瘤作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)對(duì)葫蘆鉆不同提取部位在體外進(jìn)行了抗腫瘤活性研究。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 受試樣品：葫蘆鉆不同提取部位的制備：葫蘆鉆全草粉碎，75%乙醇回流提取3次，回收乙醇至無(wú)醇味（乙醇總提物）后加水混懸，水液分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取得石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物?；厥杖軇?，提取物干燥至干，均用含有DMSO的培養(yǎng)基溶解，配成濃度為400μg·mL-1溶液，置于-20℃冰箱密閉避光保存。臨用前用不含血清和抗生素的RPMI1640液稀釋至所需濃度，DMSO最終濃度小于0.01%。

1.2 腫瘤細(xì)胞株：人胃癌細(xì)胞株SGC7901購(gòu)自上海細(xì)胞生物研究所細(xì)胞庫(kù)。

1.3 試劑：MTT為美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品 ；FBS（胎牛血清）為杭州四季青生物工程材料有限公司產(chǎn)品，批號(hào)090306；RPMI1640培養(yǎng)基為GIBCO分裝，LOT.NO 1397535；DMSO(二甲基亞砜)購(gòu)自天津匯英化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20030526。

1.4 細(xì)胞培養(yǎng)：腫瘤細(xì)胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基在37℃，10%CO2條件下培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.5 實(shí)驗(yàn)儀器：Thermo Forma型CO2培養(yǎng)箱，美國(guó)產(chǎn)；Thermo Forma型酶標(biāo)儀；LEICA倒置顯微鏡，德國(guó)產(chǎn)；Corning型96孔板，美國(guó)產(chǎn)；Millpore超純水儀，美國(guó)產(chǎn)；HV-50全自動(dòng)高壓滅菌器，日本產(chǎn)；DLE560型超凈工作臺(tái)，荷蘭產(chǎn)；BP211d型萬(wàn)分之一克電子天平，德國(guó)賽多利斯產(chǎn)；磁力攪拌器，意大利IKA產(chǎn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 RPMI1640完全培養(yǎng)液的配置：含RPMI1640培養(yǎng)基、3%谷氨酰胺、卡那霉素 750μg·mL-1、10%FBS（臨用前加）。

2.2 體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)（MTT法）：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA消化后，用培養(yǎng)液稀釋。在96孔培養(yǎng)板中每孔加入200μL(含有5000個(gè)/ml腫瘤細(xì)胞)10%FBS的RPMI1640培養(yǎng)液，置37℃，10%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，棄去舊培養(yǎng)液。實(shí)驗(yàn)組分別加入新的培養(yǎng)液190μL∕孔，然后加入不同濃度的葫蘆鉆各提取物，10μL∕孔，使終濃度分別為 12.5、25、50、100μg·mL-1，對(duì)照組則加入200μL∕孔新的培養(yǎng)液。每組 3平行孔，置37℃，10%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4d后，棄去上清液，每孔加入200μL新鮮配制的含0.2mg·mL-1MTT的無(wú)血清培養(yǎng)液，37℃繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄上清液，加入200μL∕孔DMSO，振蕩混勻后，在酶標(biāo)儀上以試驗(yàn)波長(zhǎng)為570nm，參比波長(zhǎng)為450 nm測(cè)定OD值，按下式計(jì)算藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率：腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率（%）=（1-實(shí)驗(yàn)組平均OD值∕對(duì)照組平均OD值）×100%[3]。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

MTT法測(cè)定葫蘆鉆不同提取部位對(duì)SGC7901腫瘤細(xì)胞株生長(zhǎng)的抑制。結(jié)果見(jiàn)表1。

結(jié)果顯示，葫蘆鉆的乙酸乙酯部位和正丁醇部位對(duì)SGC7901腫瘤細(xì)胞株有一定的抑制作用，并與濃度呈正相關(guān)作用。

表1 葫蘆鉆不同提取部位對(duì)SGC7901腫瘤細(xì)胞的抑制作用（%）

4 討論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)采用MTT法研究葫蘆鉆不同提取部位體外抗腫瘤作用。結(jié)果顯示葫蘆鉆的乙酸乙酯和正丁醇部位對(duì)SGC7901體外培養(yǎng)細(xì)胞有一定的抑制作用，其抑制率隨著藥物濃度增加而相應(yīng)增高。石油醚部位的細(xì)胞毒作用不明顯，可能石油醚部位通常為去除鞣質(zhì)、葉綠素等干擾成分。提示葫蘆鉆提取物乙酸乙酯和正丁醇部位在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)具有抑制作用。

近年來(lái)，從天然植物中尋找新的抗腫瘤藥物已成為新藥研究的主要發(fā)展方向之一。本研究為揭示葫蘆鉆抗腫瘤作用及其物質(zhì)基礎(chǔ)，實(shí)現(xiàn)藥材可持續(xù)開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1]戴斌，丘翠嫦，李釗東，等.瑤醫(yī)用藥品種調(diào)查報(bào)告[J].中草藥，1997，28（12）：746～749.

[2]黃琳蕓，余勝民，鐘鳴，等.瑤藥葫蘆鉆提取物抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007,18（7）：1590.

[3]張均田.現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)方法（上冊(cè)）［M］.北京醫(yī)科大學(xué)中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1998，818.