趙 英 王惠敏

(內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010017)

本品主要由紅花、黃精、石膏、牛黃、瞿麥、香青蘭等7味藥材組成。具有清肝熱作用，用于肝熱目赤、黃疸、肝區(qū)疼痛、發(fā)燒口渴、頭痛等，收載衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙成分冊(cè)〔1〕。

1 儀器、試劑及樣品

1100 型高效液相色譜儀(美國(guó) Agilentg公司制造);TJ－912色譜分析平臺(tái)。非羅門(mén) Kromasil C18柱(200×4.6 mm，5μm)。超聲波清洗機(jī)(B2500－MT，上海必能信超聲波清洗機(jī)有限公司);BT224S電子分析天平(北京賽多利斯儀器公司)

甲醇、乙腈:色譜純，由天津協(xié)和昊鵬試劑公司生產(chǎn);磷酸為分析純;水為三蒸水。羥基紅花黃色素A(含量測(cè)定用，批號(hào)111637－200503)由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。額力根－7(批號(hào)20060805，20020712，20080301)由內(nèi)蒙古中蒙醫(yī)醫(yī)院蒙藥制劑中心出品。

2 方法與結(jié)

2.1 色譜條件:色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，本試驗(yàn)用非羅門(mén) Kromasil C18柱(200 ×4.6 mm，5μm);流動(dòng)相:甲醇－乙腈 –磷酸－水(30:5:0.2:110);流速:1mL·min－1;測(cè)定波長(zhǎng)403nm;柱溫30℃。以上條件均可基線分離樣品中羥基紅花黃色素A，按理論板數(shù)峰計(jì)算應(yīng)不低于 3000〔2〕。

2.2 測(cè)定溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取羥基紅花黃色素A對(duì)照品6.25mg，置25mL量瓶?jī)?nèi)，加25%甲醇溶解至刻度，取對(duì)照品溶液 0.1、0.5、1、2、4、8 mL，分別加到 10 mL 棕色量瓶容量瓶?jī)?nèi)，加25%甲醇至刻度。

2.2.2 供試品溶液的制備:取本品(批號(hào)20060805)，粉碎，研細(xì)，過(guò)100目篩，精密稱重25mg，置50mL具塞錐形瓶中，精密加25%甲醇10mL，稱定重量，超聲處理(功率100W，頻率40kHz)40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜止，濾過(guò)，即的。

2.2.3 陰性試驗(yàn):依照樣品制備方法制備不含紅花的額力根－7陰性制劑，依照色譜條件測(cè)定，陰性對(duì)照品在羥基紅花黃色素A保留時(shí)間內(nèi)無(wú)干擾峰出現(xiàn)，表明其它藥材對(duì)羥基紅花黃色素A的測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)圖1、2、3。

2.3 線性關(guān)系考察:精密吸取對(duì)照品溶液10μL，按色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，對(duì)照品含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，作回歸分析?；貧w方程:Y=Y=2337653χ －31123，r=0.999。羥基紅花黃色素 A 在 0.0025～0.2mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn):精密吸取同一供試品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定羥基紅花黃色素A，峰面積RSD為0.5%。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn):取同批次樣品，按2.2項(xiàng)下的方法制備樣品5 份。測(cè)定結(jié)果，平均含量為1.34mg·g－1，RSD 為1.4%

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液10μL，分別于樣品制備后第0、2、8、12h測(cè)定羥基紅花黃色素A峰面積，峰面積值RSD為0.8%。樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗(yàn):取已知羥基紅花黃色素A含量的額力根－7樣品，置10mL容量瓶?jī)?nèi)，分別精密加入羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液，加25%甲醇至刻度，溶液轉(zhuǎn)入置50mL具塞錐形瓶中，按供試品方法制備，提取，過(guò)濾。按色譜條件測(cè)定，平均回收率與RSD為102.7%、2.9%。2.8 樣品測(cè)定:分別吸取對(duì)照品溶液與樣品溶液10μL，依上述色譜條件測(cè)定3批樣中羥基紅花黃色素A含量，3批樣品分別為 1.35、1.22、1.16 mg·g－1，平均含量分別為1.24mg·g－1。

表1 額力根－7中羥基紅花黃色素A回收率測(cè)定

3 討論

本試驗(yàn)的提取方法與“索氏”提取法進(jìn)行對(duì)比測(cè)定，“索氏”法樣中羥基紅花黃色素A溶出時(shí)間長(zhǎng)，而超聲處理方法溶出羥基紅花黃色素A方法簡(jiǎn)便、省時(shí)。提取時(shí)間測(cè)定，樣品超聲處理40min后羥基紅花黃色素A含量不再增加。耐用性試驗(yàn) ，用 Agilent XDB－C8柱 (150×4.6 mm，5μm)在本試驗(yàn)條件下測(cè)定樣品，羥基紅花黃色素A基線分離。3批樣品測(cè)定表明，羥基紅花黃色素A含量差異較大，可能藥材質(zhì)量或投料制備有關(guān)。采用HPLC法測(cè)定額力根－7羥基紅花黃色素A指標(biāo)性成分，可作為該藥質(zhì)量控制的方法之一。

〔1〕國(guó)家藥典委員會(huì)編輯.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙藥分冊(cè)〔S〕.1998，167

〔2〕國(guó)家藥典委員會(huì)編輯.中國(guó)藥典一部〔S〕.中國(guó)醫(yī)藥出版社，2010，143