陳紹輝，胥洪冰，趙海沄，馬紅霞

（1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春130118；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春130031）

三子湯處方原于三子散，是常用的蒙藥，由訶子、川楝子、梔子三味中藥組成，最早見(jiàn)于《四部醫(yī)典》，現(xiàn)收開(kāi)載于《中華人民共和國(guó)獸藥典》（2010年版），具有清熱、解毒、涼血、祛濕、調(diào)和、止血等功效，臨床用于治療清熱解毒等癥，療效確切［1］。處方中3種藥物均具有抗菌、抑制胃腸運(yùn)動(dòng)等作用［2］，目前對(duì)三子散的報(bào)道多局限于臨床應(yīng)用、化學(xué)成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方面，關(guān)于三子散的抑菌作用文獻(xiàn)罕見(jiàn)報(bào)道。我們采用血清藥理學(xué)試驗(yàn)方法，觀察了三子湯對(duì)大腸桿菌、志賀氏痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌4種細(xì)菌的抑菌作用和給藥后含藥血清的最佳采血時(shí)間。報(bào)告如下。

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 大耳白兔，購(gòu)自長(zhǎng)春高新醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心。

1.2 菌種 大腸桿菌、志賀氏痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌，菌種，購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.3 藥品 瓊脂粉、胰蛋白胨、酵母抽提物，均為北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)；氯化鈉，購(gòu)自長(zhǎng)春市科隆生物工程公司；訶子、川楝子、梔子，均購(gòu)自長(zhǎng)春醫(yī)藥大廈。

1.4 儀器 多功能真空濃縮機(jī)（YZN－50），購(gòu)自北京東華原醫(yī)療設(shè)備有限責(zé)任公司；吉爾森移液器，購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

2 試驗(yàn)方法

2.1 試驗(yàn)準(zhǔn)備

2.1.1 三子湯劑的制備 處方取自《中華人民共和國(guó)獸藥典》（2005年版）：訶子200g，川楝子200g，梔子200g，浸泡9h，多功能真空濃縮機(jī)中60℃，620mmHg～680mmHg壓力下，煎煮3h；低溫濃縮到2g／mL，真空包裝，備用。

2.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 取大耳白兔18只，隨機(jī)分為兩組，分別為試驗(yàn)組和對(duì)照組。分別禁食12h后，稱(chēng)重，編號(hào)。試驗(yàn)組灌胃給藥1.4g／kg體重，每日2次，連續(xù)3d，最后1次給藥后0.5、1、2、4h采血2 mL；對(duì)照組同時(shí)取血2mL，分別37℃靜止24h，分離血清，備用。

2.1.3 細(xì)菌的準(zhǔn)備 將細(xì)菌分別在肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h，放入4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.4 濾紙片的準(zhǔn)備 將普通定性濾紙用打孔器打成直徑6mm的圓形紙片，放入高壓鍋中121℃、20 min滅菌，60℃干燥，備用。

2.2 試驗(yàn)方法 在超凈工作臺(tái)內(nèi)將滅菌好的培養(yǎng)基趁熱倒入無(wú)菌的培養(yǎng)皿，厚約5mm，水平靜止凝固，加入菌液100μL，用L棒均勻涂布，用無(wú)菌鑷子分別夾取濾紙片，均勻放置在涂完菌的瓊脂平板上，分別為0.5、1、2、4h的含藥血清紙片及對(duì)照血清紙片，37℃培養(yǎng)24h。每組兩個(gè)重復(fù)。

3 結(jié)果

3.1 三子湯含藥血清不同時(shí)間對(duì)幾種細(xì)菌的抑制結(jié)果 見(jiàn)表1。

由表1可知，大腸桿菌0.5h劑量組與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異，1h、4h組有顯著差異，2h組有極顯著差異，志賀氏痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌各劑量組與對(duì)照組相比，差異極顯著。

以上所得數(shù)據(jù)均用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件包處理，采用S－N－K法進(jìn)行多重差異比較。

3.2 三子湯含藥血清抑菌作用擬合曲線(xiàn) 為研究三子湯含藥血清體內(nèi)抑菌作用隨時(shí)間變化規(guī)律，采用SPSS12.0軟件進(jìn)行曲線(xiàn)擬合，對(duì)不同菌種找出最佳擬合曲線(xiàn)，擬合方程見(jiàn)表2。

通過(guò)擬合曲線(xiàn)可以看出，三子湯含藥血清對(duì)大腸桿菌、志賀氏痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌在2 h表現(xiàn)最強(qiáng)的抑菌作用，則在給藥后2h為最佳采血時(shí)間。

表1 三子湯含藥血清不同時(shí)間抑菌效果（抑菌圈直徑mm）

表2 三子湯含藥血清抑菌作用最佳擬合曲線(xiàn)方程

4 討論

本試驗(yàn)三子湯采用低溫高壓煎煮法，在60℃620 mmHg～680mmHg壓力下，最大程度的保留中藥原有成分的有效性，避免了高溫對(duì)中藥成分的破壞。處方中訶子、川楝子、梔子三味中藥的抑菌作用分別已有文獻(xiàn)報(bào)道［4－6］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，三子湯對(duì)大腸桿菌、志賀氏痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌有抑菌作用，且最佳采血時(shí)間為給藥后2h。

最佳擬合曲線(xiàn)圖如圖1。

血清藥理學(xué)是近10年興起的一種藥理學(xué)研究方法，即用動(dòng)物的含藥血清進(jìn)行藥理試驗(yàn)，不僅可以反應(yīng)藥物的直接作用，而且可以反應(yīng)出藥物成分的體內(nèi)代謝產(chǎn)物和藥物誘生的機(jī)體內(nèi)源性物質(zhì)的綜合作用。由于中藥成分比較復(fù)雜，粗制劑直接用于體外藥理試驗(yàn)時(shí)，由于各種因素的影響，經(jīng)常造成一些假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果，特別中藥的作用是以中醫(yī)理論為基礎(chǔ)，強(qiáng)調(diào)處方各成分的綜合作用，單純體外試驗(yàn)往往難以取得預(yù)期結(jié)果，難以得到認(rèn)可［3］。血清藥理學(xué)最大程度的模擬了藥物在體內(nèi)的真實(shí)作用，試驗(yàn)結(jié)果更為科學(xué)可靠。

［1］中國(guó)獸藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)獸藥典2005版二部［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2006：402－403.

［2］白金亮，敖銀梅.蒙藥復(fù)方三子湯的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)民族民間醫(yī)藥雜志，2006，81：209－211.

［3］張良，徐立，袁冬萍，等.中藥血清藥理學(xué)方法的研究進(jìn)展［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，18（4）：254－265.

［4］殷網(wǎng)虎.3味中藥對(duì)前列腺主要致病菌抑制作用的觀察［J］.實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床，2003，3（2）：53－54.

［5］李仲興，王秀華，岳云升，等.訶子對(duì)335株臨床菌株的體外抑菌活性的研究［J］.中國(guó)中醫(yī)藥科技，2000，7（6）：393－394.

［6］鄭芙蓉.梔子滴眼液對(duì)家兔細(xì)菌性角膜炎的影響［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2002，22（6）：350－351.