成 進(jìn)，沙依蘭古麗，夏 俊，汪 萍，史 軍，李雁冰，廖 明，任 濤，陸桂麗，阿不都熱合曼，吐?tīng)栠d吐拉克，戴志剛，何 健，初紅軍，賽力克拜

（1.新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所，新疆 烏魯木齊830000；2.新疆野生動(dòng)物疫源疫病監(jiān)測(cè)站，新疆 烏魯木齊830063；3.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，黑龍江 哈爾濱150001；4.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州510642）

禽流感（AI）具有多宿主感染的特性，感染宿主包括人、豬、馬、水貂、貓科動(dòng)物、海洋哺乳動(dòng)物和廣泛的家養(yǎng)鳥(niǎo)類(lèi)［1］。AI的傳播主要是通過(guò)糞－口途徑，這在水禽中傳遞病毒是一個(gè)有效途徑，即脫落的病毒通過(guò)糞便進(jìn)入到水表面［2］。由于被感染的野鳥(niǎo)帶毒卻很少發(fā)病或死亡，往往成為重要的病原攜帶者，隨著候鳥(niǎo)的遷徙，與留鳥(niǎo)及家禽的接觸，而將疫情進(jìn)一步擴(kuò)散。因此，AI的暴發(fā)流行除了與禽肉、蛋產(chǎn)品及貿(mào)易流通因素有關(guān)之外，野生鳥(niǎo)類(lèi)被認(rèn)為是最有可能的傳染來(lái)源之一［3］。

有研究認(rèn)為，濕地和水棲野鳥(niǎo)，例如雁形目和鸻形目是禽流感病毒（AIV）主要的天然儲(chǔ)存者［2，4］。新疆具有豐富的濕地資源，每年都有數(shù)以萬(wàn)計(jì)的遷徙性鳥(niǎo)類(lèi)途徑新疆，并在新疆南北疆地區(qū)的湖泊、水庫(kù)、濕地棲息和繁殖。新疆獨(dú)特的地理位置，使得新疆的野生鳥(niǎo)類(lèi)的遷徙路線處于跨越中亞和歐亞的遷徙路線的一個(gè)關(guān)鍵性的位置上。因此，野生鳥(niǎo)類(lèi)的遷徙對(duì)新疆地區(qū)乃至全國(guó)的AI防控構(gòu)成潛在的威脅和巨大的壓力。雖然，我國(guó)已有研究人員對(duì)14個(gè)省區(qū)進(jìn)行了野生鳥(niǎo)類(lèi)AI的調(diào)查，獲得了重要成果和信息［5］，但是，新疆在野鳥(niǎo)的AI監(jiān)測(cè)與研究方面尚屬空白。因此，我們首次在新疆對(duì)野生鳥(niǎo)類(lèi)開(kāi)展了AI的血清學(xué)監(jiān)測(cè)。

1 材料與方法

1.1 診斷試劑 AI H1～H16亞型標(biāo)準(zhǔn)抗原、陰性和陽(yáng)性血清均由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所提供。

1.2 主要試劑 阿氏液，0.01mol／L的pH 值7.2 PBS，按“高致病性禽流感診斷技術(shù)”國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB／T18936－2003）方法配制。

1.3 1%雞紅細(xì)胞懸液 按照GB／T18936－2003頒布的方法制備1%（V／V）雞紅細(xì)胞懸液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 樣品采集 2009年～2011年在新疆巴音布魯克的博斯騰湖、伊犁昭蘇縣水庫(kù)、阿克蘇柯坪縣遠(yuǎn)郊濕地、阿勒泰福?？h烏倫古湖北面的薩爾胡松鄉(xiāng)鍋底坑濕地、喀什地區(qū)葉爾羌河流域中游處的麥蓋提近郊濕地和莎車(chē)縣近郊濕地、烏魯木齊市安寧渠青格達(dá)湖及濕地的野生鳥(niǎo)類(lèi)采集了血清樣品。采樣方法以誘捕方式捕獲野鳥(niǎo)，翅膀靜脈采血后，對(duì)采樣野鳥(niǎo)進(jìn)行放飛大自然。采集綠頭鴨102份，赤麻鴨67份，赤嘴潛鴨44份，鳳頭潛鴨18份，灰 雁22份，天鵝1份，烏鴉3份，紅隼1份，野鴿1份和斑鶇1份，共計(jì)采集血清樣品260份。

1.5 AI HI抗體檢測(cè)方法 按照GB／T18936－2003頒布的方法檢測(cè)血清樣品的AI HI抗體效價(jià)。陽(yáng)性樣本的標(biāo)準(zhǔn)是抑制4個(gè)血凝素（HA）單位的血凝活性，滴度≥1∶16。

2 結(jié)果

2.1 野鴨類(lèi)樣品檢測(cè)結(jié)果

2.1.1 2009年～2011年共計(jì)采集野鴨類(lèi)血清樣品231份，用AI HI方法檢測(cè)不同年份血清樣品，結(jié)果及分析見(jiàn)圖1和圖2。

結(jié)果顯示，3年共檢出16個(gè)HA亞型，數(shù)據(jù)（平均值）分析表明，H9檢出率最高，達(dá)8.66%；其后依次為 H5、H2、H8、H1、H6、H10、H13、H12和H7（3.03%～7.79%），其余的 HA 亞型檢出率較低，為1.05%～3.16%（0.43%～1.73%）。2009年檢出5個(gè)HA亞型，H8檢出率最高，為15.38%；2010年11個(gè)HA亞型，H5的陽(yáng)性率最高，為14.29%；2011年12個(gè) HA亞型，H9的陽(yáng)性率最高，為15.79%。

2.1.2 對(duì)231份不同品種野鴨的血清樣品檢測(cè)，結(jié)果及分析見(jiàn)圖3。

圖3 不同品種野鴨AIV HI抗體陽(yáng)性率結(jié)果分析

2.2 灰雁血清樣品檢測(cè)結(jié)果 對(duì)灰雁AIV H1～H16血清亞型的監(jiān)測(cè)結(jié)果表明，共檢出8個(gè)血清亞型，其中H13亞型的陽(yáng)性率最高，為40.91%；其后為 H1和 H2（9.09%）；再次之為 H4、H7、H9、H10和 H15（4.55%）；而 H3、H5、H6、H8、H11、H12、H14和H16則為陰性。

2.3 其他野鳥(niǎo)血清樣品檢測(cè)結(jié)果 在2009年采集天鵝血清樣品1份，經(jīng)檢測(cè)H13為陽(yáng)性。在2009年共計(jì)采集烏鴉、斑鶇、野鴿和紅隼等野鳥(niǎo)血清樣品6份，經(jīng)用AI的H1～H16種HI診斷抗原進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果全部為陰性。

3 分析與討論

3.1 禽流感病毒（AIV）感染的禽類(lèi)宿主非常廣泛?，F(xiàn)已證實(shí)AIV的所有血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）亞型（H1－H16和 N1－N9）和大多數(shù) HA／NA組合在野生鳥(niǎo)類(lèi)中儲(chǔ)存［6－7］。鸻形目鳥(niǎo)和雁形目鳥(niǎo)呈全球性分布，還代表幾乎覆蓋全球的AIV宿主種類(lèi)［1－2］。鸻形目主要指海鷗、燕鷗、水鳥(niǎo)等岸禽類(lèi)鳥(niǎo)，雁形目主要指鴨、雁、鵝和天鵝等鴨科類(lèi)鳥(niǎo)。新疆位于歐亞大陸的腹地，每年有大量的雁形目候鳥(niǎo)遷徙，分別在春季3月中下旬至5月和秋季9～10月。雁形目候鳥(niǎo)的涉水行為可使AIV由糞便被排泄在水的表面，有效地將病毒傳染給其他在相同水域飼喂或生活的鴨子。AIV可以在水中依靠溫度、鹽分和pH值保持延長(zhǎng)感染性［8］。。我們對(duì)新疆野鳥(niǎo)的AI血清學(xué)監(jiān)測(cè)樣品主要是以雁形目的鴨科鳥(niǎo)類(lèi)為主，主要有灰雁、綠頭鴨、赤麻鴨、赤嘴潛鴨、鳳頭潛鴨等。

3.2 AI通過(guò)野生鳥(niǎo)類(lèi)在很大的地理范圍潛在傳播，對(duì)公眾和動(dòng)物健康的威脅，使得更加需要對(duì)AIV在野生鳥(niǎo)類(lèi)儲(chǔ)存、循環(huán)的生態(tài)學(xué)信息研究［7］。國(guó)外在野生鳥(niǎo)類(lèi)的AI檢測(cè)已經(jīng)開(kāi)展了多年的研究。有報(bào)道認(rèn)為，在野生鳥(niǎo)中檢測(cè)最多的AIV HA亞型是 H6（17.8%）和 H4（16%），其他亞型有H7、H3、H11、H1、H2、H5、H10、H12、H8、H13、H9和H16，而 H14和 H15從未檢測(cè)到。H13和H16亞型的病毒主要是從鸻形目鳥(niǎo)中獲得［8］。而我們本次研究檢測(cè)到了16個(gè)血清亞型。我們從鴨類(lèi)檢測(cè)到最多的AIV HA亞型是 H9（8.66%），其后依次為 H5、H2、H8、H1、H6、H10、H13、H12和H7（3.03%～7.79%），在鴨的樣品中雖然檢出了其余亞型，但檢出率很低（2%以下）。對(duì)灰雁的血清樣品檢測(cè)結(jié)果表明，H13亞型的陽(yáng)性率最高，為40.91%，其次為H1和H2（9.09%）。與國(guó)外的相關(guān)報(bào)道比較，H13和H16亞型的病毒主要是從鸻形目鳥(niǎo)中獲得［10］，我們則在灰雁的血清學(xué)檢測(cè)證實(shí)了 H13具有較高的陽(yáng)性率（40.91%）。

3.3 我們對(duì)新疆野鳥(niǎo)的AI監(jiān)測(cè)僅從2009年開(kāi)始，檢測(cè)數(shù)據(jù)顯示出不同亞型的AI在不同年份的檢出率差異較大。例如，2009年的樣品中AIV H8亞型的陽(yáng)性率高達(dá)15.38%，到2010年和2011年檢出率卻相當(dāng)?shù)停?%～1.05%），在 AIV H7、H13和H16亞型也存在相同的現(xiàn)象。此外，這3年的監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，我們?cè)?009年檢測(cè)到5種血清亞型，2010年檢測(cè)到11種，2011年檢測(cè)到12種，說(shuō)明野生鳥(niǎo)類(lèi)感染AIV不同HA亞型的范圍不斷擴(kuò)大，表明導(dǎo)致基因重組和置換的幾率也在增加。當(dāng)然，有關(guān)野生鳥(niǎo)類(lèi)AI的監(jiān)測(cè)需要進(jìn)一步持續(xù)的進(jìn)行，以便獲得長(zhǎng)期的、大量的、規(guī)律性的數(shù)據(jù)。

3.4 本研究所采集的樣品均為臨床健康鳥(niǎo)，從樣品中檢測(cè)到了H1～H16血清亞型，進(jìn)一步證實(shí)了野鳥(niǎo)可以攜帶或感染AIV但不發(fā)病，對(duì)野鳥(niǎo)遷徙沿途的生態(tài)環(huán)境和養(yǎng)殖環(huán)境構(gòu)成一定的威脅。本次調(diào)查證實(shí)了新疆野鳥(niǎo)血清樣品中總的H5陽(yáng)性率為7.79%，在2010年高達(dá)14.29%；在2010年檢測(cè)出H7亞型（8.33%）。眾所周知，H5和H7亞型是屬于高致病性禽流感的范疇，若沒(méi)有任何癥狀或病情的野鳥(niǎo)攜帶AIV，尤其是高致病性AIV無(wú)疑將對(duì)新疆地區(qū)家禽養(yǎng)殖環(huán)境構(gòu)成潛在的威脅和隱患。此次研究結(jié)果警示我們對(duì)環(huán)境中的野生鳥(niǎo)類(lèi)持續(xù)地進(jìn)行AI的監(jiān)測(cè)對(duì)疫情的預(yù)警和預(yù)報(bào)具有十分重要的意義。

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