李 青 ,董兆稀, 趙冰清

( 1. 長(zhǎng)沙市中心醫(yī)院藥劑科,中國(guó) 長(zhǎng)沙 410007；2.中國(guó)人民大學(xué)外國(guó)語學(xué)院,中國(guó) 北京 100872；3.湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院,中國(guó) 長(zhǎng)沙 410013)

白首烏(CynanchumauriculatumRoyle ex Wight)系蘿摩科(Asclepiadaceae)馬利筋亞科(Ascle-pioideae)鵝絨藤屬(Cynanchumlinn)植物,又名耳葉牛皮消、飛來鶴(《植物名實(shí)圖考》)、老牛凍(湖南,四川[1])．在我國(guó)資源豐富,山東、江蘇等地有人工栽培,其塊根藥用，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、益精血、健脾消食、解毒療瘡等功效[1-2]．白首烏總苷對(duì)預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成有一定的作用[3-4]．研究表明,白首烏具有養(yǎng)血益肝、固腎益精、烏須黑發(fā)和延年益壽的功效[2,5]．現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)白首烏中含有多種有效成分,具有抗腫瘤、保肝護(hù)肝降血脂等多方面的藥理活性[6-8]．國(guó)外的研究也證實(shí)了這些藥理活性[9-10]．

本實(shí)驗(yàn)所用白首烏采自岳麓山,經(jīng)湖南省藥檢所方石林教授鑒定為蘿摩科植物耳葉牛皮消(CynanchumauriculatumRoyle ex Wight)．

1 材料和試劑

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種雄性和雌性小鼠各半(120只,體重(20±2) g),湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物飼養(yǎng)基地提供．

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與設(shè)備

實(shí)驗(yàn)所用試劑與設(shè)備的名稱、廠商及型號(hào)見表1．

表1 實(shí)驗(yàn)所用試劑與設(shè)備的名稱、廠商及型號(hào)

1.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理軟件

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 多糖的提取分離

2.1.1 前處理 取白首烏飲片,使用植物粉碎機(jī)將其粉碎,得到白色白首烏粉末．將所得白首烏粉末裝入圓底燒瓶,按料液體積比1∶3加入85%無水乙醇,90 ℃水浴加熱1 h,提取2次,過濾,將所得濾渣風(fēng)干,得到黃色干粉．

2.1.2 提取 稱取適量上述白首烏黃色干粉,置于圓底燒瓶中,按料水質(zhì)量比1∶20加入蒸餾水,在100 ℃的熱水浴中冷凝回流浸提2 h．冷卻后使用離心機(jī)3 000 r/min離心10 min,將所得上清液合并．將上清液倒入圓底燒瓶,于90 ℃溫度下使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮．濃縮所得試液加入3倍體積95%乙醇溶液,靜置1 h 后,使用離心機(jī)3 000 r/min離心10 min,棄去溶液,將沉淀抽濾．抽濾所得沉淀干燥后即得白首烏粗多糖．

2.2 藥理實(shí)驗(yàn)

2.2.1 動(dòng)物分組 120只小白鼠,分為三大組,高劑量組,劑量為150 μg/g；中劑量組,劑量為100 μg/g；低劑量組,劑量為50 μg/g．給藥方式為灌胃給藥．每一大組小白鼠40只,雌雄各半,體重(20±2) g．并將小白鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和3個(gè)實(shí)驗(yàn)組,每組10只,實(shí)驗(yàn)組按劑量用生理鹽水稀釋,白首烏粗多糖按25 μL/g量給藥；對(duì)照組按等量生理鹽水灌胃．此4組連續(xù)灌胃8 d,于末次灌胃2 h后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)．

2.2.2 負(fù)荷游泳實(shí)驗(yàn) 小白鼠40只,雌雄各半,隨機(jī)均分4組,每組10只按高劑量組、中劑量組、低劑量組連續(xù)給小鼠灌胃8 d,實(shí)驗(yàn)組按劑量用生理鹽水稀釋白首烏粗多糖,以25 μL/g灌胃,1次/d；對(duì)照組按等量生理鹽水灌胃．于完成灌胃的小白鼠尾部束一重物(約2 g)放入一水深20 cm,水溫(30±1) ℃的玻璃缸內(nèi),以小鼠體力耗竭(小鼠頭部沉入水中10 s不能浮出水面)為指標(biāo),記錄小鼠生存時(shí)間．

2.2.3 耐缺氧實(shí)驗(yàn) 小白鼠40只,雌雄各半,隨機(jī)均分4組,每組10只按高劑量組、中劑量組、低劑量組連續(xù)給小鼠灌胃8 d.實(shí)驗(yàn)組按劑量用生理鹽水稀釋白首烏粗多糖,以25 μL/g灌胃,1次/d；對(duì)照組按等量生理鹽水灌胃．將小鼠放入250 mL的廣口瓶?jī)?nèi),每瓶1鼠,瓶?jī)?nèi)裝有10 g無水氯化鈣,用凡士林涂抹瓶口,蓋嚴(yán)密封,立即記時(shí),以呼吸停止(小鼠胸部不起伏)為指標(biāo),記錄小鼠存活時(shí)間．

2.2.4 耐高溫實(shí)驗(yàn) 小白鼠40只,雌雄各半,隨機(jī)均分4組,每組10只按高劑量組、中劑量組、低劑量組連續(xù)給小鼠灌胃8 d.實(shí)驗(yàn)組按劑量用生理鹽水稀釋白首烏粗多糖,以25 μL/g灌胃,1次/d；對(duì)照組按等量生理鹽水灌胃將小鼠放入50±1 ℃的恒溫箱中的玻璃缸內(nèi),以小鼠呼吸停止(小鼠胸部不起伏)為指標(biāo),記錄小鼠存活時(shí)間．

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 負(fù)荷游泳實(shí)驗(yàn)

將實(shí)驗(yàn)所得高中低劑量組與對(duì)照組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較,得出白首烏粗多糖對(duì)小白鼠負(fù)荷游泳能力的影響結(jié)果，見表2．

表2 小白鼠負(fù)荷游泳對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注:各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較*P<0.05,差異顯著；**P<0.01,差異極顯著．

由表2可看出,與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組小白鼠負(fù)荷游泳明顯表現(xiàn)活躍,且小白鼠負(fù)荷游泳時(shí)間隨粗多糖劑量增加而延長(zhǎng)．高劑量組與對(duì)照組的差異達(dá)到極顯著水平,P<0.01；中劑量組與對(duì)照差異顯著,P<0.05；低劑量組與對(duì)照差異不顯著,P>0.05．實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明,3種劑量的白首烏粗多糖均有一定的抗疲勞作用,且中、高劑量組較對(duì)照組差異顯著．

3.2 耐缺氧實(shí)驗(yàn)

將實(shí)驗(yàn)所得高中低劑量組與對(duì)照組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較,得出白首烏粗多糖對(duì)小白鼠耐缺氧能力的影響結(jié)果，見表3．

表3 小白鼠耐缺氧對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注:各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較**P<0.01,差異極顯著．

由表3可以看出,實(shí)驗(yàn)組小鼠耐缺氧存活時(shí)間長(zhǎng)于對(duì)照組,且存活時(shí)間隨粗多糖劑量增加而延長(zhǎng)；高劑量組與對(duì)照組之間差異極顯著,P<0.01,中、低劑量組與對(duì)照組間的差異均不顯著,P>0.05．實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明,白首烏粗多糖可提高小鼠對(duì)缺氧的耐受能力,其中高劑量組的存活時(shí)間較對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)．

3.3 耐高溫實(shí)驗(yàn)

將實(shí)驗(yàn)所得高中低劑量組與對(duì)照組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較,得出白首烏粗多糖對(duì)小白鼠耐高溫能力的影響結(jié)果，見表4．

表4 小白鼠耐高溫對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注:各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較**P<0.01,差異極顯著．

由表4可知,實(shí)驗(yàn)組小鼠耐高溫存活時(shí)間長(zhǎng)于對(duì)照組,且存活時(shí)間隨粗多糖劑量增加而延長(zhǎng)；中、高劑量組與對(duì)照組差異極顯著,P<0.01；低劑量組與對(duì)照差異不顯著,P>0.05．實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明,白首烏粗多糖可提高小鼠對(duì)高溫的耐受能力,且中、高劑量組的存活時(shí)間較對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)．

4 結(jié)果與討論

白首烏多糖對(duì)小白鼠的實(shí)驗(yàn)研究表明:白首烏多糖能明顯提高小白鼠耐力,延長(zhǎng)耐缺氧、負(fù)荷游泳和耐高溫時(shí)間,且中劑量組、高劑量組與對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.05或P<0.01),其作用與劑量大小有關(guān).高、中、低3個(gè)劑量組中,存在劑量效應(yīng)關(guān)系,以高劑量組效果最為明顯．結(jié)果表明,白首烏粗多糖具有抗疲勞、耐缺氧等作用,顯示其對(duì)延長(zhǎng)小白鼠的壽命有著積極意義．今后的研究中,如果能進(jìn)行增強(qiáng)小白鼠記憶能力等指標(biāo)的藥理實(shí)驗(yàn)研究,在白首烏多糖抗衰老作用研究中必將有新的發(fā)現(xiàn)．

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