覃良 李茂 黃宇聲 劉冠萍

廣西中醫(yī)藥研究院，廣西南寧530022

六堡茶遺傳毒性試驗研究

覃良 李茂 黃宇聲 劉冠萍

廣西中醫(yī)藥研究院，廣西南寧530022

目的:了解六堡茶遺傳毒性，為六堡茶的食用、藥用安全性提供實驗依據(jù)。方法:通過A m e s試驗、小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗及小鼠精子畸形試驗對其遺傳毒性進行評價。結(jié)果:苦丁茶提取物3項遺傳毒性試驗結(jié)果均為陰性，對所試菌株、小鼠體細胞與雄性生殖細胞無誘變性。結(jié)論:在本實驗條件下，六堡茶提取物未見遺傳毒性作用。

六堡茶提取物;A m e s試驗;微核試驗;精子畸形試驗

廣西梧州制藥(集團)股份有限公司生產(chǎn)的六堡茶，用法用量為開水沖服，一次3g，一日3次。因其優(yōu)良的口感深受消費者歡迎。本文報導其遺傳毒性試驗研究結(jié)果。

1 實驗材料

1.1 受試藥物六堡茶提取物，由廣西梧州制藥(集團)股份有限公司提供，批號20100408，性狀為棕褐色浸膏(每毫升相當于藥材1.87g)。用蒸餾水配成1.24g/ml供試驗用。

1.2 實驗動物KM小鼠90只，體重19～22g，雌雄各半，由廣西醫(yī)科大學實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證SCXK2009－0003，動物質(zhì)量合格證0009925。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1A mes試驗采用標準試菌株TA97、TA98、TA100、TA102，在加和不加S－9混合液的條件下，用樣品五個劑量組即5000、2500、1000、500及100μg進行平板摻入法試驗。同時設自發(fā)回變對照組及陽性對照組。樣品、陽性對照物敵克松(Dexon 50μg/皿)、甲基磺酸甲酯(MMS 1μL/皿)、2－氨基芴(2－AF 10μg/皿)、1，8－二羥基蒽醌(1，8－Dan 50μg/皿)均用二甲基亞砜(DMSO)溶解。每劑量平行做3皿，試驗重復一次。結(jié)果樣品各劑量組平均回變菌落數(shù)均未超過自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍，見表1。

2.2 小骨髓微核試驗將60只小鼠隨機分為陽性對照組、陰性對照組(環(huán)磷酰胺40mg/kg體質(zhì)量ip)、樣品三個劑量組(49.6、24.8、12.4g藥材/kg體質(zhì)量)，每組雌雄各5只。各組均用30 h 2次灌胃法，每次0.2mL/10g體質(zhì)量。第二次灌胃后6h處死動物，取股骨骨髓懸于小牛血清中直接涂片，固定，染色，鏡檢。每鼠計數(shù)1000個嗜多染紅細胞的微核細胞數(shù)，計算微核發(fā)生率，結(jié)果用SPSS10.0統(tǒng)計軟件中泊松分布u檢驗進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果樣品各劑量組的細胞微核發(fā)生率與陰性對照比較均無統(tǒng)計意義(P＞0.05)，陽性對照組微核發(fā)生率明顯高于對照組，有統(tǒng)計意義(P＜0.001)，見表2。

表1 六堡茶提取物對各菌株回變菌落數(shù)的影響(±SD)

表1 六堡茶提取物對各菌株回變菌落數(shù)的影響(±SD)

組別劑量/m－1TA97TA98TA100TA102 86±17 DMSO0．1mL/皿109±9121±927±432±3119±14119±15268±16291±12樣品1100113±10123±729±234±3117±12128±13275±11289±17樣品2500111±10127±629±234±4119±12128±14272±15288±15樣品31 000109±10129±927±135±4122±11131±10283±14290±17樣品42 500110±11126±831±335±3126±11135±10280±10288±20樣品55 000112±8126±830±235±2124±13130±13270±13294±14 Dexon501 813±220－1 370±205－－－1 473±136－MMS1цL/皿－－－1 510±152－－－－S9+S9－S9+S9－S9+S9－S9+S9空白－110±10122±629±333±2125±13129±14272±152－2－AF10－1 977±146－1 477±151－1 321±140－－1.8－Dan50－－－－－－－833±146

2.3 小鼠精子畸形試驗將30只小鼠隨機分為樣品3個計量組(49.6、24.8、12.4g藥材/kg體質(zhì)量)、陰性對照組、陽性對昭組(環(huán)磷酰胺40mg/kg體質(zhì)量，ip)，每組5只，各組動物每天灌胃一次，每次0.2mL/10g體質(zhì)量，連續(xù)5d。首次給受試物后的第35 d處死動物，取雙側(cè)附睪放入生理鹽水中縱向切1～2刀，過濾，吸濾液涂片、固定、2%伊紅染色制片。每鼠鏡檢1 000個精子，計數(shù)精子畸形數(shù)及畸形類型，計算畸形率。結(jié)果用SPSS10.0統(tǒng)計軟件中秩和檢驗統(tǒng)計分析。

結(jié)果樣品各劑量組與陽性對照組的精子畸形率比較均無統(tǒng)計意義(P＞0.05)。陽性對照組精子畸形數(shù)明顯高于陰性陰對照組，有統(tǒng)計意義(P＜0.01)，見表3。

表2 六堡茶提取物對小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核發(fā)生率的影響(±SD)

表2 六堡茶提取物對小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核發(fā)生率的影響(±SD)

注:*與陰性對照組比較，P＜0.01。

組別劑量(g·kg－1體質(zhì)量)動物數(shù)(只)鏡檢細胞數(shù)(個)微核細胞數(shù)(個)微核發(fā)生率(‰)0.2MLl0g55×1 000102.0樣品組112.455×1 00081.6樣品組224.855×1 000102.0樣品組349.655×1 00091.8陽性對照物10mg/kg55×1 000120*24.0♂陰性對照物0.2mL/10g55×1 00091.8樣品組112.455×1 00091.8樣品組224.855×1 000112.2樣品組349.655×1 000102.0陽性對照組40mg/kg55×1 000135*♀陰性對照組27.0

3 結(jié)論

六堡茶提取物經(jīng)Ames試驗、小鼠微核試驗和精子畸形試驗結(jié)果均為陰性，對所試菌株、小鼠體細胞與雄性生殖細胞無誘變性［1，2］。

研究表明六堡茶安全性好，無遺傳毒性。

表3 六堡茶提取物小鼠精子畸形試驗結(jié)果(±SD)

表3 六堡茶提取物小鼠精子畸形試驗結(jié)果(±SD)

注:*與陰性對照組比較，P＜0.01。

組別劑量(g·kg－1體質(zhì)量)動物數(shù)(只)鏡檢精子數(shù)(個)畸形數(shù)(個)畸形率(%)0.2mL/10g55×1 000501.00樣品組12.455×1 000420.84樣品組24.855×1 000460.92樣品組49.655×1 000450.90陽性對照組40mg/kg55×1 000263*陰性對照物5.26

［1］中華人民共和國衛(wèi)生部，食品安全性毒學評價程序和方法［S］．北京:衛(wèi)生部，1994:14－47．

［2］李壽祺．衛(wèi)生毒理基本原理和方法［M］．成都:四川科學出版社，1987:174－175．

［3］龐廣昌．生物活性肽的研究進展理論基礎與展望［J］．食品科學，2001，22(22):80－84．

R965.3

A

1007－8517(2012)21－0055－02

2012.09.27)