劉紅宇 楊勵(lì) 曾建國(guó)

1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科，湖南長(zhǎng)沙 410007；2.湖南省長(zhǎng)沙市中心醫(yī)院，湖南長(zhǎng)沙 410004

RP-HPLC法測(cè)定益肺通絡(luò)顆粒中巖白菜素的含量

劉紅宇1楊勵(lì)2曾建國(guó)2

1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科，湖南長(zhǎng)沙 410007；2.湖南省長(zhǎng)沙市中心醫(yī)院，湖南長(zhǎng)沙 410004

目的建立益肺通絡(luò)顆粒有效成分巖白菜素的含量測(cè)定方法。方法采用RP-HPLC法，Agillent高效液相色譜儀，Kromasil ODS（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱；甲醇-水（20∶80）為流動(dòng)相；流速為1mL/min；柱溫為30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為275 nm；靈敏度為0.05 AUFS。進(jìn)樣量10μL。結(jié)果在該方法中，巖白菜素進(jìn)樣量在0.054～0.540μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，r=0.999 06，平均回收率為98.53%，RSD為1.32%。結(jié)論本方法準(zhǔn)確簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于益肺通絡(luò)顆粒中有效成分巖白菜素的含量測(cè)定。

益肺通絡(luò)顆粒；巖白菜素；含量測(cè)定；高效液相色譜法

益肺通絡(luò)顆粒由黃精、百部、天冬、鱉甲、白及、矮地茶、絲瓜絡(luò)、紫花地丁、太子參、款冬花、大薊11味中藥組成，具有益氣養(yǎng)陰、化瘀通絡(luò)、去腐生新的功效，主治氣陰兩虛夾瘀型肺結(jié)核。處方中除鱉甲單煎外，其余十味藥全部煎煮提取，合并二煎液濃縮制成顆粒。方中矮地茶化痰止咳，清利濕熱，活血化痰。全株主含揮發(fā)油0.1%～0.2%，在去油后的殘?jiān)蟹蛛x得鎮(zhèn)咳有效成分矮茶素1號(hào)（即巖白菜素，bergenin）和矮茶素2號(hào)，尚含2-羥基-5-甲氧基-3-十五烯基苯醌等化合物及三萜類(lèi)化合物。其活性成分矮茶素1號(hào)對(duì)電刺激貓喉上神經(jīng)所引起的咳嗽及氨水噴霧引起的小鼠咳嗽都有明顯的止咳作用[1]；矮地茶有降低大鼠氣管-肺組織耗氧量的作用，矮茶素1號(hào)作用于含硫氫基必需基團(tuán)的酶體系，因而降低了組織呼吸；每日吸入二氧化硫產(chǎn)生慢性氣管炎的大鼠，內(nèi)服矮茶素1號(hào)有一定的預(yù)防及治療作用，表現(xiàn)為杯狀細(xì)胞減少、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、肺氣腫及肺萎縮程度減輕[2-3]。為控制益肺通絡(luò)顆粒中矮地茶的質(zhì)量，本文在綜合相關(guān)色譜分析方法的基礎(chǔ)上[4-7]，建立了益肺通絡(luò)顆粒中巖白菜素的RP-HPLC含量測(cè)定方法，為益肺通絡(luò)顆粒中矮地茶的質(zhì)量控制提供了方法和依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agillent高效液相色譜儀，色譜柱KromasilODS（250mm× 4.6 mm，5μm）；超聲波清洗器（KQ-600型）；萬(wàn)分之一電子分析天平。

1.2 試劑及樣品

試劑：甲醇為色譜純（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，20110406），水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。巖白菜素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：1532-200202）。益肺通絡(luò)顆粒（自制，批號(hào)：110605、110615、110625）

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性

Kromasil ODS（250 mm×4.6 mm，5μm）色譜柱；甲醇-水（20∶80）為流動(dòng)相；流速為1 mL/min；柱溫為30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為275 nm；靈敏度為0.05 AUFS，理論塔板數(shù)大于3 000，拖尾因子（T）為0.940。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取干燥至恒重的巖白菜素5.4mg，用甲醇溶解制成0.054mg/mL的對(duì)照品溶液，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備取本品顆粒約0.5 g，精密稱(chēng)定，置入50mL量瓶中，加入甲醇40mL，超聲處理40min，放冷后加入甲醇至刻度，濾過(guò)，取續(xù)濾液10μL進(jìn)樣，測(cè)定。

2.2.3 陰性溶液的制備按本品制劑工藝制備不含矮地茶的制劑，同供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣量同上，測(cè)定。各溶液色譜見(jiàn)圖1。

2.3 線性關(guān)系考察

精密量取巖白菜素對(duì)照品溶液（0.054 mg/mL）1、2、4、6、8、10μL進(jìn)樣。測(cè)定其峰面積，以峰面積值（A）對(duì)進(jìn)樣量（C）進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A=63.705 84C-1.775 24（r= 0.999 06）。以上結(jié)果表明，在0.054～0.540μg范圍內(nèi)，巖白菜素峰面積值與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取上述對(duì)照品溶液8μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定巖白菜素峰面積，結(jié)果分別為497.22、510.34、509.00、504.60、508.24、507.02，RSD為0.94%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液（批號(hào)：110615）在0、1、2、4、8、24 h，分別進(jìn)樣8μL，測(cè)定樣品中巖白菜素峰面積，結(jié)果分別為175.47、176.54、175.64、177.67、178.40、174.48，RSD為0.83%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

按擬定的含量測(cè)定方法，對(duì)同一批樣品（批號(hào)：110615）分別制備供試品溶液，測(cè)得峰面積值并計(jì)算含量，RSD為1.47%，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知含量的樣品（批號(hào)：110615）約0.1 g，分別加入對(duì)照品溶液（0.054 mg/mL）3 mL，按上述樣品制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液并注入高效液相色譜儀，計(jì)算回收率。見(jiàn)表1。試驗(yàn)結(jié)果表明，此方法可靠性良好。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品測(cè)定

取3批樣品，按供試品溶液制備方法操作，按擬定的色譜條件測(cè)定其峰面積，每批樣品測(cè)定6份，結(jié)果取平均值，3批樣品中巖白菜素的含量分別為1.76、1.67、1.84 mg/g，見(jiàn)表2。

表2 樣品中巖白菜素含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

矮地茶為本方主藥之一，且用量較大，其功用化痰止咳，清利濕熱，活血化痰，符合本方益肺通絡(luò)的中醫(yī)基本理論，巖白菜素為矮地茶的有效成分之一，故選擇巖白菜素作為控制本品質(zhì)量的指標(biāo)成分。

在巖白菜素的高效液相色譜法試驗(yàn)中，在對(duì)巖白菜素進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描中，發(fā)現(xiàn)該化合物有2個(gè)吸收峰，分別位于220 nm和275 nm，考慮流動(dòng)相中甲醇在220 nm波長(zhǎng)處對(duì)基線有影響，故試驗(yàn)中檢測(cè)波長(zhǎng)選擇為275 nm[8]，參照《中國(guó)藥典》2010年版[9]及相關(guān)文獻(xiàn)[10-12]，流動(dòng)相考察了甲醇-水（15∶85），甲醇-水（20∶80），甲醇-水（25∶75）等，系統(tǒng)流速設(shè)置為1.0 mL/min，試驗(yàn)結(jié)果顯示用甲醇-水（15∶85）洗脫，出峰時(shí)間超過(guò)20min，而用甲醇-水（25∶75）來(lái)洗脫則出現(xiàn)與其他峰相隔較近及基線不平現(xiàn)象，最后選用甲醇-水（20∶80）為流動(dòng)相，色譜圖中巖白菜素的保留時(shí)間為12min左右，峰形較好，且無(wú)其他雜質(zhì)峰干擾；供試品制備考察中，則對(duì)不同的超聲時(shí)間（30、40、50min）作了比較，結(jié)果表明40min和50min測(cè)得的含量相差不大，30 min得出的含量較低，故采用超聲40min為宜。試驗(yàn)結(jié)果表明該方法具有分離效果好、靈敏度高、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)，可作為益肺通絡(luò)顆粒的質(zhì)控方法。

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RP-HPLC determ ination of bergenin in Yifei Tongluo Granules

LIU Hongyu1 YANG Li2 ZENG Jian'guo2
1.Department of Pharmacy,the First Affiliated Hospital to Hu′nan University of Chinese Medicine,Hu′nan Province, Changsha 410007,China;2.The Central Hospital in Changsha City,Hu′nan Province,Changsha 410004,China

ObjectiveTo establish amethod for determination of bergenin in compound Yifei Tongluo Granules.MethodsThe RP-HPLC method was adopted.The Kromasil ODS column(4.6 mm×250 mm,5μm)was used at the column temperature of 30℃.The mobile phase consisted ofmethanol-water(20∶80)with the flow rate of 1.0 mL/min and the detection wavelength was 275 nm.ResultsThere was a good linear relationship between the peak area and the sample size of bergenin within the range of 0.054-0.540μg,r=0.999 06,and the average recovery rate was 98.53%with the RSD of 1.32%(n=6).ConclusionThemethod is simple,accurate and repeatable,which can be used for the quality control of Yifei Tongluo Granules.

Yifei Tongluo Granules;Bergenin;Content determination;HPLC

R927

A

1673-7210（2012）10（c）-0108-03

2011年度湖南省中醫(yī)藥科研計(jì)劃項(xiàng)目（項(xiàng)目名稱(chēng)：“益肺通絡(luò)顆?！钡难兄疲豁?xiàng)目編號(hào)：201113）。

劉紅宇（1973.1-），女，湖南長(zhǎng)沙人，博士研究生，副主任藥師，主要從事中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

曾建國(guó)，男，湖南長(zhǎng)沙人，本科，主任藥師，主要從事新藥研發(fā)工作。

2012-07-25 本文編輯：衛(wèi)軻）