翁善鋼

犬傳染性呼吸道疾病的診斷

翁善鋼

犬傳染性呼吸道疾病是犬類的常見疾病。至少有9種病原微生物被認(rèn)為在犬傳染性呼吸道疾病發(fā)生過程中起著重要作用，它們分別是支氣管敗血波氏菌、馬鏈球菌獸疫亞種、支原體、犬流感病毒、犬瘟熱病毒、犬呼吸道冠狀病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒、犬皰疹病毒。本文主要介紹了這些疾病的診斷方法。

盡管已有針對各種疾病的疫苗，犬傳染性呼吸道疾病仍是生活在各種環(huán)境中的犬類的重要疾病。隨著各種診斷技術(shù)的發(fā)展，犬類多重感染的情況日益受到關(guān)注。近些年，有一些病原體成為了犬傳染性呼吸道疾病的重要病原。本文將主要討論引起犬傳染性呼吸道疾病的各種病因以及診斷這些傳染性疾病的方法。

有時，引起犬傳染性呼吸道疾病的各種病原體可以互相促進(jìn)對宿主的感染。例如，犬瘟熱病毒是一種高度淋巴細(xì)胞性的病毒，可以引起免疫抑制，誘發(fā)其他呼吸道病毒以及細(xì)菌感染。支氣管敗血波氏菌可以引起纖毛停滯、損害巨噬細(xì)胞吞噬功能，因此也可以誘發(fā)其他呼吸道病毒以及細(xì)菌感染。各種病原體有可能發(fā)揮協(xié)同作用引起致病，因此不少嚴(yán)重的疾病同混合感染有關(guān)。有些無癥狀的動物也可能存在某種病原的單一感染。

一、病原

了解引起犬傳染性呼吸道疾病的各種病原非常重要，因為這有助于選擇合適的診斷方法，采取準(zhǔn)確的治療以及預(yù)防措施。至少有9種病原微生物被認(rèn)為在犬傳染性呼吸道疾病發(fā)生過程中起著重要作用。細(xì)菌性病原包括支氣管敗血波氏菌、馬鏈球菌獸疫亞種以及支原體。病毒性病原包括犬流感病毒、犬瘟熱病毒、犬呼吸道冠狀病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒（尤其是犬腺病毒2型）、犬皰疹病毒。

大部分犬屬于自限性感染，不采用抗生素療法的情況下，一般5~7天后臨床表現(xiàn)能夠恢復(fù)正常。有些犬可能需要進(jìn)行一段時間的抗生素治療。也有部分患犬盡管采取了治療方法，仍有咳嗽發(fā)生。建立相關(guān)的診斷方法有助于有效地防控疾病，也有助于采取適當(dāng)?shù)目股刂委熂?xì)菌感染，如支氣管敗血波氏菌感染。

二、診斷方法

上述的某一病原體感染都是很難僅靠臨床癥狀就能做出診斷的。主要原因在于很多癥狀有疊加現(xiàn)象，并且不具有特異性。犬傳染性呼吸道疾病的診斷方法主要有對細(xì)菌或者支原體進(jìn)行分離培養(yǎng)，血清學(xué)方法檢測犬流感以及犬瘟熱病毒的抗體，PCR方法檢測各種DNA、RNA病毒以及細(xì)菌。病毒分離費(fèi)時費(fèi)力，一般只用于實驗研究。很多情況下也可以采取多種診斷方法同時開展進(jìn)行診斷。采用培養(yǎng)基培養(yǎng)的方法仍是檢測支氣管敗血波氏菌以及支原體的良好方法。不過，支原體的生長速度較為緩慢。采用細(xì)菌培養(yǎng)的方法對檢測馬鏈球菌獸疫亞種感染非常重要，因為尚無檢測該病原的PCR方法。細(xì)菌培養(yǎng)的方法也適合對支氣管敗血波氏菌進(jìn)行藥敏實驗。因為部分菌株對抗生素具有較強(qiáng)的抗性。由于很多犬都會接種疫苗，因此血清學(xué)實驗所獲得的抗體水平結(jié)果并不能夠正確反應(yīng)犬的實際感染情況。疫苗通常只能用于減輕疾病的嚴(yán)重的程度，而不能完全預(yù)防疾病的發(fā)生。

世界各地的研究人員已報道了多種檢測病毒的PCR方法。這些方法的敏感性和特異性各異，但一般都能較好地用于日常的疾病檢測與診斷。PCR方法主要分為常規(guī)的PCR和熒光定量PCR。熒光定量PCR方法用于檢測更為有效，因為該方法可以大大降低假陽性。引起犬傳染性呼吸道疾病的很多病毒是RNA病毒（如犬瘟熱、犬副流感、犬流感病毒等），因此PCR方法檢測并非是DNA而是RNA，得采用RT-PCR的方法。RNA比DNA更容易降解，很容易導(dǎo)致假陰性出現(xiàn)。對于不同的病原體應(yīng)該根據(jù)實際情況選擇合適的檢測方法。現(xiàn)在已有很多實驗室或者生物診斷試劑公司提供診斷試劑盒，里面包含多種病毒的檢測試劑。

三、引起犬傳染性呼吸道疾病的各種病原體及其診斷

（一）支氣管敗血波氏菌

支氣管敗血波氏菌是一種需氧的革蘭氏陰性球桿菌。這是引起犬傳染性呼吸道疾病的最常見細(xì)菌性病原。診斷可以通過收集氣管或支氣管肺泡沖洗液，也可以采用喉-咽或者鼻試進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)或者PCR檢測。

（二）馬鏈球菌獸疫亞種

馬鏈球菌獸疫亞種是一種β-溶血性鏈球菌，可以引起急性化膿性或壞死性出血性肺炎。這也是犬類最常見的一種β-溶血性鏈球菌。該鏈球菌的分離成功的幾率同疾病的嚴(yán)重程度有關(guān)。尚不能確定該病原體是犬傳染性呼吸道疾病發(fā)病的主要病原還是繼發(fā)病原。

（三）支原體

支原體被認(rèn)為屬于犬的呼吸道正常菌群，但有時可以從下呼吸道分離到。同犬下呼吸道疾病有關(guān)的主要支原體是Mycoplasma cynos。在英國，Mycoplasma cynos同小狗發(fā)生支氣管肺炎的關(guān)系很密切。從犬呼吸道可以分離到的其他支原體還有M bovigenitalium、M canis、M edwardii、M feliminutum、M gateae 和M spumans等。這些通常認(rèn)為同下呼吸道疾病沒有關(guān)系。對支原體進(jìn)行分離培養(yǎng)是常見的診斷方法。支原體生長需要特殊的培養(yǎng)基，有時潛伏期長達(dá)1個星期。分子生物學(xué)方法如PCR的發(fā)展使得診斷支原體更為準(zhǔn)確迅速。但對于檢測呈陽性的結(jié)果是否肯定同疾病的發(fā)生有關(guān)，仍然是一個值得研究的問題。

（四）犬流感病毒

在美國，犬流感病毒最早出現(xiàn)在佛羅里達(dá)。有研究稱，引起犬流感的病毒是馬流感病毒H3N8亞型的變異毒株?，F(xiàn)在犬流感已經(jīng)廣泛存在于整個美國的犬群中。澳大利亞、英國的犬群中也存在較高比例的犬流感病毒感染。任何日齡的犬對犬流感都易感，一年四季均可發(fā)生。病毒感染的潛伏期為2~4天，可以引起發(fā)熱、咳嗽、出血性肺炎等癥狀，但死亡率較低。繼發(fā)細(xì)菌感染的現(xiàn)象也比較普遍。通過鼻液向外排毒的現(xiàn)象一般出現(xiàn)在疾病發(fā)生的早期(感染后的1~7天內(nèi)），臨床癥狀（噴嚏、咳嗽等）一般在感染病毒3~12天后出現(xiàn)。有些犬呈亞臨床感染狀態(tài)，但仍可以向外界排毒。采集鼻試或者喉試樣品做PCR檢測可以用于診斷。用于檢測人流感病毒的ELISA試劑盒也可以用于檢測犬流感病毒，但敏感性要比人流感病毒低。現(xiàn)在，美國等國家已有專門的滅活疫苗被批準(zhǔn)用于犬流感的預(yù)防。

（五）犬呼吸道冠狀病毒

犬呼吸道冠狀病毒是一種RNA病毒，是世界各地狗群中新出現(xiàn)的一種呼吸道疾病的病原體。該病毒同牛冠狀病毒相近，但同犬腸道冠狀病毒卻差異很大。該病毒引起的疾病癥狀通常比較輕微，但很多較為嚴(yán)重的呼吸道疾病的病例中都能夠檢測到該病毒。犬呼吸道冠狀病毒感染有可能誘發(fā)其他細(xì)菌和病毒感染，但也有可能是引起呼吸道疾病的主要病原。診斷可以采用PCR方法對氣管或支氣管肺泡沖洗樣本和喉試樣本進(jìn)行檢測診斷。

（六）犬瘟熱病毒

犬瘟熱病毒也是引起犬類咳嗽的一個重要因素。很多患犬瘟熱的犬并沒有神經(jīng)或胃腸道的癥狀，咳嗽是唯一的癥狀。犬瘟熱病毒是一種RNA病毒，呼吸道樣本可用于RTPCR檢測。此外，全血樣品以及眼結(jié)膜刮取物也可以用于RT-PCR檢測。眼結(jié)膜刮取物還可以用于間接免疫熒光實驗進(jìn)行診斷，但該方法假陽性以及假陰性的概率較高。除此之外，現(xiàn)在已有多種商用ELISA以及膠體金檢測試劑盒用于檢測犬瘟熱病毒。

（七）其他病原

犬副流感病毒仍然是引起犬傳染性呼吸道疾病的頭號病毒性病原體。不過，現(xiàn)在已有各種疫苗廣泛用于犬副流感病毒感染的預(yù)防。其他的病毒性病原體還有犬腺病毒和犬皰疹病毒。犬腺病毒的疫苗可以用于預(yù)防犬傳染性肝炎。犬皰疹病毒在犬傳染性呼吸道疾病發(fā)生所起的作用尚不清楚，但近些年的很多犬傳染性呼吸道疾病病例中都能檢測到犬皰疹病毒。

總之，越來越多的病原體被確認(rèn)同CIBD的發(fā)生有關(guān)，因此多種病原體混合感染的情況比較普遍。混合感染很有可能導(dǎo)致更為嚴(yán)重的疾病發(fā)生，引起治療失敗。預(yù)防疾病的基本方法是進(jìn)行疫苗接種，但有幾種引起CIBD的病原體尚無有效的疫苗，因此采取其他預(yù)防措施也比較重要。首先，要建立和健全經(jīng)常性的防疫制度，有條件的應(yīng)定期采集樣本進(jìn)行病原體檢測。其次，做好經(jīng)常性的環(huán)境衛(wèi)生和消毒工作。再次，要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，禁喂腐敗、變質(zhì)的肉食和飼料。最后，要勤于觀察，發(fā)現(xiàn)病犬要及時隔離和治療。

（作者單位：上海市外高橋出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫二科，200137）

（編輯：李 冰）