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針刺足三里、太沖對(duì)腹瀉型腸易激綜合征大鼠胃腸激素SS、SP的影響

2012-11-02 03:13劉美榮王思明肖瑞飛左和寧彭芝配
亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥 2012年12期
關(guān)鍵詞:造模胃腸針刺

劉美榮,王思明,肖瑞飛,左和寧,彭芝配

(1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,湖南 長沙 410007;2.湖南中醫(yī)藥大學(xué),湖南 長沙 410007)

腸易激綜合征(irritabel bowel snydrom,IBS)是一種以腹痛或腹部感覺不適伴排便習(xí)慣的改變?yōu)樘卣鞯墓δ苄阅c道疾病。羅馬Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)將其分為便秘型(IBS-C)、腹瀉型(IBSD)、混合型(IBS-M)和未分型IBS(IBS-U)四種亞型。我國最常見的是IBS-D,占所有確診病例的74.1%[1]。IBS作為一種功能性疾病嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量,但其發(fā)病因素尚未完全明了,目前尚無特異性治療手段。在臨床上,針灸可有效調(diào)節(jié)腸道功能紊亂。本實(shí)驗(yàn)采用慢性溫和應(yīng)激加孤養(yǎng)法加灌服番瀉葉刺激大鼠造成IBS-D模型,觀察針刺足三里、太沖對(duì)IBS-D大鼠腹瀉指數(shù)及胃腸激素的影響,以期為臨床上使用針刺療法治療IBS-D提供有效的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物

健康SD大鼠50只,雌雄各半,體質(zhì)量200~250g,購于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司(SCXK 2009-004)。

1.1.2 藥物

匹維溴銨片,50mg/片(solvay pharma公司生產(chǎn),批號(hào):611243)。番瀉葉,購于湖南省藥材公司,經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室鑒定為真品。

1.1.3 試劑

SS、SP酶聯(lián)免疫試劑盒,96T(上海滬峰生物科技有限公司)。

1.1.4 儀器

SHIMADZU-AY120分析天平(日本島津);低溫離心機(jī)(湘儀實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司);三用電熱恒溫水溫箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠);酶標(biāo)儀(美國伯騰儀器有限公司);安迪牌無菌針灸針,0.25mm×25mm(貴州安迪藥械有限公司,標(biāo)準(zhǔn)號(hào):GB2024-94);大鼠固定板(湖南中醫(yī)藥大學(xué)針灸實(shí)驗(yàn)室提供)。

1.2 方法

1.2.1 造模方法[2]

隨機(jī)分組后的大鼠除空白組外,其它組均予番瀉葉水煎劑灌胃。灌胃后,用慢性溫和束縛應(yīng)激加孤養(yǎng)法刺激大鼠。每日僅隨機(jī)對(duì)大鼠做一項(xiàng)處理:①用漆包線捆綁住大鼠的雙后肢,使大鼠不能正?;顒?dòng),造成一定應(yīng)激刺激,每次2h;②夾尾1min;③置于45℃高溫環(huán)境5min;④置于4℃冰水游泳3min;⑤晝夜顛倒;⑥禁食24h;⑦電熱恒溫振蕩水槽水平振蕩(160次/min)45min。為使大鼠無法預(yù)料刺激的發(fā)生,任意的連續(xù)兩天所做的處理均不能相同,共刺激14d。模型評(píng)價(jià):觀察大鼠的精神狀況、攝食量變化、體質(zhì)量改變和大便情況。大鼠發(fā)生腹瀉,食欲下降,檢測(cè)腹瀉指數(shù),模型組與空白組比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,證明模型成功。

1.2.2 動(dòng)物分組

依據(jù)文獻(xiàn)方法[3],用Excel隨機(jī)函數(shù)“Rand”將大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、捆綁組、針刺組、藥物組,每組10只,單籠喂養(yǎng)。

1.2.3 藥物制備及給藥劑量

匹維溴銨片,碾碎后溶入蒸餾水,按大鼠與成人體表面積換算[4]配制成濃度為0.3mg/mL的溶液,經(jīng)灌胃給藥,給藥體積10mL/kg;番瀉葉,水煮沸5min,配制成濃度為2g/mL的溶液,經(jīng)灌胃給藥,給藥體積10mL/kg。

1.2.4 針刺方法

造模結(jié)束后,空白組、模型組、捆綁組和針刺組灌生理鹽水,藥物組灌服匹維溴銨溶液。針刺組給予針刺相應(yīng)穴位;捆綁組和藥物組在同等條件下相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)給予相應(yīng)的捆綁刺激,每日1次,共14d。穴位定位:參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用腧穴簡表”定位[5]?!白闳铩毖磙D(zhuǎn)針法[6]:向心角度捻轉(zhuǎn),幅度90°左右,頻率120次/min?!疤珱_”穴行捻轉(zhuǎn)瀉法:離心角度捻轉(zhuǎn),幅度180°左右,頻率60次/min,每穴操作3min,留針30min。

1.2.5 觀測(cè)指標(biāo)及檢測(cè)方法

(1)一般狀態(tài)觀察。每日觀察大鼠進(jìn)食、飲水、精神狀態(tài)及毛色。

(2)腹瀉指數(shù)測(cè)定。參照文獻(xiàn)[7]分別在造模前1d、治療前1d、治療后14d測(cè)定5h內(nèi)各組大鼠腹瀉指數(shù)。

(3)胃腸激素的測(cè)定。在治療14天后,各組大鼠禁食不禁水16h,腹腔注射臨時(shí)配制的10%水合氯醛,劑量0.3mL/100g。麻醉后,腹主動(dòng)脈EDTA管采血5mL低溫離心,分離出血漿待測(cè)。采血后,在大鼠回盲部以上約5cm處取一小段回腸組織,肛門以上約2cm處取一小段直腸組織,立即用生理鹽水沖洗,無菌濾紙吸干后稱重,充分勻漿后低溫離心,將分離出的上清液置于冰箱中-20℃保存?zhèn)溆谩IL抑素(SS)和P物質(zhì)(SP)的含量分別按各自的ELISA試劑盒使用說明書方法測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析,所有計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,符合正態(tài)性和方差齊性者,組內(nèi)前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn),多組比較采用單因素方差分析q檢驗(yàn),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.01表示差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 造模后大鼠一般情況

造模后大鼠豎毛,毛枯槁無光澤,易激惹,大便稀或溏泄,漸見肛周污穢。

2.2 大鼠體質(zhì)量結(jié)果比較

造模前各組大鼠體質(zhì)量比較均無顯著性差異(P>0.05)。造模后模型組、捆綁組、針刺組、藥物組體質(zhì)量增長緩慢,與空白組比較,均有顯著性差異 (P<0.05)。治療14天后捆綁組與模型組比較無顯著性差異(P>0.05);針刺組、藥物組體質(zhì)量增加明顯,與模型組比較,均有顯著性差異(P<0.05),針刺組與藥物組比較無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠造模前、造模后、治療后體質(zhì)量比較(n=10,,g)

表1 各組大鼠造模前、造模后、治療后體質(zhì)量比較(n=10,,g)

注:與空白組比較:*P<0.05;與模型組比較:▲P<0.05。

組別 造模前 造模后 治療后空白組269.12±11.76330.53±9.89385.01±9.72模型組 271.98±9.56305.16±10.50* 326.01±6.81捆綁組 267.02±10.60307.08±9.53* 317.05±7.62針刺組 267.09±10.66304.10±8.68* 364.31±8.06▲藥物組 261.98±9.93306.68±10.73* 362.50±8.61▲

2.3 大鼠攝食量比較

造模前各組每只大鼠平均日攝食量均無顯著性差異(P>0.05)。造模期模型組、捆綁組、針刺組、藥物組攝食量減少,與空白組比較均有顯著性差異(P<0.01)。治療期捆綁組與模型組比較無顯著性差異(P>0.05);針刺組、藥物組攝食量明顯增加,與模型組比較均有顯著性差異(P<0.01),針刺組與藥物組比較無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠造模前、造模期、治療期平均攝食量比較(n=10,,g)

表2 各組大鼠造模前、造模期、治療期平均攝食量比較(n=10,,g)

注:與空白組比較:**P<0.01;與模型組比較:▲▲P<0.01。

組別 造模前 造模期 治療期空白組38.75±1.12 47.36±2.41 53.44±1.52模型組 38.52±1.48 30.61±1.79** 36.84±2.13捆綁組 38.39±1.57 30.15±2.31** 35.72±1.48針刺組 38.30±1.26 29.44±1.57** 45.79±1.37▲▲藥物組 38.58±1.33 31.16±1.82** 46.27±2.45▲▲

2.4 大鼠腹瀉指數(shù)比較

造模前各組均無腹瀉,腹瀉指數(shù)為0。造模后模型組、捆綁組、針刺組、藥物組腹瀉指數(shù)明顯升高,與空白組比較均有顯著性差異(P<0.01)。治療后捆綁組與模型組比較無顯著性差異(P>0.05);針刺組、藥物組腹瀉指數(shù)明顯降低,與模型組比較均有顯著性差異(P<0.01),針刺組與藥物組比較無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果見表3。

表3 各組大鼠造模前、造模后、治療后腹瀉指數(shù)比較(n=10,)

表3 各組大鼠造模前、造模后、治療后腹瀉指數(shù)比較(n=10,)

注:與空白組比較:**P<0.01;與模型組比較:▲▲P<0.01。

組別 造模前 造模后 治療后空白組0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00模型組 0.00±0.00 1.07±0.13** 0.89±0.21捆綁組 0.00±0.00 1.08±0.15** 0.95±0.19針刺組 0.00±0.00 1.06±0.11** 0.18±0.17▲▲藥物組 0.00±0.00 1.07±0.12** 0.17±0.20▲▲

2.5 大鼠回腸組織中胃腸激素含量比較

模型組回腸組織中SS、SP含量顯著升高,與空白組比有顯著性差異(P<0.01)。捆綁組與模型組相比較無顯著性差異(P>0.05);針刺組、藥物組與模型組比,回腸組織中SS、SP含量降低,具有顯著性差異(P<0.01)。結(jié)果見表4。

表4 各組大鼠回腸組織中胃腸激素含量比較(n=10,)

表4 各組大鼠回腸組織中胃腸激素含量比較(n=10,)

注:與空白組比較:**P<0.01;與模型組比較:▲▲P<0.01。

組別 SS(μg/g) SP(ng/g)空白組9.333±0.992 30.379±1.672模型組 24.147±0.893** 37.463±1.628**捆綁組 25.443±0.709 36.691±1.671針刺組 13.750±1.225▲▲ 31.317±1.199▲▲藥物組 13.681±0.734▲▲ 31.964±1.547▲▲

2.6 大鼠直腸組織中胃腸激素含量比較

各組大鼠直腸組織中SS、SP含量無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果見表5。

表5 各組大鼠直腸組織中胃腸激素含量比較(n=10,)

表5 各組大鼠直腸組織中胃腸激素含量比較(n=10,)

組別 SS(μg/g) SP(ng/g)空白組157.598±3.799 144.995±3.763模型組 133.270±4.216 131.312±3.070捆綁組 147.631±4.085 142.424±3.805針刺組 147.463±6.547 138.513±2.948藥物組146.268±6.291 141.555±4.208

2.7 大鼠血漿中胃腸激素含量比較

各組大鼠血漿中SS、SP含量無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果見表6。

表6 各組大鼠血漿中胃腸激素含量比較(n=10,)

表6 各組大鼠血漿中胃腸激素含量比較(n=10,)

組別 SS(μg/L) SP(ng/L)空白組75.705±1.508 72.246±3.899模型組 75.687±2.311 72.225±2.508捆綁組 75.725±2.111 72.500±3.110針刺組 74.645±2.615 78.964±2.573藥物組76.844±2.747 80.481±2.579

3 討論

IBS在中醫(yī)學(xué)中屬“泄瀉”、“腹痛”范疇。中醫(yī)認(rèn)為七情失調(diào)可引起內(nèi)臟功能發(fā)生紊亂,尤其對(duì)肝脾有很大的影響?!夺t(yī)方考》所云:“瀉責(zé)之脾,痛責(zé)之肝,肝責(zé)之實(shí),脾責(zé)之虛,脾虛肝實(shí),故會(huì)痛瀉?!币虼烁斡羝⑻撌荌BS最為多見的證型。

針灸治療IBS的優(yōu)點(diǎn)在于無副作用,可避免因胃腸疾病而對(duì)藥物吸收所造成的影響,減少消化道的負(fù)擔(dān)。太沖為足厥陰肝經(jīng)的原穴、輸穴,原穴為臟腑原氣所留止之處,臟腑發(fā)生病變會(huì)相應(yīng)地反應(yīng)到原穴上來,而針刺原穴又能調(diào)整臟腑氣血,通達(dá)三焦氣機(jī),改善內(nèi)臟功能,從而發(fā)揮其維護(hù)正氣、抗御病邪的作用?!端难偢琛吩唬骸岸歉谷锪簟?,足三里是足陽明胃經(jīng)的合穴、胃之下合穴,“合治內(nèi)腑”,具有和胃健脾、補(bǔ)中益氣、通調(diào)腑氣、扶正祛邪之功能?!鹅`樞·五邪》記載“邪在脾胃,則病肌肉痛,陽氣有余,陰氣不足,則熱中善饑;陽氣不足,陰氣有余,則寒中腸鳴腹痛;陰陽俱有余,若俱不足,則有寒有熱,皆調(diào)于三里”。金元時(shí)代的李東垣曰“以胃合三里穴推而揚(yáng)之以伸元?dú)狻?,認(rèn)為刺激足三里穴能起到補(bǔ)益脾胃元?dú)庵?。因此,胃腸有疾,當(dāng)為首選。

隨著對(duì)IBS的進(jìn)一步了解,大量研究發(fā)現(xiàn)胃腸激素的改變和IBS的發(fā)病關(guān)系密切。其發(fā)病與胃腸激素SP、粘膜中生長抑索(SS)、VIP、CGRP、細(xì)胞受體等密切相關(guān)[8]。腦腸肽是調(diào)節(jié)胃腸道運(yùn)動(dòng)的重要物質(zhì),與IBS發(fā)病密切相關(guān)常見有 VIP、SS、5-HT、SP、NPY等。

生長抑素(SS)在腦和胃腸道中分布廣泛,對(duì)胃腸道的內(nèi)分泌、外分泌、小腸的吸收和運(yùn)動(dòng)等具有廣泛作用,其主要生理作用為抑制胃腸道的運(yùn)動(dòng)和膽囊收縮[9]。新近研究發(fā)現(xiàn),腹瀉型IBS患者的血漿和乙狀結(jié)腸黏膜中,SS的含量明顯高于正常人。推測(cè)其作用機(jī)制,腹瀉型IBS的發(fā)生可能是SS升高,間接引起肥大細(xì)胞釋放增多,而肥大細(xì)胞通過釋放生物活性物質(zhì)參與IBS患者的腹痛或腸道運(yùn)動(dòng)加速,誘發(fā)內(nèi)臟的高敏感性,使腸道呈現(xiàn)出運(yùn)動(dòng)占優(yōu)勢(shì)的癥狀:腹痛、腹瀉等[10]。SP是一種速激肽,在全身均有分布,以胃腸道和中樞神經(jīng)系統(tǒng)濃度最高。在腸道中主要存在于腸肌間神經(jīng)叢和黏膜下神經(jīng)叢,可增強(qiáng)胃腸蠕動(dòng),有強(qiáng)烈促消化道平滑肌收縮,加強(qiáng)結(jié)腸的集團(tuán)推進(jìn)運(yùn)動(dòng),刺激小腸、結(jié)腸黏膜分泌水和電解質(zhì)作用。

在本實(shí)驗(yàn)中,捆綁組和模型組相比,各種指標(biāo)數(shù)據(jù)均無顯著性差異(P>0.05),說明捆綁因素在實(shí)驗(yàn)過程中無影響。模型組和捆綁組大鼠回腸組織中SS、SP含量高于其他組,有顯著性差異(P<0.01),而直腸組織和血漿中各組SS、SP含量無顯著性差異(P>0.05),說明針刺足三里、太沖主要作用部位在回腸組織中,可通過降低IBS-D模型大鼠回腸中SS、SP含量而發(fā)揮治療作用。

[1]中華醫(yī)學(xué)會(huì).第一屆全國腸易激綜合征學(xué)術(shù)會(huì)議紀(jì)要[J].中華消化雜志,2003,23(7):428-428.

[2]樊江波,暢洪昇,董世芬.慢性應(yīng)激致腸易激綜合征大鼠模型的建立與評(píng)價(jià)[J].中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào),2010,18(2):91-95.

[3]李志春,桂立輝.利用Excel實(shí)現(xiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)對(duì)象隨機(jī)分組的應(yīng)用[J].毒理學(xué)雜志,2005,19(3):235-236.

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