蔣 磊，孟祥松，李 軍，益 磊，馬欣羽

(1.亳州市食品藥品檢驗所，安徽亳州236800;2.安徽中醫(yī)學(xué)院，安徽合肥230031)

蒲地藍(lán)消炎口服液是由蒲公英、黃芩、板藍(lán)根、苦地丁四味中藥組成，具有清熱解毒、抗炎消腫的功能?？捎糜诎X腫、腮腺炎、咽炎、淋巴結(jié)炎、扁桃體炎等疾病的治療［1］。蒲公英是蒲地藍(lán)消炎口服液的主藥之一，現(xiàn)代藥理研究表明，蒲公英的藥理作用主要有以下幾點:抗菌及抗病毒作用、提高免疫功能的作用、抗胃損傷作用、保肝膽作用、抗腫瘤作用［2］。此外，蒲公英還是一味治療婦科疾病的良藥，單用即有可靠的效果，若以其為主組方辨證論治療效更佳?？捎糜诨厝?，更年期綜合征，女性腹痛等［3］。蒲地藍(lán)消炎口服液現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)收載的質(zhì)控項目中未對蒲公英有效成分進行質(zhì)量控制，因此作者擬對處方中蒲公英的有效成分咖啡酸進行定性定量控制研究。首先采用薄層色譜法作定性鑒別，并以口服液中特異性較強的咖啡酸為指標(biāo)，為了有效地控制制劑質(zhì)量，采用RP－HPLC法對處方中蒲公英的咖啡酸進行含量測定，考察蒲地藍(lán)消炎口服液中咖啡酸的線性范圍、專屬性試驗、精密度考察、重復(fù)性試驗、穩(wěn)定性試驗、回收率試驗，為蒲地藍(lán)消炎口服液的質(zhì)量控制提供簡便可行，重現(xiàn)性好的方法，從而建立蒲地藍(lán)消炎口服液的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器、試劑與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀:型號:Agilent 1200，Hypersil ODS(4.6 mm ×250 mm，2.5 μm)色譜柱，G1329A 自動進樣器，G1316A柱溫箱，G1315D檢測器(上海禾工科學(xué)儀器有限公司)，超聲儀:型號:JL360DT(上海吉理超聲儀器有限公司)，三用紫外分析儀:型號:UV－8(無錫科達(dá)儀器廠)，離心沉淀機:型號:80－2(上海手術(shù)器械廠)，分析天平:型號:ES－180J(沈陽龍騰電子稱量責(zé)任有限公司)，分析天平:型號:AB135－S(瑞士梅特勒－托利多)，數(shù)顯恒溫水浴鍋:型號:HH－S6(江蘇省金壇市金城國勝實驗儀器廠)，酸度計:型號:PHS－25(上海第二分析儀器廠)。

1.2 試劑與試藥 咖啡酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110885－200102);水(娃哈哈純凈水，杭州娃哈哈集團有限公司，批號:20110409);乙腈(色譜純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號:20110209);甲醇(色譜純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號:20110209);其他試劑均為分析純。

1.3 藥品 蒲地藍(lán)消炎口服液(市售)。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜分析

2.1.1 供試品溶液的制備 取本品10 mL，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液［6］。

2.1.2 陰性對照溶液的制備 取除蒲公英以外的其他3味藥材按處方制備成缺蒲公英的樣品，同2.1.1法制成陰性對照溶液。

2.1.3 對照品溶液的制備 取咖啡酸對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.1.4 薄層色譜分析 展開劑:三氯甲烷－甲醇－甲酸(9∶1∶0.5)，方法:吸取上述三種溶液各 5 μL，分別點于同一硅膠G板上，放入展開缸中展開，取出，晾干。置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品與對照品藥材在相同的位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照則不顯斑點，見圖1。

圖1 蒲地藍(lán)消炎口服液的薄層鑒別

2.2 高效液相色譜分析

2.2.1 色譜條件 Hypersil ODS(4.6 mm × 250 mm，2.5 μm)色譜柱;流動相:甲醇－磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鈉1.56 g，加水溶解為1 000 mL，再加1%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3.8 ～4.0);檢測波長 323 nm;流速 1.0 mL·min－1;柱溫40℃。理論板數(shù):以咖啡酸計算應(yīng)不低于3 000［4］。

2.2.2 溶液的制備

2.2.2.1 對照品溶液［5］精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24 h的咖啡酸對照品8.95 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.2.2 供試品溶液 取本品2 mL，置10 mL量瓶中，加5%甲酸的甲醇溶液至刻度，搖勻，離心，取上清液，置棕色瓶中，即得。

2.2.2.3 陰性對照液 取除蒲公英以外的其他3味藥材按處方制備成缺蒲公英的樣品，再按供試品溶液方法制備，即得。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取按2.2.2.1項下制備的對照品溶液，分別取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL 置于 10 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得。分別進樣10 μL，記錄色譜圖，由峰面積(Y)對相應(yīng)的濃度(X)直線回歸，得咖啡酸回歸方程為:Y=33.402X+16.38，r=0.999，表明咖啡酸在 8.95 ～53.7 μg·mL－1的濃度范圍內(nèi)線性相關(guān)(見表 2、圖2)。

表2 咖啡酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 咖啡酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2.4 專屬性試驗 分別取對照品溶液、樣品溶液、陰性對照液注入色譜儀，記錄色譜圖，從圖3、4、5中可以看出，咖啡酸與其相鄰峰完全分離，陰性對照色譜圖在對應(yīng)的咖啡酸峰位置處無干擾峰，即表明其他組分對測定無干擾?？Х人岱迮c其他組分峰的分離度都大于1.5。對照品液相色譜圖(見圖 3、4、5)。

圖3 對照品色譜圖

圖4 樣品色譜圖

圖5 陰性對照色譜圖

2.2.5 精密度考察 取同一對照品溶液連續(xù)進樣5次，進樣量10 μL，測定峰面積，計算RSD為0.26%。表明儀器與色譜條件具有良好的精密度。

2.2.6 重復(fù)性試驗 取同一批號的樣品5份，按2.2.2.2項制備供試品溶液，分別精密吸取各供試品溶液10 μL注入高效液相色譜儀。測定峰面積，結(jié)果連續(xù)5針供試品峰面積的RSD為0.30%，表明含量測定方法的重復(fù)性良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗 取同一樣品溶液，在 0、2、4、6、8、10 h分別進樣10 μL，依法測定峰面積，結(jié)果6次測定的咖啡酸峰面積RSD為0.01%，表明樣品溶液在10 h內(nèi)相對穩(wěn)定。

2.2.8 回收率試驗［7］精密量取同一批已知含量的供試品(含咖啡酸濃度為91.94 μg·mL－1)2 mL 6 份，分成 3 組，每組2份，分別置5 mL量瓶中，分別加入咖啡酸對照品(含咖啡酸濃度為 89.5 μg·mL－1)1.8、2.1、2.4 mL，加甲醇定容，按2.2.2.2 方法制備，按 2.2.1 項下分別進樣 10 μL，記錄色譜圖，計算咖啡酸的回收率(見表3)。

表3 咖啡酸回收率計算結(jié)果

2.2.9 樣品含量測定 將4批不同批號的蒲地藍(lán)消炎口服液按 2.2.3方法制備，進樣10 μL，測定峰面積，按外標(biāo)法計算含量(見表4)。

表4 咖啡酸含量測定結(jié)果

3 討論

本實驗采用硅膠G板，以三氯甲烷－甲醇－甲酸(9∶1∶0.5)為展開劑，置紫外光燈(365 nm)下檢視，斑點清晰。RP－HPLC在選擇檢測波長時，經(jīng)紫外－可見分光光度計掃描，咖啡酸在323.2 nm處有最大吸收，故選323 nm作為檢測波長。

4 結(jié)論

本方法可通過簡單有效的方法首先對蒲地藍(lán)消炎口服液中咖啡酸進行薄層色譜定性鑒別，確定其中含有咖啡酸，之后采用高效液相色譜法進行定量檢測，從而有效地控制蒲地藍(lán)消炎口服液中蒲公英的投藥量，為蒲地藍(lán)消炎口服液質(zhì)量控制提供了準(zhǔn)確、簡便、可行的方法。

［1］曹兵，胡春雪，熊葉紅，等.蒲地藍(lán)消炎片質(zhì)量控制方法研究［J］.大理學(xué)院學(xué)報，2008，7(8):4 －6.

［2］王柏清，郭青竹，董玉旺.蒲公英的藥理作用［J］.獸醫(yī)導(dǎo)刊，2010，10(12):43.

［3］桂風(fēng)云.蒲公英在婦科的臨床應(yīng)用［J］.甘肅中醫(yī)，2010，23(7):33 －34.

［4］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(一部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:331.

［5］晏嬡，劉世霆，許重遠(yuǎn)，等.高效液相色譜法同時測定蒲公英中咖啡酸和阿魏酸的含量［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2006，23(3):229 －231.

［6］劉廣川，呂劍，楊小孟.蒲地藍(lán)消炎片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.首都醫(yī)藥，2007，14(6):49.

［7］劉文英.藥物分析［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1998:72－73.