鄔昊洋 周 園 李諾飛 賀海波 鄒 坤

（1.三峽大學(xué)天然產(chǎn)物研究與利用湖北省重點實驗室，湖北宜昌 443002；2.宜昌市婦幼保健院，湖北宜昌 443000；3.三峽大學(xué) 中醫(yī)臨床醫(yī)學(xué)院，湖北宜昌 443000）

慢性咽炎主要為咽黏膜慢性炎癥，其病變主要在咽部粘膜層，粘膜慢性充血，粘膜及粘膜下層結(jié)締組織增生，粘液腺肥大，粘液分泌增多，其主要臨床表現(xiàn)為咽部不適感，如干燥、發(fā)癢、灼熱，以及異物感等.慢性咽炎病變部位特殊，病因復(fù)雜，纏綿難愈，給患者的工作和生活帶來很大影響［1］.西醫(yī)大多采用抗生素類藥物治療或輔以地塞米松等激素類制劑，但療效不佳，易反復(fù)發(fā)作；中醫(yī)藥對慢性咽炎治療具有毒副作用小、作用緩和持久的特點.很多學(xué)者、醫(yī)家從中醫(yī)整體觀念出發(fā)，辨證論治，取得了比較好的療效［2］.開口箭（Tupistra chinensis Bak.）為百合科鈴蘭族開口箭屬植物，具有清熱解毒、祛風(fēng)除濕、散瘀止痛的功效，主治咽喉腫痛，白喉，風(fēng)濕痹痛，跌打損傷，胃痛，癰腫瘡毒，毒蛇、狂犬咬傷等［3］.開口箭在民間作為清咽利喉藥已有悠久歷史，在前期的臨床和實驗研究證實開口箭對急、慢性咽炎有較好的療效［3－4］.為進(jìn)一步探討其作用機(jī)制，進(jìn)行了開口箭醇提物對慢性咽炎大鼠血清IL－1β及TNF－α等指標(biāo)影響的實驗研究.

1 材料與方法

1.1 動物

Wistar大鼠（SPF級）：48只，體重（200±20）g，由湖北省疾病控制中心實驗動物中心提供，合格證：SCXK（鄂）2008－0005.

1.2 藥品及試劑

開口箭醇提物：由天然產(chǎn)物研究與利用湖北省重點實驗室提供；西瓜霜含片：桂林三金制藥有限公司生產(chǎn)；氨水（濃度25%～27%）：洛陽市化學(xué)試劑廠；IL－1β和TNF－α：北京東亞免疫技術(shù)研究所.

1.3 方法

1）慢性咽炎動物模型的建立.實驗采用Wistar大鼠作為研究對象，用喉頭噴霧器將25%的氨水向其咽部噴霧，每日2次，上、下午各1次，每次噴3下（約0.5 mL），連噴40d.氨水是堿性刺激物質(zhì)，高濃度局部噴霧能刺激咽部粘膜，使之充血腫脹，形成慢性炎癥.

2）動物的分組及給藥.將48只Wistar大鼠隨機(jī)分為6組：正常組、模型組、西瓜霜組、開口箭醇提物劑低、中、高劑量組.后5組動物按上法造模40d后，于第40～47d分別用喉頭噴霧器給大鼠咽部噴蒸餾水、西瓜霜含片液（1.14g／kg）、開口箭醇提物低劑量組（0.16g／kg）、開口箭醇提物中劑量組（0.24g／kg）、開口箭醇提物高劑量組（0.32g／kg）.

3）檢測方法.實驗第47d各組動物給藥結(jié)束后，股靜脈取血，3 000rpm／min離心15min，取血清檢測IL－1β和TNF－α含量.然后立即取咽部粘膜及粘膜下組織進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)觀察.具體方法如下：組織固定48h后取出，切為2mm厚度，按常規(guī)脫水、透明、石蠟包埋、切片、HE染色，于光學(xué)顯微鏡下觀察、攝片.

2 結(jié) 果

2.1 一般狀態(tài)

從造模第2d開始，大部分大鼠逐漸出現(xiàn)搔抓口部、頻飲水而量多、口腔分泌物增多、納食減少、自發(fā)活動減少、咽部充血呈鮮紅色、腫脹等癥狀與體征；第3～7d癥狀較明顯，半月后大鼠明顯適應(yīng)，癥狀稍減退；正常對照組則未出現(xiàn)上述情況；開口箭醇提物高劑量組、西瓜霜組治療7d后，上述癥狀、體征基本恢復(fù)正常，中、低劑量組恢復(fù)稍差；模型對照組的上述癥狀、體征則仍然存在.

2.2 血常規(guī)指標(biāo)變化

與正常組相比，模型組白細(xì)胞和粒細(xì)胞數(shù)目顯著升高（P＜0.01）；開口箭醇提物可使其數(shù)目降低，與模型組比較具有顯著性差異（P＜0.01），其改善作用隨劑量的增加而增強(qiáng)，而且開口箭醇提物高劑量組效果優(yōu)于西瓜霜組（見表1）.

表1 開口箭醇提物對慢性咽炎大鼠血常規(guī)的影響，n＝8）

表1 開口箭醇提物對慢性咽炎大鼠血常規(guī)的影響，n＝8）

與正常組比較：＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；與模型組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01.

組別 劑量／（g·kg－1）白細(xì)胞數(shù)／（109·L－1）粒細(xì)胞數(shù)／（109·L－1－－ 5.73±0.5 0.4±0.1模型組 －－ 11.40±0.9＃＃2.6±0.2＃＃開口箭醇提物低劑量組 0.16 9.35±0.3＊＊ 0.6±0.1＊＊開口箭醇提物中劑量組 0.24 5.63±0.6＊＊ 0.5±0.1＊＊開口箭醇提物高劑量組 0.32 7.49±0.5＊＊ 0.5±0.1＊＊西瓜霜組 1.40 5.90±0.5＊＊ 0.9±0.1正常組）＊＊

2.3 開口箭醇提物對慢性咽炎大鼠血清IL－1β和TNF－α含量的影響

與正常相比，模型組血清中IL－1β和TNF－α含量顯著升高（P＜0.05 ＆P＜0.01）；開口箭醇提物可使血清中IL－1β和TNF－α含量降低，與模型組比較具有顯著性差異（P＜0.05 ＆P＜0.01），其改善作用隨劑量的增加而增強(qiáng)，而且開口箭醇提物高劑量組效果優(yōu)于西瓜霜組（見表2）.

表2 開口箭醇提物對慢性咽炎大鼠血清IL－1β和TNF－α含量的影響（，n＝8）

表2 開口箭醇提物對慢性咽炎大鼠血清IL－1β和TNF－α含量的影響（，n＝8）

與正常組比較：＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；與模型組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01.

組別 劑量／（g·kg－1）IL－1β／（pg·mL－1）TNF－α／（pg·mL－1）正常組 －－ 6.66±0.12 22.44±0.27模型組 －－ 9.87±0.30＃＃ 27.88±1.87＃開口箭醇提物低劑量組 0.16 8.22±0.15 22.78±0.67＊開口箭醇提物中劑量組 0.24 8.46±1.11 26.54±1.95＊＊開口箭醇提物高劑量組 0.32 7.71±0.61＊＊ 23.97±0.13＊＊西瓜霜組 1.40 7.90±0.56＊＊ 25.34±0.16＊＊

2.4 開口箭醇提物對慢性咽炎大鼠咽部組織形態(tài)學(xué)的影響

HE染色結(jié)果顯示：正常組可見黏膜上皮層多為未角化復(fù)層扁平上皮；固有層多為致密結(jié)締組織，內(nèi)有少量血管，未見有血管擴(kuò)張，水腫，炎性細(xì)胞浸潤及纖維組織增生；黏膜下層、肌肉層結(jié)構(gòu)正常，均未見明顯炎性改變.模型組：大部分動物咽部黏膜上皮層可見明顯增生；固有層內(nèi)見血管擴(kuò)張及大量炎性細(xì)胞浸潤，纖維組織增生；黏膜下層可見腺體肥大、增生、萎縮等，其周圍見血管數(shù)量增多、血管擴(kuò)張、炎性細(xì)胞密集性浸潤及纖維組織增生；與模型組比較，開口箭醇提物和西瓜霜治療后大部分大鼠咽部未見角化復(fù)層扁平上皮；固有層內(nèi)充血輕，未見明顯纖維增生，部分動物結(jié)締組織緊密接近正常組；黏膜下層混合腺未見明顯肥大、增生、萎縮等（如圖1所示）.

圖1 開口箭醇提物對慢性咽炎大鼠咽部組織形態(tài)學(xué)的影響

3 討 論

氨水是堿性刺激物質(zhì)，局部噴霧能刺激咽部黏膜，使之充血腫脹，形成急性炎癥，反復(fù)刺激，形成慢性炎癥.在實驗中，選用 Wistar大鼠為研究對象，造模后，白細(xì)胞和粒細(xì)胞數(shù)目顯著升高；炎性細(xì)胞因子IL－1β和TNF－α含量顯著升高；病理切片結(jié)果顯示：模型動物咽部黏膜上皮層可見明顯增生、炎性細(xì)胞浸潤，纖維組織增生及腺體肥大、增生、萎縮等.上述病理特征的變化基本符合臨床上慢性咽炎診斷標(biāo)準(zhǔn)［5－6］.醫(yī)書記載：開口箭以根狀莖入藥，具有清熱解毒、祛風(fēng)除濕、散瘀止痛的功效［7］，現(xiàn)代藥理實驗研究表明其具有較強(qiáng)的抗腫瘤、抗炎［3］、抑菌、醒酒等活性.本實驗研究發(fā)現(xiàn)：在用開口箭醇提物治療后，開口箭醇提物在改善大鼠一般狀態(tài)，降低白細(xì)胞和粒細(xì)胞數(shù)目及IL－1β、TNF－α含量，改善病理組織形態(tài)學(xué)方面顯示出較好的療效和優(yōu)勢.本實驗證實開口箭醇提物在改善咽部炎性癥狀，改變咽部病理組織形態(tài)方面，具有獨特優(yōu)勢.其治療咽炎的主要機(jī)制是：減少炎性細(xì)胞因子生成，對抗過量細(xì)胞因子，減緩對炎性細(xì)胞的趨化與激活，從而達(dá)到對抗咽部炎癥.

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