白雪松，杜 鵑，謝巧英 (吉林醫(yī)藥學(xué)院營養(yǎng)教研室，吉林吉林 132013)

黃花菜(Hemerocallis fulva)又名金針菜、忘憂草、萱草，俗名金針花，為百合科多年生草本植物，《本草綱目》記載黃花菜有安神醒腦，增智寬胸，美容養(yǎng)血，解熱消毒，除煩通乳之功效。黃花菜鮮甜味美，葷素兼優(yōu)，在中國醫(yī)學(xué)3 000多年的食療歷史中，黃花菜被列為常用食療食品之一［1］。黃花菜營養(yǎng)豐富，含有糖類、蛋白質(zhì)、維生素、無機(jī)鹽及多種人體必需的氨基酸。在現(xiàn)代生活中，黃花菜與香菇、木耳、冬筍一起被稱為蔬菜類中的四大珍品［2］?！吨兴幋筠o典》記載［3］，黃花菜含有生物堿 0 .7%，苷 1 .8%，黃酮類0.75%。黃酮乃植物中廣泛存在的一種有效成分，具有保肝抗炎、鎮(zhèn)定補(bǔ)腦、延緩衰老、抗氧化自由基活性作用，此外還有降壓、降血脂、提高機(jī)體免疫力等藥理活性［3］。因此近年來黃酮類化合物成為了新藥開發(fā)研究中的一個(gè)非常重要的資源，具有廣闊的開發(fā)應(yīng)用前景。本研究采用單因子試驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)超聲波法提取黃花菜總黃酮的最佳條件進(jìn)行研究，探尋黃花菜總黃酮制備工藝，為進(jìn)一步開發(fā)黃花菜提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品與儀器

KQ-100DB型數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);紫外-可見分光光度計(jì)UV-1800(日本島津公司);HHS型電熱恒溫水浴鍋(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠);凱達(dá)TD5A離心機(jī)(湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司);202-1型電熱恒溫干燥箱(天津市泰斯特儀器有限公司);FA1104N電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

黃花菜(購于吉林市);蘆丁(購自中國藥品生物制品檢定所);乙醚(分析純);無水乙醇(分析純)。

1.2 樣品處理

將黃花菜用蒸餾水沖洗，放入干燥箱中60℃干燥至恒重，用中藥粉碎機(jī)粉碎成粉末，過100目篩，得黃花菜粉末放于蒸發(fā)皿，置于干燥器中備用。稱取干燥樣品2.000 g，45℃乙醚脫脂脫色至澄清透明，自然風(fēng)干備用。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精確稱取10 mg已烘至恒重蘆丁標(biāo)樣，以70%乙醇溶液溶解并定容至50 mL，搖勻即得濃度為0.2 mg/mL標(biāo)樣儲(chǔ)備液［5］。

取蘆丁標(biāo)樣儲(chǔ)備液體5.00 mL于25 mL容量瓶中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)70%乙醇溶液定容，用紫外分光光度計(jì)在190～400 nm范圍內(nèi)進(jìn)行吸光度掃描，2次掃描重復(fù)平均，最大特征吸收峰為360 nm。

分別移取 0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL 蘆丁標(biāo)樣儲(chǔ)備液于6個(gè)10 mL容量瓶中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)70%的乙醇溶液定容，在360 nm處測定吸光度。以濃度對(duì)吸光度進(jìn)行回歸，計(jì)算回歸方程和相關(guān)系數(shù)。

1.4 黃花菜總黃酮含量的測定

準(zhǔn)確稱取2.000 g黃花菜干粉，脫脂風(fēng)干后于錐形瓶中，按需要的比例加入一定質(zhì)量分?jǐn)?shù)的乙醇，于一定溫度、一定超聲頻率提取一定時(shí)間，離心10 min(3 000 r/min)，上清液即為總黃酮提取液。吸取上清液于50 mL容量瓶，加入與上述相同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的乙醇定容，取1 mL樣液稀釋至10 mL，測定在360 nm處的吸光度，由回歸方程計(jì)算出樣液濃度，進(jìn)而計(jì)算出總黃酮量和黃花菜的總黃酮含量。

1.5 單因素實(shí)驗(yàn)

按所給的條件和測定總黃酮含量的方法進(jìn)行不同乙醇濃度，料液比，提取時(shí)間，提取溫度，超聲頻率的單因素實(shí)驗(yàn)，得出總黃酮提取效果與因素水平的關(guān)系。

1.5.1 乙醇濃度對(duì)黃花菜總黃酮提取率的影響

分別準(zhǔn)確稱取黃花菜干粉2.000 g，料液比1∶20，溫度60℃，超聲頻率60 Hz用50%、60%、70%、80%、90%的乙醇超聲提取30 min，確定最佳提取濃度。

1.5.2 提取時(shí)間對(duì)黃花菜總黃酮提取率的影響

分別準(zhǔn)確稱取黃花菜干粉2.000 g，提取劑乙醇濃度為70%，料液比為1∶20，溫度60℃，超聲頻率60 Hz，選擇不同的提取時(shí)間 20、30、40、50、60 min 進(jìn)行超聲波提取，確定最佳提取時(shí)間。

1.5.3 料液比對(duì)黃花菜總黃酮提取率的影響

分別準(zhǔn)確稱取黃花菜干粉2.000 g，提取劑乙醇濃度為70%，溫度60℃，超聲頻率60 Hz，選擇不同的料液比 1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30 超聲提取40 min，確定最佳提取料液比。

1.5.4 溫度對(duì)黃花菜總黃酮提取率的影響

分別準(zhǔn)確稱取黃花菜干粉2.000 g，提取劑乙醇濃度為70%，料液比1∶20，超聲頻率60 Hz，選擇不同的溫度40、50、60、70、80 ℃ 進(jìn)行超聲提取 40 min，確定最佳溫度。

1.5.5 超聲頻率對(duì)黃花菜總黃酮提取率的影響

分別準(zhǔn)確稱取黃花菜干粉2.000 g，提取劑乙醇濃度為70%，料液比1∶20，溫度60℃，選擇不同的頻率 40、50、60、70、80 Hz進(jìn)行超聲提取 40 min，確定最佳頻率。

1.6 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)以上單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，采用L9(34)正交表以乙醇濃度(A)、超聲時(shí)間(B)、料液比(C)、超聲頻率(D)4個(gè)因素，選取各因素的較優(yōu)區(qū)域3個(gè)水平，乙醇濃度(50，60，70)%，超聲時(shí)間(20，30，40)min，料液比(1∶10，1∶15，1∶20)，超聲頻率(50，60，70)Hz，做正交實(shí)驗(yàn)，每次做3個(gè)平行，取平均值，見表1。

1.7 最優(yōu)條件提取黃花菜總黃酮含量

準(zhǔn)確稱取2.000 g黃花菜干粉，在最佳條件下，即乙醇濃度為60%，料液比為1∶20，超聲頻率為60 Hz，超聲提取40 min，進(jìn)行超聲波提取，得總黃酮含量，本次試驗(yàn)做3個(gè)平行。

表1 黃花菜中總黃酮超聲波提取工藝的因素水平表

2 結(jié)果

不同乙醇濃度對(duì)總黃酮提取效果影響的結(jié)果顯示，乙醇濃度在50% ～70%時(shí)，總黃酮含量隨乙醇濃度的增大而增大，乙醇濃度在70% ～90%時(shí)，總黃酮含量隨乙醇濃度的增大而減小，乙醇濃度在70%時(shí)，總黃酮含量最大。在乙醇濃度為50%、60%、70%時(shí)提取效果比較好。因此，超聲條件下選擇乙醇濃度50%、60%、70%做正交試驗(yàn)。

不同時(shí)間對(duì)總黃酮提取效果影響的結(jié)果顯示，總黃酮含量隨提取時(shí)間的增加而增大，提取初期，總黃酮含量增長很快，但越接近提取終點(diǎn)，黃酮成分?jǐn)U散很慢，但最后又突然增加很快，可能是有雜質(zhì)溶出，所以選擇20、30、40 min做正交試驗(yàn)。

不同料液比對(duì)總黃酮提取效果影響的結(jié)果顯示，料液比在1∶20、1∶25、1∶30時(shí)提取效果隨溶劑用量的增加不明顯，因此選擇料液比為1∶10、1∶15、1∶20做正交試驗(yàn)。

不同溫度對(duì)總黃酮提取效果影響的結(jié)果顯示，在50℃、60℃、70℃時(shí)提取效果比較好，但是在此溫度區(qū)間，總黃酮提取效果隨溫度的變化不大，所以溫度就不作為正交試驗(yàn)的一個(gè)因素。

不同頻率對(duì)總黃酮提取效果影響的結(jié)果顯示，隨頻率的增加，總黃酮提取效果增加，在60 Hz時(shí)，提取效果最好。之后，隨頻率增加，提取效果反而降低了。所以選擇頻率50 Hz、60 Hz、70 Hz做正交試驗(yàn)。

正交試驗(yàn)結(jié)果及分析結(jié)果見表2，由表2顯示的r值大小可以看出料液比(C)對(duì)總黃酮提取效果的影響最大，乙醇濃度(A)次之，提取時(shí)間(B)和提取頻率(D)的影響最小。最佳提取工藝組合為A2B3C3D2，即提取黃花菜中總黃酮的最佳提取工藝條件:乙醇濃度60%，提取時(shí)間為40 min，料液比為1∶20，超聲頻率為60 Hz。在最佳條件下，即乙醇濃度為60%，料液比為1∶20，超聲頻率為60 Hz，超聲提取40 min，測得黃花菜中總黃酮含量為0.536%。

3 討論

黃花菜中含有豐富的黃酮化合物，本研究詳細(xì)探討了黃花菜總黃酮的超聲波提取工藝，為開發(fā)利用該資源提供了有益的參考。本次試驗(yàn)結(jié)果表明:影響黃花菜的總黃酮的提取率各因素的主次順序?yàn)榱弦罕?C)＞乙醇濃度(A)＞提取時(shí)間(B)＞超聲頻率(D)。最佳提取工藝條件為A2B3C3D2，即乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%、料液比1∶20、超聲頻率60 Hz、提取時(shí)間40 min。在此條件下，黃花菜中的總黃酮含量為0.536%。

表2 黃花菜中總黃酮超聲提取工藝正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

［1］Uezu E.A philological and experimental investigation of the effects of Hemerocallis as food in man and ddy mice［J］.Bull Coll Educ Univ Ryukyus，1997，54:231-238.

［2］鄧放明，尹 華，李精華，等.黃花菜應(yīng)用研究現(xiàn)狀與產(chǎn)業(yè)化開發(fā)對(duì)策［J］.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2003，29(6):529-532.

［3］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典［M］.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，1986.

［4］徐任生，葉 陽，趙維民.天然產(chǎn)物化學(xué)［M］.北京:科學(xué)出版社，2004:562-564.

［5］中華人民共和國藥典:一部［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005.