呂雪斌 劉秀芬 李耿 雷海軍 羅安東

安神膠囊是臨床常用的一種非處方藥，收載于2010版藥典。用于陰血不足，失眠多夢(mèng)，心悸不寧，五心煩熱，盜汗耳鳴。方中酸棗仁、何首烏、茯苓、丹參、麥冬多味藥具有安神除煩的作用［1］。現(xiàn)代藥理研究表明，有鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥的藥理作用［2］，臨床上用治療療失眠健忘、睡眠多夢(mèng)等癥［3］?，F(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)僅以五味子醇甲含量作為質(zhì)控指標(biāo)［4］，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法，以 2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷為測(cè)定成分，進(jìn)一步控制該制劑的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-20AT高效液相色譜儀，島津，包括：SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器，LC-20AT溶液傳輸單元，SPD-20A檢測(cè)器，LC solution色譜工作站;十萬分之一分析天平(Sartorius-BP211);萬分之一分析天平(Precisa-XS225A);0.22 μm微孔濾膜。

1.2 試藥 2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品，含量大于98%(廣州市藥品檢定研究所，批號(hào)：110844-200908);安神膠囊(0.25 g/粒，吉林康福藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20100701);乙腈為色譜純，蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Intersil ODS(4.6 mm×150 mm，5 μm);流動(dòng)相：乙腈-水(22∶78);流速：1.0 ml/L;檢測(cè)波長(zhǎng)：320 nm;柱溫：室溫;進(jìn)樣量：10 μl;理論塔板數(shù)按 2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

2.2 系統(tǒng)適應(yīng)性考察

2.2.1 供試品溶液的制備：取囊殼內(nèi)的藥粉0.75 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入50%乙醇25 ml，精密稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液過0.45 μm的微孔濾膜，即為供試品溶液。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備：十萬分之一分析天平精密稱定2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品 2.36 mg，置于10 ml棕色容量瓶中，加甲醇制成每1 ml含0.236 mg的對(duì)照品貯備溶液。再精密移取2 ml對(duì)照品貯備液置于10 ml容量瓶中，加甲醇制成濃度為0.0472 mg/ml的對(duì)照品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備：參照2010版中國藥典中安神膠囊制備工藝制備缺制何首烏陰性樣品，照“2.2.1”法制備缺制何首烏陰性對(duì)照溶液。照“2.1”項(xiàng)色譜條件，分別精密吸取上述溶液各 10 μl，進(jìn)樣，得色譜圖，結(jié)果供試品中 2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品色譜峰與對(duì)照品具有相同的保留時(shí)間，陰性對(duì)照無干擾。見圖1。

圖1 二苯乙烯對(duì)照品，安神膠囊樣品，缺何首烏安神膠囊樣品HPLC色譜圖

2.3 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液5，10，20，30，40，50，60 μl注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積積分值。以二苯乙烯苷含量(X，μg)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)線性回歸，得回歸方程：y=34.996x+1.3887 r=0.9995。

結(jié)果表明 2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在0.236～2.832 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μl注入液相色譜儀5次，記錄色譜圖，峰面積分別為11 289 570、11 235 706、11 255 690、11 275 460、11 241 430 平均峰面積為11 259 571.2，RSD=0.20%(n=5)，表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液在上述色譜條件下分別于 0、1、2、4、6、12 h 進(jìn)樣 10 μl測(cè)定，結(jié)果，RSD=1.5%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品6份，按“2.2.1”項(xiàng)的方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果，RSD=1.97%，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 在已知含量的樣品中分別加入不同量的二苯乙烯苷對(duì)照品，配制成供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定其含量，并計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為99.75%，RSD=2.6%。見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品含量測(cè)定 按“2.2.1”項(xiàng)制備3批樣品(20100701、20100702、20100703)的供試品溶液，注入液相色譜儀，測(cè)定二苯乙烯苷含量，結(jié)果安神膠囊中二苯乙烯苷平均含量分別為：0.97、1.15、1.08 mg/g。見表 2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在強(qiáng)光、堿性條件下極不穩(wěn)定，配制時(shí)應(yīng)用棕色容量瓶裝，最好現(xiàn)配現(xiàn)用。

3.2 2010版藥典中安神膠囊項(xiàng)下含量測(cè)定只有五味子甲素，鑒于制何首烏在本方中所起的補(bǔ)肝腎，益精血，安神作用，本研究以二苯乙烯苷含量為指標(biāo)，結(jié)果在實(shí)驗(yàn)測(cè)定條件下其HPLC峰不受雜質(zhì)峰的干擾，測(cè)試結(jié)果比較準(zhǔn)確，可為安神膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善提供參考。

1 國家藥典委員會(huì)主編.中華人民共和國藥典.第1部.北京化學(xué)工業(yè)出版社，2010.717.

2 付聰.安神膠囊主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn).中國社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)學(xué)專業(yè))，2011，32：8.

3 吳麗敏，牟欣，王愛武，等.安神膠囊的研制及臨床療效觀察.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2005，4：333.

4 申玉華，馬林，韓文志，等.HPLC法測(cè)定安神膠囊中五味子醇甲的含量.中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2006，2：17-20.