鄒亞峰 劉桂舫 王國臣 曹俊華 劉桂華

Survivin作為凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins，IAP)家族的重要成員，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。Survivin幾乎表達于所有的惡性腫瘤，但在人體正常終末分化的組織細胞中不表達或低表達。腫瘤自身抗體產(chǎn)生的機制雖然還不明確，但同腫瘤相關(guān)抗原一樣，其與腫瘤的發(fā)生發(fā)展存在密切的聯(lián)系。據(jù)研究顯示在多種癌癥血清中可以檢測到Survivin自身抗體的存在，如頭頸癌、卵巢癌以及消化系統(tǒng)腫瘤胃癌、結(jié)腸直腸癌、肝癌等［1-4］。在肺癌患者血清中同樣可以檢測到Survivin自身抗體［3，5］，本實驗通過用 ELISA法對非小細胞肺癌患者手術(shù)前血清中抗-Survivin抗體的測定，觀察非小細胞肺癌抗-Survivin抗體陽性與陰性患者術(shù)后生存期差異。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 選擇河北聯(lián)合大學附屬醫(yī)院胸外科和河北省遷安市人民醫(yī)院胸外科2005年1月至2006年3月260例非小細胞肺癌患者血清標本，經(jīng)ELISA法檢測后證實抗-Survivin抗體陽性患者134例，陰性患者126例，其中抗-Survivin抗體陽性患者69例手術(shù)治療(陽性組)，陰性患者62例手術(shù)治療(陰性組)。術(shù)前1周采血離心后的血清標本，經(jīng)ELISA法以高于對照組均值2個標準差作為確定非小細胞肺癌抗存活素抗體陽性的診斷標準：1.3946+2×0.0846=1.56 U/ml。抗存活素抗體陽性的69例及抗-Survivin抗體陰性62例手術(shù)患者術(shù)后隨訪，獲得69例抗-Survivin抗體陽性患者及62例抗-Survivin抗體陰性患者的術(shù)后生存資料，隨訪率為100%。術(shù)后生存期從手術(shù)之日開始計算，以d為單位，直至術(shù)后死亡為止。臨床行為狀態(tài)評分依據(jù)美國腫瘤東方合作標準(ECOG)。

1.2 實驗試劑 人抗存活素抗體/生存蛋白(SurvAb)酶聯(lián)免疫分析試劑盒(上海麥莎生物科技有限公司，產(chǎn)品編號：E1814h)檢測范圍1.56～100 U/ml。

1.3 檢測方法 血清抗存活素抗體濃度測定采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，嚴格按說明書實驗步驟操作，450 nm光波檢測吸光度。

1.4 計算以標準物的濃度為橫坐標(對數(shù)坐標)，OD值為縱坐標(普通坐標)，在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線根據(jù)樣品的OD值，由標準曲線查出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù);或用標準的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

1.5 統(tǒng)計學分析應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，計量資料以±s表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 術(shù)前抗-Survivin抗體測量結(jié)果 69例抗-Survivin抗體陽性非小細胞肺癌術(shù)前抗-Survivin抗體水平(2.1009±0.7342)U/ml，鱗癌(2.4352 ± 0.5045)U/ml，腺癌(2.3792 ±0.5610)U/ml，抗-Survivin抗體陰性患者62例，抗-Survivin抗體水平(1.3946 ±0.0646)U/ml，鱗癌(1.3656 ±0.0568)U/ml，腺癌(1.434 ±0.0873)U/ml。見表1。

表1 肺癌手術(shù)患者術(shù)前抗-survivin抗體測量結(jié)果U/ml，±s

表1 肺癌手術(shù)患者術(shù)前抗-survivin抗體測量結(jié)果U/ml，±s

病理類型 陽性 抗survivin 陰性 抗survivin u值 P值鱗癌69 2.1009±0.7342 62 1.3946±0.0646 33 2.4352±0.5045 32 1.3656±0.0568腺癌 36 2.3792±0.5610 30 1.4340±0.0873 7.96 ＜0.05鱗癌+腺癌

2.2 抗-Survivin抗體陽性與陰性比較 以抗-Survivin抗體陽性和陰性為2組，統(tǒng)計分析2組患者與各臨床特點的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)抗-Survivin抗體陽性與陰性組之間比較顯，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。陽性組與陰性組與腫瘤分化程度相關(guān)，陽性組中低分化多于高分化，陰性組高分化多于中低分化，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。陽性組與陰性組比較與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)?？?Survivin抗體陽性組生存期短于抗-Survivin抗體陰性組，差異有有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。血清抗-Survivin抗體二水平組與其他臨床特點差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見表2。

表2 NSCLC患者各臨床特點與血清抗-Survivin抗體二水平組的比較

3 討論

Survivin蛋白的組織分布特征有明顯的細胞選擇性，它表達于胚胎和發(fā)育的胎兒組織，不見于終末分化的正常成人組織(胸腺和生殖腺除外)，但在體內(nèi)外的分化組織、人類大多數(shù)腫瘤組織內(nèi)有Survivin蛋白的表達。該蛋白可被自身固有T細胞所識別，具有抗原性，血清中其抗體稱為抗-Survivin抗體。癌細胞的存活素過表達可導致抗存活素抗體和細胞毒性T-淋巴細胞抗癌反應(yīng)［6，7］。2004 年 Joseph等［8］報道對頭頸癌獲得癌癥治療前連續(xù)294人的血液進行了抗存活素抗體的檢測，標準治療是對早期患者行根治性手術(shù)，研究結(jié)果顯示抗存活素和腫瘤侵襲性相關(guān)，表明血清自身抗體可以代表細胞的狀態(tài)。這些結(jié)果提示檢測循環(huán)血液中的抗存活素抗體可以作為檢測確定頭頸癌狀態(tài)的一種有用的非侵襲性標志物。

我們的研究結(jié)果顯示：抗-Survivin抗體陽性組與陰性組之間比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。陽性組與陰性組與腫瘤分化程度相關(guān)，陽性組中低分化多于高分化，陰性組高分化多于中低分化，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。陽性組與陰性組比較與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)，說明即使是同一種腫瘤，且組織中均有Survivin蛋白的聚集，有的病例表達抗存活素抗體，有的病例不表達，提示抗存活素抗體的表達可能和宿主的免疫狀態(tài)有關(guān)。Atsuhito等［9］在其研究中亦報道抗存活素的抗體反應(yīng)并不是在那些表達存活素癌癥患者的所有患者中表現(xiàn)的?？?Survivin抗體陽性組生存期短于抗-Survivin抗體陰性組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。血清抗-Survivin抗體二水平組與其他臨床特點差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。存活素表達和侵襲性疾病的相關(guān)性已在很多癌癥中被發(fā)現(xiàn)［10-12］，在此項研究中，抗存活素抗體和腫瘤侵襲性相關(guān)，抗-Survivin抗體陰性組的生存期明顯長于陽性組，因此術(shù)前檢測NSCLC患者血清中抗-Survivin抗體對判斷患者預(yù)后有一定的指導作用。

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