王晶余 孫紹騫 張 娟 鄭蘭娥 (吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院康復科，吉林 長春 130033)

綜合康復對帕金森病模型大鼠環(huán)氧合酶2表達的影響

王晶余 孫紹騫 張 娟 鄭蘭娥 (吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院康復科，吉林 長春 130033)

綜合康復;帕金森病模型;環(huán)氧合酶2

帕金森病(PD)是一種慢性進展性疾病，目前尚無根治方法。多數(shù)患者發(fā)病數(shù)年內(nèi)尚能繼續(xù)工作，也有迅速發(fā)展致殘者，晚期由于肌強直、全身僵硬終至臥床不起，給社會和個人造成極大的經(jīng)濟及心理負擔。目前康復治療PD已取得較好療效，但大多通過臨床觀察得到一些結(jié)論。本文擬通過動物實驗進一步驗證其有效性，從而客觀上證明康復治療的可行性。

1 材料與方法

1.1 動物、造模與分組 Wistar大鼠86只，體重250～300 g，腹腔注射 1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)30 mg/kg，生理鹽水溶解，1次/d，連續(xù)5 d，建立PD模型。隨機分為實驗組46和對照組各40只。實驗組應用綜合康復治療。

1.2 綜合康復方法 ①針灸治療根據(jù)中醫(yī)經(jīng)絡理論選取穴位，1次/d，脈沖式中頻電刺激，電極置于四肢肌肉，多為伸肌運動點，下肢常選踝背屈及屈肌運動點，電流強度5～20 mA，脈沖電刺激20 s，間斷20 s，16 min/次。②保持環(huán)境安靜，給予輕快、幽雅音樂療法，可配合日光浴、空氣浴，以增強功效。③康復療法:采用本體感覺神經(jīng)肌肉促進法，有節(jié)奏地進行，以被動為主;同時進行所有關(guān)節(jié)的充分運動，預防攣縮。

1.3 免疫組化檢測環(huán)氧合酶-2(COX-2)水平 動物均于最后1次康復治療后處死。動物麻醉后，行40 g/L多聚甲醛磷酸鹽緩沖液常規(guī)灌注固定，迅速開顱取腦，40 g/L多聚甲醛后固定48 h(4℃)，石蠟包埋、切片。常規(guī)脫蠟至水后，用TBST(pH7.4±0.2)洗3次，每次3 min;組織抗原行水浴法熱修復;30 ml/L過氧化氫阻斷內(nèi)源過氧化物酶，TBST洗3次;用正常非免疫動物血清室溫孵育10 min;同一組織相鄰切片分別加入兔抗人 COX-2 mAb(1∶100)，小鼠抗人 TH mAb(1∶400)，兔抗人p-c-Jun抗體(Ser63，1∶100)，4℃ 過夜;TBST 洗 3 次后，加入生物素標記第二抗體室溫孵育20 min;TBST洗3次，加入鏈霉素抗生物素蛋白過氧化酶室溫孵育20 min，DAB顯色，中性樹膠封固，光鏡下觀察。用多巴胺能神經(jīng)元特異性標志酶酪氨酸羥化酶(TH)判定模型小鼠黑質(zhì)區(qū)多巴胺能神經(jīng)元變化;用炎癥標志性酶COX-2觀察黑質(zhì)區(qū)炎癥變化。

2 結(jié)果

實驗組、對照組小鼠黑質(zhì)致密部COX-2陽性細胞的數(shù)量分別為35.7±3.2、58.3±3.9，組間差異顯著(P＜0.01)。見圖1。

圖1 兩組COX-2表達水平

3 討論

愈來愈多的實驗研究表明，細胞凋亡可能是PD患者黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元缺失的重要原因〔1，2〕。在凋亡過程中，凋亡蛋白酶活化因子1是凋亡的直接刺激物，可與半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族分子結(jié)合，導致半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3激活，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3是凋亡過程的最終執(zhí)行者，能夠進入細胞核內(nèi)，切割滅活DNA的修復酶、多聚合酶，干擾細胞能量代謝，最終導致細胞死亡。近年研究發(fā)現(xiàn)PD與COX-2及炎癥密切相關(guān)〔3，4〕。在炎癥性疾病中，COX-2是炎癥介質(zhì)前列腺素生物合成的限速酶，與反應性氧自由基生成增多和白細胞介素1、腫瘤壞死因子等炎性細胞因子高表達有關(guān)，而上述因素又可導致凋亡蛋白酶活化因子1的激活。

本實驗結(jié)果表明，綜合康復治療后可使COX-2數(shù)量減少，為綜合康復治療PD提供了新的理論依據(jù)。

1 Eberhardt O，Schulz JB.Apoptotic mechanisms and antiapoptotic therapy in the MPTP model of Parkinson's disease〔J〕.Toxicol Lea，2003;139(2-3):135-51.

2 Andersen JK.Does neuronal loss in Parkinsin's disease involve programmed cell death〔J〕.Bioessays，2007;23(7):640-6.

3 Minghetti L.Cyclooxygenase-2(cox-2)in inflammatory and degenerative brain diseases〔J〕.Neuropathol Exp Neurol，2004;63(9):901-10.

4 Teismann P，Vila M，Choi DK，et al.Cox-2 and neurodegeneration in Parkinson's disease〔J〕.Ann N Y Acad sci，2003;991(2):272-7.

〔2012-01-19收稿 2012-02-26修回〕

(編輯 徐 杰)

R74

A

1005-9202(2012)17-3834-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.17.123

王晶余 (1968-)，男，碩士，主任醫(yī)師，主要從事康復醫(yī)學基礎(chǔ)與臨床研究。