范紅梅，劉志海，胡秋燕

(1.貴州省黔西南州食品藥品檢驗(yàn)所，貴州 興義 562400; 2.貴州省黔西南州人民醫(yī)院，貴州 興義 562400)

健心安神合劑是由柴胡、黃芩、百合、白芍、酸棗仁、五味子、知母、川芎、茯苓、黨參、大棗、甘草等15味中藥組方的純中藥液體制劑，是醫(yī)院治療神經(jīng)衰弱的一劑良方。該合劑以治療失眠多夢、神疲乏力、頭暈頭痛、記憶力差、心情煩躁為主癥，經(jīng)臨床應(yīng)用，療效顯著。為保證和控制該制劑的質(zhì)量，本試驗(yàn)對健心安神合劑進(jìn)行了定性定量研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津LC－20AD型高效液相色譜儀及其色譜工作站。黃芩苷對照品(批號為 110745－200415)，柴胡對照藥材(批號為120992－200705)，百合對照藥材(批號為 121100－200402)，白芍對照藥材(批號為120905－200508)，五味子對照藥材(批號為120922－200606)，川芎對照藥材(批號為 120918－200809)均購于中國藥品生物制品檢定所。健心安神合劑為自制(規(guī)格為100mL/瓶，批號為 20100925，20100926，20101008)。甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑試藥為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別 [1]

柴胡:取本品5mL，加甲醇15mL，振搖5min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取柴胡對照藥材0.5 g，加甲醇15mL，超聲處理10min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，制成對照藥材溶液。再取不含柴胡的陰性樣品，依法制備陰性對照品溶液。吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－乙醇－水(8∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%對二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在60℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾(圖1 A)。

百合:取本品5mL，加甲醇15mL，振搖5min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取百合對照藥材1 g，加甲醇10mL，超聲處理20min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，制成對照藥材溶液。再取不含百合的陰性樣品，依法制備陰性對照品溶液。吸取上述溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯－甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾(圖1 B)。

白芍:取本品5mL，加無水乙醇15mL，振搖5min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?.5mL使溶解，作為供試品溶液。另取白芍對照藥材0.5 g，加乙醇10mL，超聲處理20min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5mL制成對照藥材溶液。再取不含白芍的陰性樣品，依法制備陰性對照品溶液。吸取上述溶液5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸(40 ∶5 ∶10 ∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以 5% 香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾(圖1C)。

五味子:取本品5mL，加三氯甲烷20mL，加熱回流30min，放冷，分取三氯甲烷層，蒸干，殘?jiān)尤燃淄?.5mL使溶解，作為供試品溶液。另取五味子對照藥材0.5 g，同法制備對照藥材溶液。再取不含五味子的陰性樣品，依法制備陰性對照品溶液。吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾(圖 1D)。

圖1 薄層色譜圖

川芎:取本品5mL，用乙醚分2次提取，每次10mL，合并乙醚層，揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?.5mL使溶解，作為供試品溶液。另取川芎對照藥材0.5 g，加乙醚20mL，加熱回流1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴?.5mL使溶解，作為對照藥材溶液。再取不含川芎的陰性樣品，依法制備陰性對照品溶液。吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁烷－乙酸乙酯(9∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾(圖1 E)。

2.2 黃芩苷含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱:Symmetry C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－0.4%磷酸溶液(47∶53);檢測波長:278 nm;流速:1.0mL/min;柱溫:常溫;進(jìn)樣量:10μL;理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不低于3 000。

2.2.2 溶液制備

精密稱取60℃減壓干燥6 h的黃芩苷對照品10.32 mg，置100mL棕色容量瓶中，加甲醇30mL，超聲使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為103.2μg/mL的對照品溶液。精密量取本品5mL，置50mL容量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，續(xù)濾液再用濾膜(0.45μL)濾過，即得供試品溶液。制備不含黃芩藥材的健心安神合劑，精密量取5mL，依法制備陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

專屬性考察:精密吸取陰性對照品溶液、對照品溶液、供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，按擬訂條件進(jìn)行測定，可見黃芩苷在9 min左右出現(xiàn)色譜峰，陰性對照品溶液中無黃芩苷色譜峰，說明方法專屬性良好。結(jié)果見圖2。

圖2 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取對照品溶液 1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL，置 10mL 容量瓶中，加 50% 甲醇至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為 10.32，20.64，41.28，61.92，82.56，103.2mg/L 系列濃度待測對照品溶液。分別吸取不同質(zhì)量濃度的對照品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，以測得的峰面積值(Y)為縱坐標(biāo)、黃芩苷的進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=57.339 2X+33.39，r=0.999 8。結(jié)果表明，黃芩苷質(zhì)量濃度在10.32～103.2mg/L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取黃芩苷對照品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果的 RSD為0.5%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一樣品(批號為20101008)5份，依法制備供試品溶液，精密量取10μL，注入高效液相色譜儀。結(jié)果黃芩苷的峰面積 RSD為0.8%(n=5)，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一樣品(批號為20101008)1份，依法制成供試品溶液，于 0，6，12，24，48 h時(shí)分別進(jìn)樣 10 μL 測定。結(jié)果的RSD為1.1%，表明供試品溶液在48 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):精密量取已知含量的樣品(批號為20101008)6份，每份2.5 mL，分別精密加入黃芩苷對照品溶液(質(zhì)量濃度為0.443 5mg/mL)各10mL，依法制成供試品溶液，吸取10μL，注入高效液相色譜儀檢測。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.2.4 樣品含量測定

取3批樣品，按上述方法處理和測定，計(jì)算黃芩苷的含量，結(jié)果測得3批健心安神合劑的黃芩苷含量在 1.843 ～2.053 g/L，暫定本品黃芩苷的含量不低于1.5 g/L(平均值下浮約 20%)。見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

健心安神合劑中黃芩在處方中用量較大，相對柴胡為臣藥，故對其進(jìn)行含量測定;黃芩苷的含量測定方法簡單，條件易控制，有助于對醫(yī)院制劑進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控。

在色譜條件選擇中，對不同流動相[2－6]和2005年版《中國藥典(一部)》收載黃芩項(xiàng)下黃芩苷含量測定流動相及不同柱溫條件進(jìn)行了篩選，以流動相為甲醇－0.4%磷酸溶液(47∶53)，其黃芩苷峰型較好，與雜峰的分離度都較為理想，且此條件下雜質(zhì)干擾較少;柱溫的變化對其影響不大，故柱溫選擇常溫。

健心安神合劑主要成分柴胡、百合、白芍、五味子、川芎采用薄層色譜法進(jìn)行定性鑒別，色譜斑點(diǎn)明顯，專屬性強(qiáng)，可用于該制劑的定性鑒別。除以上5味藥外，筆者也試圖對其他藥味進(jìn)行過薄層色譜鑒別，但因方法專屬性較差，背景多有干擾，故未列入本文。通過方法學(xué)考察，建立了健心安神合劑中黃芩苷的含量測定方法。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:附錄ⅥB.

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