王其華，唐愛國，濮存海

南京中山制藥有限公司，南京 210046

三七來源于五加科植物Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen的根和根基。主產(chǎn)于我國云南、廣西等省區(qū)，是治療心腦血管疾病的名貴中藥，有散淤止血、消腫定痛的功效[1]。其主要有效成分三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和Rb1[1]。其用藥部位為干燥根及根莖，習慣上將剪下的較粗支根稱“筋條”；細小支根及須根稱“絨根”；蘆頭稱“剪口”，俗稱“羊腸頭”。主根依據(jù)大小，分為 20、40、60 頭，80 頭、無數(shù)頭（500 克中的個數(shù)即是頭數(shù)）等。研究表明[2]，過去作為末等品的蘆頭，其有效成分三七皂苷含量可能高于其它藥用部分。因此，本文采用HPLC法測定3種皂苷，系統(tǒng)比較三七主根不同規(guī)格及不同藥用部位含量，為三七資源的綜合利用提供參考。2010版《中國藥典》提取三七3種皂苷的方法為甲醇浸泡過夜，置80℃水浴上加熱回流2 h。一方面浸泡過夜導致測定時間較長，另一方面直接甲醇提取所得供試品雜質(zhì)較多，使得色譜柱使用壽命極短，增加了企業(yè)分析成本。因此本文同時對提取3種皂苷的方法進行改進。

1 儀器與試藥

Agilent1260高效液相色譜儀（色譜柱:安捷倫ZORBAX SB-C18150 mm×4.6 mm，5 μm）；ML104/PL602-L電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）。

人參皂苷Rg1（批號110703-200726）、人參皂苷Rb1（批號110704-200921，供含量測定用，純度92.6%）、三七皂苷 R1（批號 110745-200617）均中國藥品生物制品檢定所提供；三七藥材:40頭、60頭、80頭、120頭、200頭、無數(shù)頭三七以及三七剪口和病三七（患有根腐病，俗稱“綠臭”）均購自云南省文山。乙腈（色譜純）；水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水為流動相梯度洗脫（0～12 min乙腈占19%，12～60 min乙腈占19%～36%）；檢測波長為203 nm。理論板數(shù)按三七皂苷R1峰計算不低于4000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rb1對照品及三七皂苷R1對照品適量，加甲醇制成每毫升含人參皂苷Rg10.4 mg、人參皂苷Rb10.4 mg、三七皂苷R10.1 mg的混合溶液，即得。

2.3 供試品溶液制備方法考察

取同批藥材，制成粉末，根據(jù)三七皂苷的理化性質(zhì)及參考文獻[3-4]，比較藥典方法（序號1）、本文改進方法（序號2）及文獻報道方法（序號3）等三種方法對3種皂苷的提取效果，見表1?？芍椒?雜質(zhì)峰少，雜質(zhì)峰與目標峰能有效分離。方法1即藥典方法色譜圖見圖1A，方法2色譜圖見圖1B。

表1 供試品溶液制備方法考察

圖1 三七供試品色譜圖（A）方法1；（B）方法2

2.4 線性關系考察

精密稱取對照品人參皂苷Rg111.06 mg、人參皂苷Rb113.12 mg和三七皂苷R110.16 mg，分別置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻得對照品儲備液。依次精密吸取上述對照品儲備液一定量，用甲醇稀釋成質(zhì)量濃度為:人參皂苷Rg122.12、66.36、110.60、154.84、199.08 μg·mL-1； 人參皂苷 Rb126.24、65.60、104.96、144.32、183.68 μg·mL-1； 三七皂苷 R110.16、20.32、30.48、40.64、50.80 μg·mL-1的標準系列溶液。

按“2.1”項下色譜條件測定，混合對照品溶液進樣10 μL，測得峰面積值為縱坐標（Y），對照品的量為橫坐標（X），作回歸方程。結(jié)果:人參皂苷Rg1回歸方程為Y=5.8647X+2.3827，r2=1.0000，進樣量在22.12 μg～199.08 μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關系；人參 皂 苷 Rb1回 歸 方 程 為 Y=4.199X-6.906，r2=0.9994，進樣量在 26.24 μg～183.68 μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關系；三七皂R1回歸方程為Y=5.6043X+3.0025，r2=0.9992，進樣量在 10.16 μg～50.80 μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

2.5 進樣精密度試驗

精密吸取混合對照品溶液（人參皂苷Rg1110.60 μg·mL-1、人參皂苷 Rb1104.96μg·mL-1、三七皂苷 R130.48 μg·mL-1）10 μL，連續(xù)進樣 6 次，RSD 分別為0.51%、0.51%和0.58%。結(jié)果表明，進樣精密度良好。

2.6 重復性試驗

取同一批號藥材，按“供試品溶液的制備”項依法制備6份，每份連續(xù)進樣2次，每次10 μL。其RSD值分別為Rg11.71%、Rb111.99%、R12.64%，表明該方法有良好的重復性。

2.7 供試液穩(wěn)定性

取供試品溶液，間隔一定時間（0、4、10、15、24 h）重復進樣，每次進樣 10 μL，共計進樣 5次，測定其穩(wěn)定性。其RSD值分別為Rg12.28%、Rb11.84%、R12.15%，表明樣品溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 準確度試驗

采用加樣回收率方法，取已知含量的樣品約0.5 g，精密稱定，添加樣品含量的80%、100%、120%的對照品，按照“供試品溶液的制備”項下方法依法制備樣品溶液，按上述色譜條件測定?；厥章史謩e為Rg199.5%、Rb199.0%、R199.9%，RSD 值分別為 Rg12.44%、Rb12.45%、R12.14%，表明本法準確度良好。

2.9 不同藥用部位和不同規(guī)格三七含量測定

取同批藥材的不同藥用部位和不同規(guī)格三七藥材，按“供試品溶液制備方法”平行制備2份，每份進2針。進樣10 μL測定，測定平均值。結(jié)果見表2。不同規(guī)格三七含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R13種皂苷的總量順序為40頭＞80頭＞200頭＞120頭＞無數(shù)頭。不同藥用部位含3種皂苷總量的順序為剪口＞病三七（綠臭）＞筋條＞絨根。

3 討 論

3.1 供試品溶液制備方法的選擇

在對藥材檢驗過程中發(fā)現(xiàn)，按2010版《中國藥典》方法制備的供試品溶液對色譜柱要求較高且色譜柱使用壽命極短，因此本文考慮對藥典方法進行改進。通過比較藥典方法、文獻方法和改進方法，3種皂苷提取率相當，而三七3種皂苷的提取方法，本文方法所得供試品溶液顏色明顯變淺，雜質(zhì)峰減少，可延長色譜柱使用壽命，降低分析成本。

表3 不同規(guī)格及不同藥用部位三七三種皂苷含量測定結(jié)果（n=9）

3.2 不同藥用部位及不同規(guī)格三七藥材的收集

收集的所有三七藥材均來自云南省文山。剪口、筋條、絨根是從40頭三七的主根上所剪下；病三七是在40頭三七的同一生長年限的同一片種植地里挑選出來的患有根腐病的根及根莖。保證了比較的科學性。

3.3 不同藥用部位及不同規(guī)格三七藥材中3種皂苷含量比較

3種皂苷的含量均是以干燥品計算而得，且均符合藥典規(guī)定含量限度。含量測定結(jié)果可以看出，過去作為末等品的三七剪口3種皂苷總量最高，三七主根隨著個頭的增大3種皂苷的總量有逐漸升高趨勢，而不同藥用部位三七與三七主根不同頭數(shù)間皂苷含量無明顯相關。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部 [S].中國醫(yī)藥科技出版社，2010:11.

[2]高愛紅.三七的質(zhì)量評價與鑒別 [J].河北中醫(yī)雜志，2004，26（9）:720.

[3]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會編.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑·第10冊[S].1995.

[4]高 瑛，翟永松，杜守穎，等.RP-HPLC法測定三七藥材中總皂苷含量[J]. 中國藥品標準，2011，12（5）:346.