張瑞姿

（山西省林木育種研究中心，山西 太原 030031）

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是指由人工合成的、能夠調(diào)控植物生長(zhǎng)發(fā)育的化學(xué)物質(zhì)。在觀賞植物的組織培養(yǎng)中，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是培養(yǎng)基的關(guān)鍵物質(zhì)，雖用量極小，但在植物組織培養(yǎng)中起著重要和明顯的調(diào)節(jié)作用。在植物組培的過(guò)程中如果搭配的比例合適，組培才能成功。在植物組培中常用的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑有6芐氨基嘌呤（6-BA），萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA），吲哚丁酸（IBA），2,4-D,赤霉素（GA3）等。

1 誘導(dǎo)愈傷組織的形成

在觀賞植物的組織培養(yǎng)中，為避免發(fā)生變異，一般希望盡量少產(chǎn)生愈傷組織，盡快形成不定芽，所以生長(zhǎng)素的用量應(yīng)盡量控制。生長(zhǎng)素一般要與適量的細(xì)胞分裂素配合才能達(dá)到誘導(dǎo)愈傷組織的目的，但在通常情況下，含量過(guò)高，則培養(yǎng)物會(huì)表現(xiàn)旺盛的愈傷組織生長(zhǎng)，細(xì)胞團(tuán)比較松散，甚至出現(xiàn)水漬狀和玻璃化，很難再分化出幼苗。相反，生長(zhǎng)素濃度過(guò)低，則表現(xiàn)為愈傷組織生長(zhǎng)緩慢，顏色暗淡，隨培養(yǎng)時(shí)間的增加還會(huì)出現(xiàn)褐化和死亡。

1.1 長(zhǎng)壽花葉片再生體系研究

研究發(fā)現(xiàn)，生長(zhǎng)素適中時(shí)，培養(yǎng)溫度25℃，培養(yǎng)時(shí)間40d時(shí)，材料明顯增粗或加厚，切口處有愈傷組織生長(zhǎng)，進(jìn)而分化不定芽，分化率達(dá)到70%。過(guò)于緊實(shí)和松散的愈傷組織均不利于分化和成苗。實(shí)驗(yàn)證明，在長(zhǎng)壽花葉片再生體系的研究中，細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的搭配為BA1.0mg/l+NAA0.5mg/l時(shí)，誘導(dǎo)葉片形成愈傷組織效果最好。

1.2 菊花葉片組織培養(yǎng)

先暗培養(yǎng)15d，再移至光強(qiáng)2000勒克斯下，設(shè)置3組對(duì)照，研究生長(zhǎng)素種類(lèi)和濃度對(duì)誘導(dǎo)愈傷組織影響。第一組：MS基本培養(yǎng)基；第二組：MS+2,4-D（1-4）mg/l；第三組：MS+NAA（0.5-2.0）mg/l。通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不添加任何生長(zhǎng)素的MS空白培養(yǎng)基培養(yǎng)的時(shí)間較長(zhǎng)，誘導(dǎo)效果也最差，幾乎為零；單使用2,4-D在1-4mg/l時(shí)均可誘導(dǎo)愈傷組織，且濃度加大，誘導(dǎo)率升高；NAA在（0.5-2.0）mg/l時(shí)可誘導(dǎo)愈傷組織，0.5mg/l時(shí)為最好效果。通過(guò)實(shí)驗(yàn)得出，生長(zhǎng)素是誘導(dǎo)愈傷組織形成的生長(zhǎng)物質(zhì)，2,4-D和NAA用量是決定愈傷組織誘導(dǎo)率的關(guān)鍵因素。

1.3 秋海棠葉片組培實(shí)驗(yàn)

設(shè)定6-BA的濃度一定時(shí)，改變NAA的用量，對(duì)比實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，相同的培養(yǎng)時(shí)間40d內(nèi)，低濃度NAA在0.5mg/l時(shí)，生成極少數(shù)愈傷組織，且愈傷組織生長(zhǎng)緩慢，繼而隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加而出現(xiàn)死亡；高濃度NAA4mg/l時(shí)，愈傷組織生長(zhǎng)旺盛，比較松散，不分化不定芽，隨著時(shí)間的增加而出現(xiàn)玻璃化；只有NAA在（1-2）mg/l時(shí)，才可以從葉片形成結(jié)構(gòu)密實(shí)的愈傷組織，進(jìn)而分化不定芽，60d可獲得秋海棠的組培植株，其增殖率高達(dá)60%。

2 胚狀體的產(chǎn)生

胚狀體亦稱(chēng)體細(xì)胞胚，指在組織培養(yǎng)過(guò)程中，由植物體細(xì)胞所形成的類(lèi)似于合子胚的結(jié)構(gòu)。它具有根、莖結(jié)構(gòu)，能夠一次性形成再生植株。在組織培養(yǎng)過(guò)程中，通過(guò)胚狀體獲得的幼苗已經(jīng)在很多花卉種類(lèi)上廣泛應(yīng)用。在胚狀體發(fā)生過(guò)程中，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)它們的形成是十分重要的，赤霉素、細(xì)胞分裂素等物質(zhì)會(huì)抑制胚狀體的發(fā)生，2,4-D等生長(zhǎng)素對(duì)胚狀體的發(fā)生有很重要的作用。在長(zhǎng)壽花胚狀體的誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中，不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的配比試驗(yàn)結(jié)果顯示，胚性愈傷組織誘導(dǎo)產(chǎn)生胚狀體速度最快，誘導(dǎo)率最高的培養(yǎng)基是MS+BA2.0mg/l+2,4-D（1-4）mg/l時(shí)，當(dāng)用培養(yǎng)基MS+BA2.0mg/l+NAA（0.1-0.3）mg/l時(shí)，僅有少量的胚狀體產(chǎn)生，或者無(wú)胚狀體產(chǎn)生。

3 誘導(dǎo)腋芽和不定芽

從細(xì)胞學(xué)上來(lái)說(shuō)，腋芽的遺傳物質(zhì)十分穩(wěn)定，故用誘導(dǎo)腋芽的方法獲取組培苗，適合于花卉品種的快速繁殖。不定芽是指莖尖、腋芽以外的其他器官或組織上所形成的芽，細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的濃度搭配決定了誘導(dǎo)腋芽和不定芽質(zhì)量。以月季為例說(shuō)明。

3.1 細(xì)胞分裂素6-BA濃度對(duì)月季腋芽誘導(dǎo)的影響

在月季的組培中，用MS為基本培養(yǎng)基，6-BA加入量為（0.5-2.0）mg/l時(shí)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程發(fā)現(xiàn)，當(dāng)6-BA為0.5mg/l時(shí)，腋芽誘導(dǎo)率為21%；6-BA為1.0mg/l時(shí)，誘導(dǎo)率為86%；6-BA為1.5mg/l時(shí)，誘導(dǎo)率為95%；6-BA為2.0mg/l時(shí)，誘導(dǎo)率下降為86%。結(jié)果表明，6-BA用于月季的最佳腋芽誘導(dǎo)濃度為1.50%。

3.2 不同生長(zhǎng)素濃度對(duì)月季不定芽增殖的影響

在選擇生長(zhǎng)素時(shí)，IAA不穩(wěn)定易分解，最好不用。GA有促進(jìn)細(xì)胞伸長(zhǎng)作用，對(duì)一些長(zhǎng)勢(shì)弱的品種適量加入可以促進(jìn)植物的生長(zhǎng)。一般組培進(jìn)行增殖時(shí)，最常用的是NAA和IBA，所以就這兩種生長(zhǎng)素對(duì)月季不定芽增殖進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，兩者濃度都在（0.05-0.5）mg/l時(shí)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)濃度在0.05時(shí)，用NAA的增殖系數(shù)為2.1時(shí)，IBA增殖系數(shù)為2.5，效果不明顯；當(dāng)濃度在0.2時(shí)，用NAA的增殖系數(shù)變化不大，而用IBA達(dá)到增殖系數(shù)4.5；當(dāng)濃度提高到0.3時(shí)，加入IBA培養(yǎng)基增殖系數(shù)為6.5，且分化出的不定芽健壯，生長(zhǎng)速度快；而當(dāng)濃度達(dá)到0.5時(shí)，加入NAA的增殖不明顯，且出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象；而加入IBA的培養(yǎng)物，分化的不定芽矮小，且生長(zhǎng)緩慢。結(jié)果表明，最佳不定芽分化增殖的生長(zhǎng)素濃度為：IBA0.3mg/l。

4 試管苗的生根

在進(jìn)行組培生產(chǎn)中，經(jīng)常會(huì)碰到有的種類(lèi)長(zhǎng)時(shí)間不會(huì)生根或生根率很低，有時(shí)又是平時(shí)生根良好的品種突然長(zhǎng)根不良或長(zhǎng)根時(shí)間延長(zhǎng)，無(wú)論何種原因?qū)е碌纳缓茫@些苗木在出瓶后，在過(guò)渡培養(yǎng)中，都很難再長(zhǎng)出新的根系。多數(shù)情況下，這種苗移栽后，不能適應(yīng)外面的環(huán)境條件，很快死亡，導(dǎo)致組培失敗。長(zhǎng)期以來(lái)，我們對(duì)生根不良原因分析，除環(huán)境、品種間的差異外，激素種類(lèi)和濃度也是至關(guān)重要的一個(gè)因素。在生產(chǎn)上，從節(jié)減成本角度上講，NAA是最經(jīng)濟(jì)高效的生根激素，多數(shù)花卉要在0.1-1.0mg/l時(shí)培養(yǎng)15d左右就會(huì)生根。生根率不一定隨生長(zhǎng)素的濃度升高而提高，如菊花在NAA1.0mg/l以上時(shí)，生根少，且短粗，移栽過(guò)程中極易碰傷根系，死亡率很高；而在0.2mg/l左右時(shí)，根系分布均勻，根的數(shù)量及粗細(xì)適中，移栽成活率高。在月季組培中，當(dāng)NAA含量在（0.05-0.1）mg/l時(shí)，生根效果好，移栽成活率高。對(duì)于一些單獨(dú)使用NAA不能生根或生根不好的品種，要考慮與IAA、IBA混用。例如，在秋海棠的生根實(shí)驗(yàn)中，NAA含量在0.5mg/l時(shí)，再添加適量IBA，才能達(dá)到生根的效果。實(shí)踐證明，若用IAA誘導(dǎo)生根，濃度只能在1.0以下，否則對(duì)生根的促進(jìn)作用不明顯，反而會(huì)急劇降低移栽成活率。

5 結(jié)語(yǔ)

在植物組織培養(yǎng)中，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑用量小，但生理效應(yīng)大，對(duì)植物組培成功與否起決定性作用，基本培養(yǎng)基保證培養(yǎng)物的生存與最低的生理活動(dòng)，但只有配合恰當(dāng)?shù)募に?，才能誘導(dǎo)細(xì)胞分裂的啟動(dòng)、愈傷組織的形成和增殖以及芽與根分化等變化。培養(yǎng)物對(duì)激素的需求取決于它本身的激素水平對(duì)激素的敏感性，也因植物種類(lèi)不同而各異。只有經(jīng)過(guò)無(wú)數(shù)次探索研究，才能總結(jié)出不同植物的各種規(guī)律，正確合理地應(yīng)用于組織培養(yǎng)中，為植物組培快繁做出貢獻(xiàn)。

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［2］王國(guó)良.現(xiàn)代月季無(wú)性繁殖的原理與技術(shù)綜述［J］.江蘇林業(yè)科技，1997,24（3）：52.

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［4］曹孜義，劉國(guó)良.實(shí)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)教程［M］.蘭州：甘肅科學(xué)技術(shù)出版社，2002,6:169-227.