高青環(huán)，張志巖，岳艷榮，張強(qiáng)華

(河南省化工研究所有限責(zé)任公司，河南鄭州 450052)

毒死蜱(chlorpyrifos)，又名氯吡硫磷，屬硫代磷酸酯類殺蟲劑，具有胃毒、觸殺、熏蒸三重作用，在土壤中的殘留期較長，對地下害蟲防效好。烯唑醇(diniconazole)名稱速保利，屬三唑類殺菌劑，對于囊菌、擔(dān)子菌引起的多種植物病害如白粉病、銹病、黑粉病、黑星病等有特效。9%毒死蜱·烯唑醇懸浮種衣劑由毒死蜱和烯唑醇混配而成，用于防治玉米地下害蟲和絲黑穗病效果明顯。目前9%毒死蜱·烯唑醇懸浮種衣劑國內(nèi)還未見高效液相色譜的分析方法。本文使用高效液相色譜法，使用反相C18柱對試樣中的毒死蜱和烯唑醇進(jìn)行定量分析，該方法操作簡便、分析速度快，精密度和準(zhǔn)確度均符合分析要求，可以滿足常規(guī)分析和生產(chǎn)中的質(zhì)量控制。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑和溶液

乙腈:色譜純;水:二次蒸餾水;乙酸:分析純;毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)品:質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.5%(上海市農(nóng)藥研究所提供);烯唑醇標(biāo)準(zhǔn)品:質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.5%(上海市農(nóng)藥研究所提供);9%毒死蜱·烯唑醇懸浮種衣劑(河南省農(nóng)科院植保所農(nóng)藥實(shí)驗(yàn)廠提供)。

1.2 儀器

儀器:Agilent1200高效液相色譜儀;紫外檢測器;Agilent Chemstation色譜工作站;色譜柱:ZORBAX SB －C18(5μm，150 mm ×4.5 mm);超聲波清洗器;過濾器:過濾膜孔徑0.45 μm。

1.3 色譜操作條件

流動相:乙腈—水—乙酸(82∶18∶0.5體積比);柱溫:室溫;檢測波長:230nm;流動相流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣體積:5.0 μL;保留時間:烯唑醇約3.03 min，毒死蜱約 5.17 min。見圖 1、2。

圖1 毒死蜱和烯唑醇標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖

圖2 9%毒死蜱·烯唑醇FS液相色譜圖

1.4 測定步驟

1.4.1 標(biāo)樣溶液的配制

分別稱取毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)品0.10 g(精確至0.0002 g)，烯唑醇標(biāo)準(zhǔn)品0.05 g(精確至0.0002 g)置于同一50 mL容量瓶中，加入20 mL流動相置于超聲波清洗器中超聲溶解，冷卻至室溫后用流動相稀釋至刻度，搖勻，靜置，備用。

1.4.2 試樣溶液的配制

稱取1.5 g樣品(精確至0.0002 g)于50 mL 容量瓶中，加入20 mL流動相置于超聲波清洗器中超聲溶解，冷卻至室溫后用流動相稀釋至刻度，搖勻，靜置，過濾，備用。

1.4.3 測定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，計(jì)算各相對響應(yīng)值，待相鄰兩針的相對響應(yīng)值變化小于1.5%時，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)樣測定。

1.5 計(jì)算

將測得的兩針試樣溶液及試樣前后兩針標(biāo)樣溶液的峰面積分別進(jìn)行平均，按下式計(jì)算毒死蜱和烯唑醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(X)。

式中:A1為標(biāo)樣溶液中毒死蜱(或烯唑醇)峰面積平均值;A2為試樣溶液中毒死蜱(或烯唑醇)峰面積平均值;m1為毒死蜱(或烯唑醇)標(biāo)樣的質(zhì)量，g;m2為試樣的質(zhì)量，g;P為標(biāo)樣中毒死蜱(或烯唑醇)質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果分析

2.1 流動相的選擇

為了實(shí)現(xiàn)毒死蜱和烯唑醇的有效分離，先后試驗(yàn)了甲醇—水、乙腈—水、乙腈—水(以乙酸調(diào)pH值為4)、乙腈—水—乙酸等多種流動相配比進(jìn)行反復(fù)試驗(yàn)，最后確定乙腈—水—乙酸(體積比82∶18∶0.5)為試驗(yàn)的流動相。毒死蜱和烯唑醇分離效果好，峰形對稱，保留時間適中，可以滿足分析要求。

2.2 檢測波長的選擇

通過Agilent 1200高效液相色譜儀的紫外光譜采集功能，經(jīng)紫外光譜掃描烯唑醇在220～270 nm之間有很好的吸收，毒死蜱在230、290 nm均有很好的吸收，為了保證毒死蜱和烯唑醇都有較好的吸收，采用230 nm為檢測波長。結(jié)果見圖3、4。

圖3 烯唑醇紫外吸收圖

圖4 毒死蜱紫外吸收圖

2.3 方法線性關(guān)系的測定

分別稱取毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)品0.10 g(精確至0.0002 g)，烯唑醇標(biāo)準(zhǔn)品0.05 g(精確至0.0002 g)置于同一25 mL容量瓶中，用流動相溶解并定容后，用移液管分別準(zhǔn)確移取 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 于 25 mL容量瓶中，用流動相溶解并定容，按上述操作條件進(jìn)行測定，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖5、6)，得線性回歸方程為:烯唑醇 y=845.42x+7.3762，相關(guān)系數(shù)為 0.9997;毒死蜱 y=614.23x+4.4143，相關(guān)系數(shù)為 0.9989。

圖5 烯唑醇標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4 方法精密度測定

按上述操作條件對同一樣品平行測定5次，結(jié)果見表1，毒死蜱和烯唑醇的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.035和0.030，變異系數(shù)分別為0.83%和0.98%。

圖6 毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1 精密度測定結(jié)果

2.5 方法準(zhǔn)確度測定

在已知含量的樣品中加入一定數(shù)量的標(biāo)準(zhǔn)品，在上述操作條件下進(jìn)行測定，結(jié)果見表2，測得毒死蜱的回收率為98.00% ～100.5%，平均回收率為99.29%;烯唑醇的回收率為 98.04% ～101.00%，平均回收率為99.56%。

表2 回收率的試驗(yàn)測定結(jié)果

3 結(jié)論

通過實(shí)驗(yàn)表明，本方法可以同時測定9%毒死蜱·烯唑醇懸浮種衣劑中的兩種有效成分，方法操作簡單、快速、分離效果好，精密度和準(zhǔn)確度高，符合定量分析要求，可以滿足生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)中的質(zhì)量控制分析。

［1］王漢芳，季書勤，李向東.9%毒死蜱·烯唑醇懸浮種衣劑防治玉米地下害蟲、絲黑穗病的田間藥效試驗(yàn)［J］.農(nóng)藥，2009，(10):762－764.