胡香蘭，嚴(yán)世龍，郭友春，和學(xué)武

(1.永勝縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南 永勝 674200;2.永勝縣光華鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，云南 永勝 674211;3.永勝縣順州鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，云南 永勝 674210)

云南省永勝縣是血吸蟲病重度流行縣，長期以來在動(dòng)物血吸蟲病防治領(lǐng)域一直采用糞便頂管毛蚴孵化法作為診斷動(dòng)物感染血吸蟲病的唯一方法。該方法具有檢出率高、診斷準(zhǔn)確、設(shè)備簡單、技術(shù)要領(lǐng)易掌握的特點(diǎn)，長期在基層動(dòng)物血吸蟲病防治工作中推廣運(yùn)用。但由于該方法自身的局限性，受季節(jié)、氣候、水質(zhì)等因素的影響較大，尤其是干旱缺水年，無法保證動(dòng)物血防工作的正常開展。為探索新的快速診斷方法，2011年永勝縣采用浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所提供的斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)，在縣內(nèi)6個(gè)血吸蟲病疫區(qū)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))54個(gè)村委會(huì)中進(jìn)行試驗(yàn)推廣，取得了較好的效果?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

血吸蟲病抗原膠體金，試劑由浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院、浙江省畜牧獸醫(yī)局提供，玻璃毛細(xì)管由四川成都華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠提供，每筒500支。待檢血清、血紙、牛糞便均采自血吸蟲病疫區(qū)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))。

1.2 操作

①待檢血清的稀釋:80倍稀釋待檢血清，即吸取待檢血清0.01mL，加生理鹽水0.79mL，搖勻。②待檢血紙的浸泡:用賬頁打孔器(直徑 0.55 cm)裁取待檢血紙 1片(0.24 cm2)，加生理鹽水0.5mL浸泡30min，搖勻成待檢血紙浸出液。③用玻璃毛細(xì)管吸取80倍稀釋的血清或血紙浸出液點(diǎn)樣于反應(yīng)板孔的NC上，每個(gè)孔點(diǎn)2個(gè)樣品。④點(diǎn)樣3～4mim后，滴甲液封閉，1滴/孔。⑤待甲液滲入NC后，滴乙液反應(yīng)顯色，1滴/孔。⑥待乙液滲入NC后，用蒸餾水或自來水洗滌，1滴/孔，判定結(jié)果。⑦判定:紅色斑點(diǎn)判定為血吸蟲病陽性，黃色或淺粉紅色斑點(diǎn)判為陰性。

1.3 符合率試驗(yàn)

首先在動(dòng)物血吸蟲病感染率相對較高的部分鄉(xiāng)(鎮(zhèn))采集牛血清、血紙，用斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)檢測，檢出的陽性牛用糞便頂管毛蚴孵化法進(jìn)行病原檢查［1］，按標(biāo)準(zhǔn)采樣，實(shí)行一糞三檢，在規(guī)定的時(shí)間段觀察記錄，結(jié)果進(jìn)行對比。

1.4 特異性試驗(yàn)

在疫區(qū)采集糞檢肝片吸蟲感染陽性而血吸蟲病感染陰性的牛血清35份，血吸蟲病陽性感染牛血清30份，用斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)進(jìn)行特異性試驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 符合率試驗(yàn)

在永勝縣6個(gè)血吸蟲病疫區(qū)的54個(gè)村委會(huì)采集2 800份牛血紙和755份牛血清，用斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)檢測，血紙檢出陽性牛78頭，血清檢出陽性72頭;再對這2 800頭牛采用糞便毛蚴孵化檢查法進(jìn)行檢測，檢出陽性74頭。斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)與病原學(xué)檢查陽性符合率血紙為94.8%，血清為97.3%。

2.2 特異性試驗(yàn)

肝片吸蟲陽性牛血清35份，血吸蟲病感染陽性牛30份，用斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)進(jìn)行檢測，未發(fā)現(xiàn)與肝片吸蟲之間出現(xiàn)交叉反應(yīng)現(xiàn)象，與陽愛國等所做結(jié)果相一致，說明具有較強(qiáng)的特異性。

2.3 陰性符合率比較

參照陽愛國等的做法，在永勝縣血吸蟲病非疫區(qū)4個(gè)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))采集牛血紙600份，用斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)進(jìn)行檢測，未檢出陽性牛。同樣對這600頭牛用糞便頂管毛蚴孵化法檢測也未檢出陽性畜，陰性符合率達(dá)100%。

2.4 血清與血紙比較

在永勝縣6個(gè)血吸蟲病疫區(qū)54個(gè)村委會(huì)采取2 800份牛血紙、755份牛血清進(jìn)行檢測，血紙檢測出陽性牛78頭，血清檢出陽性72頭，說明不論是用血紙還是血清檢測均可達(dá)到相同效果。

2.5 推廣應(yīng)用

在開展了符合率、特異性等試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，在血吸蟲病輕度感染區(qū)采集牛耳靜脈血紙18 480份，用金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)與糞便檢測同步進(jìn)行檢查，開展疫情監(jiān)測，結(jié)果兩種方法均未查出陽性。金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)的應(yīng)用在永勝縣取得了較好的效果。

3 討論與小結(jié)

(1)從永勝縣試驗(yàn)的結(jié)果來看，在血吸蟲病疫區(qū)不論采集血紙和血清作病原材料，用斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)進(jìn)行檢測，其陽性符合率分別達(dá)94.8%和97.3%，符合率較高。所以在實(shí)際應(yīng)用過程中兩者均可使用。

(2)斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)檢測血吸蟲具有特異性強(qiáng)，檢出符合率高，操作簡單、方便、快速，且不受環(huán)境氣候影響［2］，不受檢查時(shí)間限制，能夠同時(shí)結(jié)合其它動(dòng)物防疫、診療活動(dòng)同步開展工作的優(yōu)點(diǎn)，特別適合在目前血吸蟲病感染強(qiáng)度低，糞便檢查容易引起漏判的情況下在基層推廣應(yīng)用。

(3)斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾技術(shù)使永勝縣家畜血吸蟲病防治技術(shù)從單一的頂管毛蚴孵化檢查法向多種檢查方法縱深發(fā)展，同時(shí)也全面提升了永勝縣家畜血吸蟲病診斷技術(shù)，開創(chuàng)了山區(qū)動(dòng)物血防工作的新局面。斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)是將斑點(diǎn)酶標(biāo)與免疫膠體金結(jié)合起來的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)［2］，該方法在加樣過程中如果不按規(guī)程操作，會(huì)導(dǎo)致檢測結(jié)果判斷出現(xiàn)偏差，用血清來檢測容易出現(xiàn)漏檢，而用血紙檢測容易出現(xiàn)誤判。建議:在大規(guī)模推廣使用前首先進(jìn)行小范圍試驗(yàn)，在熟練掌握技術(shù)操作規(guī)程后再進(jìn)行大面積推廣。

［1］ 農(nóng)業(yè)部血吸蟲病防治辦公室.動(dòng)物血吸蟲病防治手冊［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)科技出版社，1998:184－192.

［2］ 陽愛國，毛光瓊，謝智明，等.斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾新技術(shù)檢測家畜血吸蟲病的效果試驗(yàn)〔J〕.中國獸醫(yī)雜志，2008，44(4):3 －4.