劉煜

乙型肝炎是我國感染率和發(fā)病率最高的傳染病之一，目前乙型肝炎的診斷及療效判斷常用指標(biāo)有乙肝病毒熒光定量PCR、血清免疫學(xué)標(biāo)志物。血清標(biāo)志物(乙肝兩對半)組合模式多樣且復(fù)雜這導(dǎo)致臨床上部分患者的HBV感染復(fù)制狀況難以判斷，甚至漏檢，外周血中HBV-DNA是病毒復(fù)制活躍最直接和可靠的標(biāo)志。我們對乙肝血清標(biāo)志物與HBV-DNA定量檢測結(jié)果相關(guān)性進(jìn)行分析，現(xiàn)匯報如下。

1 材料及方法

1.1 一般資料 選取2009年1月至2011年1月門診診治的乙型肝炎患者167例，所有病例均符合1995年北京第五次全國傳染病寄生蟲病學(xué)術(shù)會議病毒性肝炎防治方案，乙型肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn);其中男97例，女70例;年齡21～78歲，病程6個月至5年。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本 本組病例抽取空腹靜脈血2管，每管3 ml，分別進(jìn)行乙肝血清標(biāo)志物和HBV-DNA定量檢測。

1.2.2 儀器及試劑 乙肝五項定性試劑為上海科華實(shí)業(yè)有限公司，酶標(biāo)儀AUTHOS LUCY-2，乙肝DNA擴(kuò)增儀是上海宏石全自動SLAN全自動熒光定量PCR檢測系統(tǒng)，試劑是上海之江有限公司。

1.2.3 檢測方法 乙肝血清標(biāo)志物:采取ELISA法檢測中其操作及結(jié)果判斷均嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

HBV DNA定量檢測采用熒光定量PCR，樣品經(jīng)常規(guī)裂解法從血清中提取HBV DNA，加入到已配制好的PCR反應(yīng)管中(試劑盒中已備有)，同時設(shè)置陰性對照和陽性定量梯度對照，放入PCR儀中，按使用說明的PCR程序(93℃2 min預(yù)變性，93℃45 s，55℃120 s)進(jìn)行40個循環(huán)，反應(yīng)結(jié)束后，通過電腦分析直接定出定量結(jié)果。所有檢測均由同批檢測人員進(jìn)行操作及分析。HBV-DNA正常參考值為 ＜103copy/ml，≥103IU/mL判為陽性，＜103IU/mL判為陰性[1]。

2 結(jié)果

2.1 乙肝血清標(biāo)志物 對本組167例乙型肝炎患者乙肝血清標(biāo)志物檢測，分出A組51例、B組60例、C組9例、D組5例、E組11例、F組31例，各組具體標(biāo)志物顯示見表1。

表1 各組乙肝血清標(biāo)志物顯示

2.2 乙肝血清標(biāo)志物與HBV-DNA定量檢測結(jié)果 觀察各組病例HBV-DNA定量檢測結(jié)果并觀察乙肝血清標(biāo)志物與HBV-DNA定量陽性率，具體見表2。

表2

3 討論

乙肝血清標(biāo)志物是免疫學(xué)標(biāo)志物是診斷乙型肝炎最傳統(tǒng)的指標(biāo)，ELISA方法是臨床診斷HBV感染的傳統(tǒng)手段，它操作簡便，省時，但敏感性和特異性一般。且實(shí)際檢測的是人體對HBV的免疫反應(yīng)狀態(tài)，不能直接反映HBV復(fù)制的真實(shí)狀況，存在一定的局限性。

隨著分子生物技術(shù)的發(fā)展，病毒感染的臨床診斷技術(shù)已從定性檢測發(fā)展到定量檢測。從核酸分子雜交技術(shù)到定量PCR技術(shù)檢測HBV dNA，其靈敏度和特異性不斷提高，且在研究病毒感染量與臨床病情的關(guān)系、評價和監(jiān)測抗病毒藥物療效等方面具有重要指導(dǎo)作用。HBV DNA是直接反映H BV存在、病毒活動性復(fù)制、傳染性大小的直接指標(biāo)，是判斷患者病情變化及病毒突變株的主要指標(biāo)。

HBV感染者的血液中存在3種HBV顆粒[2]，即小球形顆粒、管形顆粒和Dane顆粒。ELISA檢測的是前兩種顆粒包膜表面的一種小蛋白，與病毒復(fù)制能力、傳染性無關(guān);PCR檢測的才是核衣殼內(nèi)具有復(fù)制能力的核酸DNA成分，HBVDNA定量檢測和ELISA檢測無論是檢測方法和檢測物質(zhì)都不同，它們是以不同的角度去評價乙肝病毒感染者的感染狀況。

HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc(+)時，結(jié)合 PCR 檢測的陽性結(jié)果表明，乙肝病毒在體內(nèi)復(fù)制活躍，疾病處于活動期，具有較強(qiáng)的傳染性;HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc(+)其HBV-DNA陽性的拷貝數(shù)對數(shù)均值低于大三陽對數(shù)均值，可能是患者中部分出現(xiàn)HBV前C區(qū)基因發(fā)生突變而使HBeAg不能表達(dá)，但不影響病毒復(fù)制和傳播則病情處于活動期，仍具有傳染性。

HBeAg陽性與HBV-DNA有良好的一致性，HBeAg可作為HBV復(fù)制及具有強(qiáng)傳染性的一個指標(biāo)[3]?？?HBe的存在并不表示患者體內(nèi)沒有病毒復(fù)制，與既往文獻(xiàn)報道結(jié)果吻合。此種情況可能是前C區(qū)變異，前C區(qū)產(chǎn)物的氨基端是非結(jié)構(gòu)的信號肽，使后繼的結(jié)構(gòu)部份轉(zhuǎn)移至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，形成HBeAg的前體蛋白(P25)，解脫信號肽和羧基端的一些殘基后，形成分子量不等的HBeAg，而前C區(qū)變異則信號肽的解脫后只留10個殘基的短肽，不產(chǎn)生HBeAg，由于HBeAg與HBcAg有交叉免疫原性，因而HBeAg(-)，仍可引起宿主持續(xù)應(yīng)答，表現(xiàn)為抗-HBe(+)[4]。

通過本組病例觀察應(yīng)用實(shí)時熒光定量檢測HBV DNA，用于監(jiān)測HBV復(fù)制情況有較高的敏感性和特異性，與乙肝標(biāo)志物的檢測結(jié)果綜合比較，有助于判斷其傳染性和觀察臨床治療效果。乙肝標(biāo)志物陽性的患者有必要做HBV-DNA檢測，了解其復(fù)制及傳染性。HBV DNA檢測已經(jīng)成為乙型肝炎診斷和療效評價的理想指標(biāo)[5]。

[1]張卓然.臨床微生物學(xué)和微生物檢驗．第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2003:374．

[2]段穗萍.乙肝病毒HbeAg濃度含量與HBV-DNA水平的臨床關(guān)系．醫(yī)學(xué)檢驗與臨床，2006，17(1):41-42．

[3]秦雯，董慧珠.乙型肝炎兩對半和HBV DNA定量檢測的臨床應(yīng)用．檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2008，5(22):1353-1355．

[4]段正軍，徐杰，田鵬飛.時間分辨熒光免疫法測定乙型肝炎病毒標(biāo)志物．檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2007，4(11):1057-1058．

[5]王健，閔福援.乙肝病毒血清標(biāo)志物的檢測方法及其臨床意義．中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2005，28:113-115．