潘美紅陳振泰薛萍楊海峰

（連云港市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，江蘇連云港 222000）

洋蔥（Allium cepaL.）屬百合科蔥屬二年生植物，是世界上主要蔬菜種類(lèi)之一，也是我國(guó)主要的栽培和出口蔬菜。為了更好地利用、開(kāi)發(fā)洋蔥，不少研究人員在組織培養(yǎng)上做了大量工作（姜璐琰 等，2003），而洋蔥的鱗莖盤(pán)是組織培養(yǎng)中常用的材料，能誘導(dǎo)植株再生。但在培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，不同的洋蔥品種，使用同樣的培養(yǎng)基，其增殖效果不盡相同。已有的報(bào)道中洋蔥組培多數(shù)采用MS、B5、N6、BDS作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，花寶培養(yǎng)基在一些植物組織培養(yǎng)中用于不定芽誘導(dǎo)和生根培養(yǎng)（陳振東 等，2011；唐德華和崔寶祿，2012），但在洋蔥組培中的應(yīng)用效果研究很少；同時(shí)，生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的使用類(lèi)型和配比濃度也是植物組織培養(yǎng)效果好壞的關(guān)鍵（畢艷娟 等，1996），近年來(lái)，多效唑在植物組織培養(yǎng)中多有應(yīng)用，并取得了一定的效果（薛寒青和高霞，2007），但在洋蔥組織培養(yǎng)中的應(yīng)用鮮有報(bào)道。

本試驗(yàn)旨在對(duì)不同的洋蔥品種進(jìn)行鱗莖盤(pán)組織培養(yǎng)時(shí)，選擇合適的基礎(chǔ)培養(yǎng)基和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，為進(jìn)一步完善洋蔥組培技術(shù)提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

早熟洋蔥品種：早春黃，晚熟洋蔥品種：連蔥6號(hào)。

1.2 方法

材料取自連云港市農(nóng)業(yè)科學(xué)院種植的洋蔥試驗(yàn)田，于洋蔥采收期取樣。將取回的洋蔥置于4～5 ℃環(huán)境中冷藏28 d（陶貴榮，1999），將冷藏后的洋蔥剝除外皮至直徑為2～3 cm，用75%的酒精搖晃浸泡 30～60 s，再用0.1%的升汞溶液搖晃浸泡10～15 min，無(wú)菌水沖洗4次；在無(wú)菌條件下用消過(guò)毒的手術(shù)刀將洋蔥切除至鱗莖盤(pán)為 1～2 mm厚、貼近鱗莖盤(pán)的鱗莖長(zhǎng)、寬各為4～5 mm、高為0.5～1.0 mm作外植體，再用刀片在鱗莖上表面做“井”字形劃痕，然后將外植體接種到不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基及激素配比的培養(yǎng)基中（表 1）。經(jīng)過(guò)一個(gè)周期后將部分組培苗轉(zhuǎn)入加有0.25 mg·L-1多效唑的培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)。

培養(yǎng)基用150 mL三角瓶裝，每瓶接5個(gè)外植體，共10瓶。培養(yǎng)溫度為20～25 ℃，光照強(qiáng)度為2000 lx，光照時(shí)間16 h·d-1。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對(duì)洋蔥增殖的影響

用洋蔥鱗莖盤(pán)作外植體，本試驗(yàn)培養(yǎng)基不誘導(dǎo)愈傷組織，只誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽。由表2可以看出，早春黃和連蔥6號(hào)外植體在以MS、花寶為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，且KT濃度低于10 mg·L-1的條件下，一般無(wú)反應(yīng)，有個(gè)別外植體長(zhǎng)出獨(dú)苗或者長(zhǎng)出 2～3個(gè)不定芽。早春黃在以 MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，6-BA濃度低于10 mg·L-1的條件下，都能誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽，而在以花寶為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，6-BA濃度低于10 mg·L-1的條件下，一般長(zhǎng)出獨(dú)苗，少數(shù)能長(zhǎng)出不定芽；連蔥6號(hào)表現(xiàn)出與早春黃相反的結(jié)果：在以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，6-BA濃度低于10 mg·L-1的條件下一般長(zhǎng)出獨(dú)苗，只有少數(shù)長(zhǎng)出 2～4個(gè)不定芽，而在以花寶為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，6-BA濃度低于10 mg·L-1的條件下都能誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽。

表1 培養(yǎng)基成分及配比

表2 洋蔥鱗莖盤(pán)在不同培養(yǎng)基上的增殖效果

2.2 不同激素濃度對(duì)洋蔥增殖的影響

在不管是KT，還是6-BA濃度為10 mg·L-1的培養(yǎng)基上，外植體多數(shù)表現(xiàn)為水漬狀，最后死亡；早春黃在以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、連蔥6號(hào)在以花寶為基礎(chǔ)培養(yǎng)基的條件下，加入0.1 mg·L-1NAA，隨著6-BA濃度的增加，增殖效果增強(qiáng)，當(dāng)6-BA濃度為6 mg·L-1時(shí)增殖效果最好，當(dāng)6-BA濃度再繼續(xù)增加時(shí)，增殖效果又開(kāi)始減弱，且苗玻璃化（表2）。

2.3 添加多效唑?qū)ρ笫[增殖效果的影響

在繼代培養(yǎng)過(guò)程中，早春黃在以 MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、連蔥 6號(hào)在以花寶為基礎(chǔ)培養(yǎng)基的條件下，激素配比為6-BA 6 mg·L-1，NAA 0.1 mg·L-1，添加0.25 mg·L-1多效唑，不少洋蔥外植體長(zhǎng)出一叢不定芽，數(shù)量超過(guò)20個(gè)，但在2次繼代培養(yǎng)過(guò)程中，再使用添加0.25 mg·L-1多效唑的培養(yǎng)基，僅個(gè)別洋蔥外植體長(zhǎng)出一叢不定芽，且數(shù)量在10個(gè)左右，多數(shù)長(zhǎng)出3～6個(gè)不定芽，增殖數(shù)明顯減少；3次繼代過(guò)程中增殖數(shù)更少，60%以上只長(zhǎng)出獨(dú)苗。

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)中，洋蔥早春黃在以 MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，連蔥 6號(hào)在以花寶為基礎(chǔ)培養(yǎng)基的條件下增殖效果好，添加KT誘導(dǎo)外植體長(zhǎng)不定芽的效果差，而添加適當(dāng)濃度的6-BA增殖效果明顯，這可能是因?yàn)檠笫[的基因型不同，其對(duì)基礎(chǔ)培養(yǎng)基和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑類(lèi)型的要求也不同（姜璐琰 等，2003）。早春黃和連蔥6號(hào)在添加6 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1NAA的培養(yǎng)基中，增殖效果好；6-BA濃度過(guò)低，不定芽少；6-BA濃度過(guò)高，易引起組培苗死亡，可見(jiàn)合適的激素濃度配比對(duì)洋蔥增殖非常重要。

花寶作為一種花肥，其作用根據(jù)其中的N、P、K配比而不同，適用于一般植物生長(zhǎng)及根、莖強(qiáng)壯，使植物具有抗病、防病的作用。花寶用于一些植物組織培養(yǎng)中誘導(dǎo)不定芽和生根都有很好的效果，報(bào)道中花寶 1號(hào)用的較多（陳振東 等，2011；唐德華和崔寶祿，2012）。在本試驗(yàn)中，連蔥6號(hào)以花寶3號(hào)為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加適當(dāng)濃度的6-BA和NAA誘導(dǎo)不定芽效果明顯，可能是花寶3號(hào)的N、P、K配比抑或是花寶3號(hào)中的其他物質(zhì)適合連蔥6號(hào)誘導(dǎo)不定芽，這點(diǎn)仍需要進(jìn)一步試驗(yàn)。

多效唑又名PP333，屬于三唑類(lèi)化合物，作用機(jī)理是抑制植物體內(nèi)源赤霉素GA的生物合成及其他內(nèi)源激素的合成，從而導(dǎo)致植物營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)減慢，使光合產(chǎn)物更多地用于生殖生長(zhǎng)，具有延緩植物生長(zhǎng)，抑制莖枝伸長(zhǎng)，促進(jìn)花芽的形成及生長(zhǎng)的作用（龍旭，2002）。本試驗(yàn)繼代培養(yǎng)過(guò)程中，添加一定濃度的多效唑，可以提高洋蔥增殖率，但是連續(xù)繼代都使用多效唑，其增殖率不增反減，因此多效唑在洋蔥組織培養(yǎng)中的使用方式有待于進(jìn)一步研究。

畢艷娟，高書(shū)國(guó)，喬亞科，劉鐘河，宋利亭，胡敏芬．1996．植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)月季組培萌芽和成芽的影響．河北農(nóng)業(yè)技術(shù)師范學(xué)院學(xué)報(bào)，10（4）：37-40．

陳振東，蔡坤秀，林秀香，蘇金強(qiáng)，余智城．2011．葉底紅生根培養(yǎng)因子優(yōu)選試驗(yàn)．福建林業(yè)科技，38（1）：83-85．

姜璐琰，楊建平，張松，高鵬，王桂紅．2003．洋蔥組織培養(yǎng)研究進(jìn)展．山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，34（2）：299-302．

龍旭．2002．多效唑的作用機(jī)理及其在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的應(yīng)用．植物醫(yī)生，15（1）：34-35．

唐德華，崔寶祿．2012．蝴蝶蘭繁殖技術(shù)研究進(jìn)展對(duì)其規(guī)模化發(fā)展的影響．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，40（1）：99-101．

陶貴榮．1999．低溫作用影響鱗莖植物休眠的研究．西安教育學(xué)院學(xué)報(bào)，（3）：42-44．

薛寒青，高霞．2007．多效唑在切花百合組織培養(yǎng)中的作用．青海大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，25（2）：28-30．