劉 建， 湯德元*，曾智勇，羅險(xiǎn)峰，李春燕，甘振磊，王 鳳，郝 飛

（ 1.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025；2.貴州省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州 貴陽 550008）

布魯氏菌病又稱布氏桿菌病，是由布氏桿菌引起的一種人畜共患病，病畜臨床主要表現(xiàn)為生殖器官和胎膜發(fā)炎，引起流產(chǎn)、睪丸炎、腱鞘炎和關(guān)節(jié)炎[1]。在家畜中主要感染牛、綿羊、山羊、豬等，并且可以通過這些家畜傳染給人及其他動(dòng)物。本病在世界范圍內(nèi)廣泛分布，對(duì)畜牧業(yè)發(fā)展和人類健康有極大的危害，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為重要傳染病，我國將其列為乙類傳染病[2]。自上世紀(jì)六七十年代起我國通過對(duì)高危人群和家畜進(jìn)行疫苗防治，布魯氏菌病在80年代末至90年代初曾得到較好控制[3]；但之后布氏桿菌病感染率呈現(xiàn)出逐漸上升的勢(shì)頭：1991－2001年間，通過對(duì)共計(jì)2.20萬份人的血清學(xué)調(diào)查顯示，布氏桿菌感染陽性率由90年代初的0.35%上升至2001年的3.57%，這一結(jié)果也間接反映了家畜布氏桿菌感染率逐年上升的事實(shí)[4]。因此，為了解貴州省某規(guī)模化豬場(chǎng)豬布魯氏菌病的流行狀況，本實(shí)驗(yàn)對(duì)該規(guī)模化豬場(chǎng)進(jìn)行了豬布魯氏菌病的血清學(xué)檢測(cè)，以期為該規(guī)模化豬場(chǎng)豬布魯氏菌病的防治提供參考依據(jù)。現(xiàn)將檢測(cè)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 被檢血清

采自貴州省某規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)經(jīng)產(chǎn)母豬血清樣本500份、后備母豬血清樣本200份及公豬血清樣本100份，共計(jì)800份。

1.1.2 診斷液

布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原、標(biāo)準(zhǔn)陽性血清及標(biāo)準(zhǔn)陰性血清，由青島易邦生物工程有限工司生產(chǎn)，批號(hào)為20120409；布氏桿菌病試管凝集抗原，購自農(nóng)業(yè)部動(dòng)物檢疫所。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)方法

1）布魯氏菌虎紅平板凝集試驗(yàn)：按照農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的《中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物布魯菌病診斷技術(shù)》中規(guī)定的技術(shù)要求進(jìn)行操作，待檢血清通過布魯氏菌虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBPT) 進(jìn)行初篩。取一潔凈的玻璃板，其上劃分成4 cm2的方格，在該玻璃板上標(biāo)記各受檢豬血清號(hào)，然后吸取相應(yīng)的待檢血清 0.03 mL 滴于潔凈玻璃板上，在受檢血清旁加入 0.03 mL 虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原，混勻后4 min內(nèi)觀察結(jié)果，同時(shí)設(shè)置陰、陽性血清對(duì)照。陽性或疑似陽性的樣品用布魯氏菌試管凝集試驗(yàn)方法進(jìn)行復(fù)檢確認(rèn)。

2）布魯氏菌試管凝集試驗(yàn)：本試驗(yàn)按《家畜布氏桿菌病試管凝集反應(yīng)技術(shù)操作規(guī)程及判定標(biāo)準(zhǔn)》[5]進(jìn)行。首先稀釋血清，稀釋度依次為 1∶12.5、1∶25、1∶50、1∶100。加入等量稀釋后的抗原，混勻，則血清稀釋度依次為 1∶25、1∶50、1∶100、1∶200。同時(shí)做陰性對(duì)照和陽性對(duì)照及抗原對(duì)照，將全部試管充分震蕩后置 37 ℃溫箱中 20～22 h，取出后放室溫2 h，然后判定結(jié)果。

1.2.2 判斷標(biāo)準(zhǔn)

1）布魯氏菌虎紅平板凝集試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)：在陰、陽性血清對(duì)照成立的條件下，若待檢血清在4 min內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象都判為陽性（+）；若無凝集現(xiàn)象，呈均勻粉紅色者判為陰性（-）。

2）布魯氏菌試管凝集試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)：反應(yīng)結(jié)果可見菌體完全被凝集呈傘狀沉于底部，液體完全透明，記為“++++”，即100%凝集；菌體大部分被凝集沉于底部，液體不十分透明，記為“+++”，即75%凝集；管底可見到明顯的凝集塊，液體不甚透明，記為“++”，即50%凝集；液體混濁，有不甚明顯的沉淀或僅有沉淀的痕跡，記為“+”，即25%凝集；液體均勻混濁，無凝集物，記為“-”，為陰性反應(yīng)。以出現(xiàn)“++”，即50%以上凝集判為陽性；25%凝集，判為可疑。

2 結(jié)果

由表1可知，該規(guī)?；i場(chǎng)經(jīng)產(chǎn)母豬、后備母豬和公豬的豬布魯氏菌病待檢血清樣品，通過布魯氏菌虎紅平板凝集試驗(yàn)進(jìn)行初檢，陽性份數(shù)為10份，陽性率為1.25%；其中公豬檢測(cè)100份，陽性份數(shù)為2份，陽性率為2%， 后備母豬檢測(cè)200份，陽性份數(shù)為5份，陽性率為2.5%，經(jīng)產(chǎn)母豬檢測(cè)500份，陽性數(shù)為3份，陽性率為0.6%。然后對(duì)初檢陽性的血清進(jìn)行布魯氏菌試管凝集試驗(yàn)進(jìn)行確診，結(jié)果表明，以上初檢陽性血清中最終確診4份呈現(xiàn)布魯氏菌陽性，陽性率為0.5%，經(jīng)產(chǎn)母豬、后備母豬和公豬血清陽性數(shù)量分別為2份、1份和1份，陽性率分別為0.4% 、0.5% 和1.0%。

表1 豬布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果

3 結(jié)論與討論

本次試驗(yàn)對(duì)貴州省某規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)經(jīng)產(chǎn)母豬、后備母豬和公豬共計(jì)800份豬血清樣本進(jìn)行了豬布魯氏菌病的血清學(xué)檢測(cè)，根據(jù)結(jié)果可以看出，經(jīng)產(chǎn)母豬、后備母豬和公豬的豬布魯氏菌病陽性率分別為0.4% 、0.5% 和1.0%。本次試驗(yàn)共計(jì)對(duì)800份豬血清樣品進(jìn)行布魯氏菌病檢測(cè)，整體的陽性率為0.5%，與羅明星等[6]的調(diào)查結(jié)果基本一致。

目前布魯氏菌病的診斷和檢測(cè)技術(shù)主要有虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBPT)、試管凝集試驗(yàn)(SAT)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、乳汁環(huán)狀試驗(yàn)(MRT)以及PCR診斷技術(shù)等[7]。從試驗(yàn)結(jié)果可知，用RBPT檢測(cè)豬布魯氏菌病，800份血清樣品共檢測(cè)出陽性血清10份，陽性檢出率為1.25%，而用SAT檢測(cè)出陽性血清4份，陽性檢出率為0.5%，說明用RBPT檢測(cè)血清樣品存在假陽性現(xiàn)象，因此，RBPT只可用于樣品的初步檢疫篩選，經(jīng)RBPT診斷的陽性樣品，須進(jìn)一步做試管凝集試驗(yàn)或其他輔助試驗(yàn)方可定性。SAT是我國布魯氏菌病診斷的法定方法，是一種比較經(jīng)典的布魯氏菌病檢測(cè)方法。SAT既可以定性，也可以定量，因而在判定反應(yīng)強(qiáng)度上比 RBPT更精確。RBPT在使用的時(shí)候操作方便、快捷，但易出現(xiàn)假陽性，適于大規(guī)模樣品的初檢。SAT 特異性好，準(zhǔn)確性高, 但操作繁瑣，費(fèi)時(shí)、費(fèi)力[8]。因此，在實(shí)際工作中，對(duì)待檢血清可采用平板凝集試驗(yàn)初檢，對(duì)陽性者再用試管凝集試驗(yàn)復(fù)檢確定，從而可以達(dá)到快速準(zhǔn)確的目的。本次調(diào)查先用RBPT方法進(jìn)行初篩，再使用SAT方法確診。2種方法均檢出一定比例的陽性率，說明該規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)確實(shí)存在布魯氏菌的感染，故建議該規(guī)模化豬場(chǎng)要加強(qiáng)豬場(chǎng)的免疫、檢疫、淘汰和凈化力度，以避免布魯氏菌病蔓延。

布氏桿菌是一種細(xì)胞內(nèi)寄生菌，抗生素對(duì)其效果較差。因此，本病應(yīng)以免疫預(yù)防為主。一般認(rèn)為帶菌病畜是該病的主要傳染源，病畜可以通過交配、蚊蟲叮咬等途徑傳染健康家畜。對(duì)于檢查到布氏桿菌的養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)采取積極的免疫措施，隔離傳染源，控制疫情蔓延，同時(shí)對(duì)飼養(yǎng)場(chǎng)地、各種用具、車輛等進(jìn)行消毒，對(duì)母畜分娩的排泄物、胎衣所污染的墊草、流產(chǎn)胎衣和胎兒等必須進(jìn)行無害化處理，對(duì)其他未發(fā)病家畜及時(shí)進(jìn)行疫苗免疫。布魯氏菌病是一種人獸共患病，危害性非常大，必須引起高度重視，做好防疫工作。只有高度重視和加強(qiáng)強(qiáng)制性防疫，布魯氏菌病才可以得到較好的控制。

[1] 蔡寶祥.家畜傳染病學(xué)[M].4版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2001.

[2] 王海霞，陳軍光，鄭素君，等.檢測(cè)奶牛布魯氏菌病試驗(yàn)方法的比較[J].中國獸醫(yī)雜志，2008,44(2):33.

[3] 崔麗瑾，王興龍，王英超，等.野生動(dòng)物布魯氏菌病[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào),2010,26(3):283-288.

[4] 張士義，朱岱，壓森林.中國布魯氏菌病防治年回顧[J].中國地方病防治雜志，2003，18（5）:275-278.

[5] 鄭明球.家畜傳染病學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].3版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2005:38-44.

[6] 羅明星,周碧君,王開功,等.貴州省家畜布氏桿菌病血清學(xué)檢測(cè)[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37(1):109-110.

[7] 齊景文.布魯氏菌病常用診斷方法應(yīng)用現(xiàn)狀及評(píng)價(jià)[J].中國畜牧獸醫(yī)，2006，33(8):70-73.

[8] 樊三忠，等.虎紅平板凝集試驗(yàn)與試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)奶牛布魯菌病的比較[J].中國動(dòng)物檢疫，2009，26 (9):52-53.