王 春 內(nèi)蒙古巴彥淖爾市家畜改良站 015000

內(nèi)蒙古巴彥淖爾市廣大畜牧科技人員和農(nóng)牧民經(jīng)過近40年的不懈努力，在對蒙古羊雜交改良的基礎(chǔ)上，引入德國肉用美利奴羊做父本經(jīng)過級進(jìn)雜交、橫交固定和選育提高三個(gè)階段，最終培育成巴美肉羊新品種。2007年國家農(nóng)業(yè)部第878號公告對巴美肉羊予以正式命名。胚胎移植技術(shù)從育種工作開始就被作為重要的育種擴(kuò)繁技術(shù)手段應(yīng)用于實(shí)踐中，我們對利用胚胎移植技術(shù)擴(kuò)大育種核心群進(jìn)行了有益的探索，確定供體間隔5周重復(fù)超排的鮮胚移植技術(shù)路線，實(shí)施人工授精與手術(shù)輸精不同配種方式采胚效果比較。本文即對巴彥淖爾市巴美肉羊核心群數(shù)量擴(kuò)繁中胚胎移植的技術(shù)要點(diǎn)進(jìn)行了探討，供大家參考，以發(fā)揮高新技術(shù)對畜牧產(chǎn)業(yè)發(fā)展的促進(jìn)作用。

1 材料

1.1 供體的準(zhǔn)備

（1）供體選擇

在巴美肉羊育種區(qū)內(nèi)，選擇核心群母羊100只，要求體質(zhì)健壯，營養(yǎng)、生產(chǎn)性能良好，膘情8成以上，無生殖道疾病，沒有妊娠，發(fā)情周期正常。

（2）供體營養(yǎng)

胚胎移植手術(shù)前2個(gè)月在保證其他營養(yǎng)平衡的條件下，將供體日糧蛋白質(zhì)含量提高到30%-35%，并在手術(shù)前40天補(bǔ)給硒、維生素A和維生素E。

1.2 受體準(zhǔn)備

（1）受體選擇

選擇健康無疾病、無生殖道疾病、乳房發(fā)育良好的經(jīng)產(chǎn)本地母羊或寒羊做受體，供、受體比例為1：10，在胚胎移植手術(shù)前2個(gè)月將1000只受體選擇好并集中飼養(yǎng)。

（2）受體營養(yǎng)

補(bǔ)飼精料和青干草、苜蓿，使受體日糧蛋白質(zhì)含量達(dá)到20%-25%，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，保證其體重有所增長，膘情達(dá)8成以上。

1.3 公羊準(zhǔn)備

（1）公羊選定

在巴美肉羊核心群內(nèi)選擇能正常采精的優(yōu)秀種公羊20只。

（2）選配方案

基本原則是純種繁育，擴(kuò)大核心群母羊的群體數(shù)量。

（3）公羊飼養(yǎng)管理

專人飼養(yǎng)種公羊，適當(dāng)加大精料飼喂量，每天補(bǔ)飼2枚雞蛋、0.5kg胡蘿卜。每天上、下午兩次運(yùn)動(dòng)，每次運(yùn)動(dòng)休息半小時(shí)后進(jìn)行采精，并做好精液鏡檢記錄。

1.4 試情公羊準(zhǔn)備

按日處理受體羊100只，公、母比例以1：10計(jì)，準(zhǔn)備試情公羊，即10只試情羊。

1.5 防疫準(zhǔn)備

在進(jìn)入超排、同期發(fā)情處理前2個(gè)月對所有供體、受體、公羊、試情羊全部按防疫程序進(jìn)行防疫、驅(qū)蟲、藥浴，并做好相關(guān)記錄。

1.6 藥械準(zhǔn)備

做好胚胎移植手術(shù)用手術(shù)架、顯微鏡、促卵泡激素、陰道栓等器械藥物及其他敷料的準(zhǔn)備工作。

2 方法

2.1 第一次胚胎移植方案

（1）2009年8月15日-8月24日每天觀察供體羊發(fā)情，然后做同期發(fā)情處理，放CIDR（陰道栓）每天處理10只，即為1組。供體100只，共分10個(gè)組（G1-G10）。

（2）8月17日-8月26日受體羊第一次同期發(fā)情處理，肌注0.8mlPG(前列腺素)/只。每天處理100只，總數(shù)為 1000 只，共 10 個(gè)組，（S1-S10），與供體的10個(gè)組相匹配。

（3）8月28日-9月6日供體超排。

（4）8月30日-9月8日受體羊第二次同期發(fā)情處理，肌注0.8mL PG(前列腺素)/只。

（5）9月2日-9月11日供體羊配種。前5組供體采用人工授精配種，后5組采用手術(shù)法輸卵管輸精配種。

（6）9月5日-9月14日做移植。采用手術(shù)收集供體輸卵管內(nèi)的胚胎，并通過鏡檢后將合格的胚胎移植到與采胚供體相匹配 （與供體發(fā)情同步或提早、推后12小時(shí)）受體的輸卵管內(nèi)。

2.2 第二次胚胎移植（重復(fù)超排）方案

對第一次超排的100只供體中不宜再作供體的9只淘汰，對其余91只供體，分9組（G1-G9），每組10只（最后一組11只）。在2009年10月15日-10月24日，即上次超排手術(shù)采胚后5周進(jìn)行第二次超排處理。同時(shí)相匹配對900只受體進(jìn)行第二次同期處理，分9個(gè)組（S1-S9）。11月4日-11月13日進(jìn)行采胚移植，移植方案與第一次相同，執(zhí)行20天超排程序，供體配種采用手術(shù)輸卵管輸精法。

3 結(jié)果

3.1 第一次胚胎移植效果（2009年9月5日-9月14日采胚移植）

（1）超排供體100只，其中超排發(fā)情、配種、采胚91只，超排反應(yīng)率91%，有效胚胎率88.0%，平均采有效胚7.65枚/只。

采胚移植效果詳見表1、表2。

表1：第一次采胚效果

同期發(fā)情處理受體1000只，同期發(fā)情反應(yīng)率85.2%，手術(shù)受體羊利用率97.8%（黃體發(fā)育好，能移植），受體全部移植單胚，妊娠率58.6%。

（2）配種方式不同采胚效果比較，詳見表3。

人工授精45只供體，采有效胚301枚，只均6.69枚，有93枚未受精卵；手術(shù)輸卵管輸精46只供體，采有效胚 395枚，只均 8.59枚，有 2枚未受精卵。兩組采有效胚相比（P＜0.01），差異極顯著。

表3：配種方式不同采胚效果比較

3.2 第二次胚胎移植效果（11月4日-11月13日采胚移植）

結(jié)果見表4、表5。

表4：第二次超排采胚效果

表5：第二次超排移植效果

4 討論

4.1 配種方式的影響

人工授精配種有效胚胎率74.6%，有未受精卵；手術(shù)輸卵管輸精配種有效胚胎率95%以上，幾乎無未受精卵。兩種配種法只均有效胚分別為6.69和8.59枚，有明顯差異。這兩種方式用于供體配種，后者明顯優(yōu)于前者，并且手術(shù)輸卵管輸精僅需1次配種(人工授精配種需4-5次)，可以大量減少勞動(dòng)量，降低勞動(dòng)強(qiáng)度，又可以減少種公羊的數(shù)量。

4.2 重復(fù)超排效果

從表3與表4對比可以看出，用同樣的方法對供體在第一次采胚手術(shù)后間隔5周進(jìn)行重復(fù)超排，平均采有效胚第一次8.59枚/只，第二次8.6枚/只，差異不顯著（P>0.05），且效果很好。當(dāng)然重復(fù)超排與超排處理技術(shù)、手術(shù)技巧及術(shù)后護(hù)理有很大的關(guān)系，否則會造成供體喪失繁殖能力。

4.3 同期發(fā)情效果比較

同樣的同期發(fā)情方法，供、受體第一次同期發(fā)情反應(yīng)率為91%、85.2%，第二次同期處理為98.9%、86.2%，差異不顯著（P>0.05）。

4.4 移植受胎效果比較

兩次超排采胚移植妊娠率分別為第一次58.6%，第二次60.1%，受胎效果差異不顯著 （P>0.05）。

5 結(jié)論

（1）利用胚胎移植技術(shù)擴(kuò)大巴美肉羊育種核心群數(shù)量，可以采用在手術(shù)采胚后間隔5周重復(fù)超排，再令其自然懷孕恢復(fù)生產(chǎn)能力，可加快核心群擴(kuò)群速度，推動(dòng)育種進(jìn)程。

（2）人工授精與手術(shù)輸卵管輸精兩種配種方法供體排卵受精率有明顯差異，前者76.4%，后者達(dá)95%以上。并且采用手術(shù)輸卵管輸精既可以減少種公羊使用數(shù)量，又可以大大降低工作人員的勞動(dòng)強(qiáng)度，很值得推廣。