黃國勝

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，生長因子及其受體在指導(dǎo)肺癌的治療和判斷患者的預(yù)后中發(fā)揮了重要的作用。我們應(yīng)用免疫組化法對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者組織中的表皮生長因子受體(EGFR)和Ki-67進(jìn)行檢測(cè)，以研究它們?cè)诜伟┙M織中的表達(dá)及其意義。

1 資料與方法

1.1資料 收集我院2011年58例非小細(xì)胞肺癌手術(shù)患者的組織標(biāo)本，男32例，女26例，年齡42～65歲;其中鱗癌22例，腺癌36例;Ⅲ期7例，Ⅳ期51例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例。

1.2方法 對(duì)腫瘤蠟塊切片，進(jìn)行免疫組化染色。應(yīng)用二甲苯、乙醇脫蠟水化;3%雙氧水封閉內(nèi)源性酶，漂洗5 min后再用PBS漂洗15 min。抗原修復(fù):將切片置于pH值為6的檸檬酸鹽緩沖液中，微波加熱至95℃，Ki-67修復(fù)30 min，EGFR修復(fù)5 min，自然冷卻至室溫，PBS緩沖液漂洗;用濃度為5%的小牛血清封閉內(nèi)源性酶，加抗EGFR及抗Ki-67，在37℃環(huán)境中濕盒培育1 h，PBS漂洗;最后用Zymed系統(tǒng)檢測(cè)后進(jìn)行DAB顯色。

1.3結(jié)果判定 EGFR按陽性細(xì)胞所占的百分比分級(jí):陰性為(-)，陽性 ＜30%為(+)，30% ～50%為(++)，50% ～75%為(+++)，＞75%為(++++)，對(duì)應(yīng)分值為0～4分。Ki-67根據(jù)陽性腫瘤細(xì)胞的百分比分級(jí)，陰性為(-)，陽性 ＜25%為(+)，25% ～50%為(++)，50% ～75%為(+++)，＞75%為(++++)，對(duì)應(yīng)分值分別為0～4分。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1EGFR及Ki-67在肺癌組織中的表達(dá) EGFR及Ki-67(見后插頁圖)在肺癌組織中表達(dá)的陽性率分別為60.34%和89.66%，與正常組織的陽性率分別為0和5.56%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 EGFR及Ki-67在肺癌組織及肺部正常組織中的表達(dá)

3.2EGFR及Ki-67在肺癌組織中的陽性共表達(dá)情況，Ki-67與EGFR之間有明顯相關(guān)性(P＜0.05)。見表2。

表2 EGFR及Ki-67在肺癌組織中的陽性共表達(dá)情況

圖1 Ki-67在中分化鱗癌中的高表達(dá)(S-P×200)

圖2 EGFR在肺鱗癌細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)(S-P×200)

3 討論

表皮生長因子受體(EGFR)是一種跨膜蛋白，含有118個(gè)氨基酸，細(xì)胞外的配體結(jié)合區(qū)含621個(gè)氨基酸，配體結(jié)合位點(diǎn)主要在294～543位氨基酸之間［1］。研究表明，Ki-67的表達(dá)科準(zhǔn)確反映腫瘤細(xì)胞的增殖率，與多種腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移、預(yù)后有關(guān)［2］。本研究顯示，Ki-67在肺癌組織中陽性表達(dá)率為89.66%，而且在低分化腺癌組織中的表達(dá)較在中高分化腺癌組織的表達(dá)明顯升高，這表明Ki67染色陽性程度與組織學(xué)分期有一定的相關(guān)性，故Ki-67的檢測(cè)可作為判斷NSCLC預(yù)后的一種指標(biāo)。

腫瘤的形成和發(fā)展是跟多因素、多基因相關(guān)，Ki-67與EGFR呈正相關(guān)，說明兩者在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中有一定的協(xié)同作用，其機(jī)制可能是EGFR的酪氨酸激酶活性使細(xì)胞內(nèi)酪氨酸殘基的磷酸化引起多種效應(yīng)，包括蛋白激酶活化，蛋白質(zhì)和DNA合成增加，導(dǎo)致細(xì)胞增殖［3］。分子靶向治療在腫瘤的治療中顯現(xiàn)出療效確切、安全性好的優(yōu)勢(shì)，采用免疫組化法檢測(cè)肺癌中的多種生物指標(biāo)可為臨床提供重要信息，并為肺癌患者接受分子靶向治療提供理論依據(jù)，而且簡易可行，值得臨床推廣使用。

［1］LAX I，BURGESS W H，BELLOT F.Localization of amajor receptor binding domain for epidermal growthfactor by affinity labeling.Mol Cell Biol，2008，8(4):1831-1834.

［2］Yang SX，He witt SM，Steinberg SM，et al.Expression levels ofe IF4E，VEGF，and cyclin D1，and correlation of eIF4E with VEGF and cyclin D1 in multitum or tissue microarray.Oncol Rep，2008，17(2):281-287.

［3］田韌，龔涌靈，楊勁松，等.胰腺癌組織中腫瘤生長因子-α和表皮生長因子受體的表達(dá)與胰周神經(jīng)侵犯的相關(guān)性研究.醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2006，19(12):1105-1106.