楊元　吳興杰　陳建月

摘要：以青蘋果和貓眼兩個竹芋品種為植物材料，研究慶大霉素、硫酸鏈霉素、四環(huán)素、卡那霉素等4種抗生素對竹芋內(nèi)生菌的抑制和芽的誘導(dǎo)及生根的影響。結(jié)果表明，將慶大霉素作為竹芋組織培養(yǎng)中的抑菌劑效果最好，使用濃度范圍控制在500～1 000 mg·L-1。

關(guān)鍵詞：青蘋果竹芋；貓眼竹芋；抗生素；內(nèi)生菌；芽

中圖分類號： R978.1 文獻標識碼：ADOI編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2012.06.031

觀賞竹芋一般靠分蘗繁殖，速度較慢，同時由于病毒病等原因，在種植過程中退化和逐漸死亡的現(xiàn)象較為嚴重，致使引進的許多名貴品種逐漸減少[1]，因此，采取組織培養(yǎng)繁殖竹芋成為較合理的方法。但在組織培養(yǎng)過程中，由于共生菌的存在，大大增加了組織培養(yǎng)的難度，再生體系很難建立[2-6]。通過不同的消毒處理方法可以獲得竹芋無菌外植體，但有一定難度。有研究表示，在環(huán)境和培養(yǎng)基中加入一定量的抗生素也可防止污染。

抗生素原稱抗菌素，是指由細菌、放線菌、真菌等微生物經(jīng)培養(yǎng)而得到的某些產(chǎn)物，或用化學(xué)半合成法制造的相同或類似的物質(zhì)，在一定濃度下對病原體有抑制和殺滅作用[7-8]。為了提高竹芋組織培養(yǎng)時外植體的成活率，減少真菌和細菌的污染， 本研究以青蘋果和貓眼竹芋為材料，在組培各階段的培養(yǎng)基中分別加入抗生素，探討不同濃度的抗生素對竹芋內(nèi)生菌的抑制、芽的誘導(dǎo)及生根、組培苗移栽的影響，為竹芋無菌組培苗的快繁奠定基礎(chǔ)。

1材料和方法

1.1 試驗材料

試驗材料為天津市園林花卉示范中心溫室生長的進口青蘋果和貓眼竹芋的分蘗芽。

1.2 方 法

1.2.1 材料處理 在生長健壯、無病蟲害的優(yōu)良母株上切取長度為6～10 cm的新生側(cè)芽，除去芽體周圍的雜質(zhì)，剝?nèi)ノ凑归_的葉片和葉鞘，用流水沖洗表面，切除基部木質(zhì)化組織，將側(cè)芽切成1.0～1.5 cm的小芽段。用洗衣粉溶液浸泡12 min，自來水沖洗30 min，在無菌條件下用1%消毒凈消毒10～12 min，再用0.1%升汞（加1滴80%吐溫）消毒13 min，無菌水沖洗5次，剝?nèi)ヅc藥液接觸受傷的最外層苞葉，在無菌操作臺上去除芽體表皮，將芽切成0. 5～1. 0 cm芽段待用。

1.2.4試驗過程

（1） 內(nèi)生菌的抑制與芽的誘導(dǎo)

將已消毒的分蘗芽接種到含有不同抗生素的芽啟動培養(yǎng)基上，每種培養(yǎng)基接30瓶，每瓶1個芽，重復(fù)3次。各培養(yǎng)基均添加30 g·L-1蔗糖， 6 g·L-1瓊脂 ， pH值調(diào)至5. 8。培養(yǎng)溫度為（25±2） ℃，光照時間為12 h·d-1，光照強度為40 μmol·m-2·s-1。

40 d后分析比較抗生素的種類和濃度對分蘗芽的內(nèi)生菌抑制效果及對芽的誘導(dǎo)效果。

（2）芽的增殖

篩選最佳抗生素后，在抗生素的合理濃度范圍內(nèi)設(shè)計濃度梯度，挑選誘導(dǎo)出1～2個芽體的無菌母株，接入含有不同濃度抗生素的芽增殖培養(yǎng)基中進行增殖。每種培養(yǎng)基接30瓶，每瓶1個芽，重復(fù)3次。各培養(yǎng)基均添加30 g·L-1蔗糖， 6 g·L-1瓊脂 ， pH值調(diào)至5. 8。培養(yǎng)溫度為（25±2） ℃，光照時間為16 h·d-1，光照強度為40 μmol·m-2·s-1。20 d后分析比較抗生素的不同濃度對分蘗芽內(nèi)生菌的抑制效果及對芽增殖的影響。

（3）根的誘導(dǎo)

選取2～4 cm的增殖后的芽體，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上壯苗生根，每種培養(yǎng)基接10瓶，重復(fù)3次，接種30 d后統(tǒng)計根系生長情況，比較抗生素不同濃度對分蘗芽內(nèi)生菌的抑制效果及對生根的影響。

（4）組培苗的移栽

2結(jié)果與分析

2.4抗生素對組培苗移栽的影響

組培苗移栽30 d后，青蘋果竹芋幼苗生長良好，成活率達98%，貓眼竹芋幼苗成活率稍低，為96%。前期生根階段添加各濃度的慶大霉素對成活率無太大影響，只是根系細弱的組培苗較健壯苗緩苗時間稍長一些。

3討 論

（1）抗生素在較高的濃度下會對植物的生長產(chǎn)生不利的影響，過高濃度的抗生素同樣會殺死植物[10]。因此，在選擇抗生素和設(shè)置濃度階段，不僅要考慮抗生素的作用機理，還要將添加的濃度控制到一定的范圍內(nèi)。除慶大霉素外的其他3種抗生素使用濃度越大，抑菌效果越好，可是誘導(dǎo)率大大降低，可能是抗生素的最佳抑菌濃度，對外植體產(chǎn)生了毒性。有研究顯示，用幾種抗生素的組合可以更好的抑制共生菌，且不影響植物體的正常分化，這還需要進一步的試驗。

（2）將慶大霉素作為竹芋組培抑菌劑方便有效，在嚴格控制的濃度范圍內(nèi)對組培苗的移栽成活率基本無影響，而且它是為數(shù)不多的熱穩(wěn)定性的抗生素，因而廣泛應(yīng)用于培養(yǎng)基配置。

（3）在本次試驗中，青蘋果竹芋和貓眼竹芋在添加不同抗生素后表現(xiàn)相近，但相比之下，青蘋果竹芋有較高的誘導(dǎo)率和繁殖系數(shù)，且移栽成活率也較高。可能是竹芋不同品種之間的差異問題。

（4）有研究表示，青蘋果竹芋無需生根即可獲得較健壯的小苗[9]，本試驗為比較添加不同濃度的抗生素對竹芋組培各個階段的影響，因此分為誘導(dǎo)、擴繁、生根、移栽4個階段。但在工廠化生產(chǎn)中，為節(jié)約成本，可以即時調(diào)節(jié)激素配比，將組培苗擴繁和生根階段簡化，縮短生產(chǎn)周期，以期獲得更多的經(jīng)濟效益。

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