李慧　夏鴻飛　王曉旭

摘要：為了對野生資源進行保護，同時滿足人們的需求，以具生長點的皺葉酸模莖段為材料，采用植物組織培養(yǎng)方法，對生長點的分化培養(yǎng)、分化芽生根培養(yǎng)、試管苗移栽、定植進行了研究。結(jié)果表明：MS+NAA0.05 mg·L-1+6-BA2.0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1是皺葉酸模生長點分化培養(yǎng)的理想培養(yǎng)基；誘導分化芽生根的理想培養(yǎng)基是MS+IAA0.2 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1；最佳的分化模式是先生根，再加入液體形式的最適分化培養(yǎng)基；試管苗移栽成活率高達100%，定植的試管苗保持了野生植株的生物學性狀。

關鍵詞：皺葉酸模；組織培養(yǎng)；無性系

中圖分類號： S336 文獻標識碼：ADOI編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2012.06.029

皺葉酸模（Rumex crispus）為蓼科（Polygonaceae）酸模屬多年生草本植物，又稱土大黃、羊蹄葉子等[1]。該植物廣泛分布，多生于河流、湖泊沿岸及水溪旁。其根可入藥，含大黃酚 （Chrysophanol）、大黃素（Emodin）、色素、有機酸、草酸鈣、鞣質(zhì)、樹脂、糖類、淀粉及黏液質(zhì)等。其功能為清熱解毒，止血，通便，殺蟲。臨床主要用于治療鼻出血，子宮出血，血小板減少性紫癜，大便秘結(jié)等；外用治外痔，急性乳腺炎，黃大瘡，癤腫，皮癬等[2]。由于皺葉酸模具有重要的藥用價值，多年來人們都在大量地采挖藥用，再加之生態(tài)環(huán)境的破壞，使該藥用植物的野生資源迅速減少。為保護這種野生藥用植物，研究者對其進行了無性系建立的研究。近年來，已有學者對蓼科植物愈傷組織培養(yǎng)進行了研究 [3-6]，而對于皺葉酸模的研究多集中在皺葉酸模的化學成分及其含量的分析方面[2-8]，并且迄今未見皺葉酸模組織培養(yǎng)及試管苗培養(yǎng)的報道。本研究以生長旺盛的皺葉酸模嫩芽為材料，成功地探究出皺葉酸模嫩芽的理想分化及生根培養(yǎng)基，為皺葉酸模無性系的建立奠定了基礎。

1材料和方法

1.1 材料與滅菌

采集大連郊區(qū)水庫旁生長旺盛的皺葉酸模，剪取具有嫩芽的嫩苗或嫩莖，放到250 mL的磨口廣口瓶中，用自來水振蕩洗滌20 min左右，接著用0.05%安利洗滌劑振蕩洗滌2～3 min，再用自來水漂洗至泡沫消失時轉(zhuǎn)移到超凈工作臺上，然后加75%酒精滅菌10～20 s，迅速倒入無菌水，振蕩洗滌3次，再加入0.05%HgCl2溶液振蕩滅菌1 min，再加入等體積無菌水，使HgCl2滅菌液的濃度變?yōu)?.025%，繼續(xù)振蕩滅菌14 min，接著用無菌水振蕩洗滌5次，即獲得無菌材料。

1.2培養(yǎng)條件

1.3方法

1.3.1芽的分化培養(yǎng)在超凈工作臺上，將無菌材料剪成帶芽的小段接種到以MS為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的6-BA、KT和NAA的培養(yǎng)基上進行分化培養(yǎng)，每種培養(yǎng)基接種培養(yǎng)30個材料，進行不同濃度生長調(diào)節(jié)劑對芽分化的影響試驗。將接種的材料放置在恒溫培養(yǎng)箱中，給予1 000 Lx的光照。培養(yǎng)25 d后統(tǒng)計，試驗重復2次。

1.3.3試管苗移栽的方法從含不同生長素生根培養(yǎng)基中，各取出長勢較好的試管苗80株，用清水洗去根部的培養(yǎng)基，不經(jīng)過煉苗，將其中的40株試管苗直接移植到添有1/2河沙和1/2園土的花盆中，另外40株移植到室外背陰處。移栽后前7 d花盆放在沒有陽光直射的環(huán)境中，7 d之后將花盆搬至太陽下。40 d后，與室外的移栽苗一起統(tǒng)計成活率。

2結(jié)果與分析

2.1不同濃度生長調(diào)節(jié)劑對芽分化的影響

3討論

本研究中，在添加濃度為2.0 mg·L-1的6-BA時，皺葉酸模芽的分化率最高，搭配低濃度的NAA分化芽數(shù)較多。25 d的平均分化芽數(shù)為6.3個，按照這個速度，一年能繁殖出6.314.6個試管苗。利用這種方法進行繁殖，在較短的時間內(nèi)就能繁殖出大量的試管苗。滿足了栽培對種苗的需求，實現(xiàn)了對皺葉酸模野生資源的保護。用本研究中的生根培養(yǎng)基培養(yǎng)出的皺葉酸模試管苗，基本沒有無效苗，這也極大地提高了繁殖速度。

移植到花盆和室外的試管苗沒有經(jīng)過煉苗的過程，直接移植到土中的試管苗在一周內(nèi)就能恢復正常的生長，且生長旺盛，可能由于以下幾點原因：一是在選擇移植的試管苗時，首先選擇的是生長較旺盛，根系發(fā)達的試管苗；二是在生根和分化培養(yǎng)的時候加入了許多生長素，在試管苗移植之后，仍然有一部分生長素殘留在植物內(nèi)部或根部，這些生長素可以對植物的進一步生長發(fā)揮作用；三是無論是皺葉酸模的試管苗還是野生苗都有很強的抗性和對新環(huán)境的適應能力。這些都使得皺葉酸模的試管苗不用經(jīng)過煉苗，直接移植就能很旺盛的生長。

參考文獻：

[1] 李書心.遼寧植物志（下冊）[M]. 沈陽：遼寧科學技術出版社，1991：569.

[2] 江蘇新醫(yī)學院.中草藥大辭典（上冊） [M]. 上海：上海人民出版社，2003：295-296.

[3] 鄭明瓊，鄒小魯.魯梅克斯酸模的組織培養(yǎng)[J]. 亞熱帶植物科學，2001，30（2）：62.

[4] 郝道合，賈文慶.歐洲大黃的組織培養(yǎng)和快速繁殖[J]. 信陽農(nóng)業(yè)高等?？茖W校學報，2011，21（2）：113-115.

[5] 吉繼雍.大黃組織培養(yǎng)研究[J]. 陰山學刊，2010，24（2）：45-48.

[6] 高迎秋，孔祥慧，李肖依，等.東方蓼組織培養(yǎng)及無性系的建立[J].山西農(nóng)業(yè)科學，2009（1）：15-18.

[7] 衛(wèi)蘭，謝建新，李艷，等.皺葉酸?？傸S酮的超聲提取及含量測定[J].石河子大學學報：自然科學版，2004，22（3）252-261.

[8] 范積平，張貞良.皺葉酸模的化學成分研究（Ⅱ） [J]. 廣東藥學院學報， 2009，25（6）：585-587.

[9] 姜長陽.培養(yǎng)基瓊脂用量的商榷[J].植物生理學通訊，1990，16（2）：53-54.

[10] 安利佳，姜長陽.植物組織培養(yǎng)導論[M].大連：遼寧師范大學出版社，1996：55-72.