陜西省咸陽市渭城區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局 龐 瑞 （咸陽 702000）

丹芍通絡片是由丹參、赤芍、制何首烏、山楂、葛根、郁金、三七等藥物組成的中藥復方制劑，具有活血化瘀、散結通脈之功，用于冠心病、心絞痛的治療。其中丹參、赤芍、制何首烏、山楂、葛根五味藥材采用水提取的工藝。為了有效控制提取工藝，本文將采取正交試驗法，以丹酚酸B、芍藥苷含量結合干膏得率為評價指標，優(yōu)選水提取工藝條件。

1 儀器與試藥

1.1 試藥 丹參、赤芍、制何首烏、山楂、葛根等中藥均購自陜西省藥材公司，經檢驗均符合《中國藥典》2010年版一部的規(guī)定;［1］丹酚酸 B對照品 （批號 111562－201110，供含量測定用）;芍藥苷對照品 （中國藥品生物制品檢定所，批號:110736－200833，供含量測定用）均購自中國藥品生物制品檢定所。所用化學試劑為分析純 （天津富宇化學試劑廠）、液相用試劑為色譜純 （美國Fisher scintific）、水為娃哈哈純凈水 （杭州娃哈哈食品有限公司）。

1.2 儀器 高效液相色譜儀 ［Lab Alliance型恒流泵;Waters966二極管陣列檢測器，活德國際貿易 （上海）有限公司;Millennium 32色譜工作站］、C18色譜柱 （Diamosil 4.6×250mm，5μm）、超聲波清洗機 （H66025T）、TGL－16G離心機 （上海安亭科學儀器廠）、HCTP11B10托盤藥物天平 （北京市宣武區(qū)天平廠）、BP211D型電子分析天平（德國賽多利斯天平有限公司）。

2 方法與結果

2.1 提取工藝正交設計 為了確定最佳的提取參數(shù)，擬采用正交試驗對提取工藝中所涉及的條件進行優(yōu)選，通常情況下:加水量、提取時間、提取次數(shù)對提取結果影響較大，因此，以加水量、提取時間、提取次數(shù)作為影響因素，各選擇3個水平，以L9（34）表安排試驗，篩選最佳提取工藝條件。因素水平表見表1。

表1 因素水平表

2.2 評價指標的確定 丹參、赤芍為方中君藥，丹酚酸B、芍藥苷為其主要有效成分，且其含量測定有成熟方法，因此選擇以丹酚酸B、芍藥苷的含量并結合干膏得率作為評價指標。

2.3 樣品溶液的制備 按處方比例量稱取提取工藝部分的藥材 （丹參、赤芍、制何首烏、山楂、葛根）102 g，共9份，按正交實驗表下設計的實驗條件以加熱回流方式進行提取，合并提取液。將上述提取液濃縮，定容至一定體積，制得樣品溶液。

2.4 出膏率測定方法 取各正交試驗號濃縮液100 mL，于干燥蒸發(fā)皿中水浴蒸干，80℃烘箱干燥至干，取出，迅速置干燥器中放冷，稱重，計算出膏率。

2.5 含量測定

2.5.1 丹酚酸B含量測定［2－3］

2.5.1.1 色譜條件:色譜柱:C18色譜柱 （Diamosil 4.6×250 mm，5μm）;流動相:乙腈－甲醇－ （甲酸︰水）［10︰30︰60（1︰59）］;流速1.0 mL/min;檢測波長286 nm;柱溫25℃;進樣量10μL。

2.5.1.2 對照品溶液的制備:精密稱取丹酚酸B對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.152 6mg的溶液，搖勻，即得。

2.5.1.3 供試品溶液的制備:分別精密吸取各提取液7.5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，用微孔濾膜 （0.45μm）濾過，即得。

2.5.1.4 測定法:分別吸取對照品溶液及上述供試品溶液各10μL，注入色譜儀，測定并計算。

2.5.2 芍藥苷含量測定［4－5］

2.5.2.1 色譜條件:色譜柱:C18色譜柱 （Diamosil4.6×250 mm，5μm）;流動相:甲醇－水 （30:70）;流速1.0 mL/min;檢測波長230 nm;柱溫25℃;進樣量10μL。

2.5.2.2 對照品溶液的制備:精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.052 6mg的溶液，搖勻，即得。

2.5.2.3 供試品溶液的制備:分別精密吸取各提取液7.5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，用微孔濾膜 （0.45μm）濾過，即得。

2.5.2.4 測定法:分別精密吸取對照品溶液及上述供試品溶液各10μL，注入色譜儀，測定并計算。

2.6 結果及分析 正交試驗結果見表2，方差分析結果見表3。

表2 L9（34）正交試驗表及結果

表3 方差分析表

試驗結果:由正交試驗結果以及方差分析結果綜合考慮，最佳工藝為A3B2C3。即:加12倍量水煎煮提取3次，每次1.5 h。

2.7 驗證試驗 按處方量稱取各藥材共102 g，共3份，按照所選提取條件試驗，并測定丹酚酸B、芍藥苷的含量以及干膏得率。結果見表4。

表4 驗證試驗結果

3次驗證試驗表明，檢測指標接近或者高于正交表中最優(yōu)值，說明優(yōu)選的提取條件基本可行。

3 討論

3.1 在對提取工藝條件進行優(yōu)選時，我們同時考察了丹酚酸B、芍藥苷的含量以及干膏得率，這比采取單一指標對提取工藝進行評價更加科學和合理。

3.2 根據(jù)本實驗優(yōu)選的最佳工藝，經3批驗證，結果產品質量穩(wěn)定，適合工業(yè)化大生產。

［1］ 國家藥典委員會.中國藥典一部［S］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2010.29－312

［2］ 江川，黃玉芳，鄧美珠.HPLC法測定康達心口服液中丹酚酸B的含量［J］．海峽藥學，2010，22（9）:75－76

［3］ 劉元，莫海濤，宋志釗，等.HPLC法測定千斤腦康寧膠囊中丹酚酸 B的含量 ［J］．中國實驗方劑學雜志，2010，16（4）:37－38

［4］ 侯林中，裴玉書，張熙潔，等.HPLC法測定寬心口服液中芍藥苷的含量［J］．中國藥房，2011，22（31）:2 933－2 934

［5］ 鄭建鋒，鄭阿利，蓋軻.HPLC法測定冠心康顆粒中芍藥苷的含量［J］．中國藥事，2011，25（4）:377－381

（2012－05－28 收稿）