牛春波，王麗萍，王雪梅，崔亞南，賈飛勇，張 廣

(1.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院病理科，吉林 長春 130033；2.吉林大學第一醫(yī)院兒內科，吉林 長春 130021；

3.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院甲狀腺外科，吉林 長春 130033)

乳頭狀癌是甲狀腺最常見的惡性腫瘤，目前穿刺活檢提高了甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)的早期診斷率[1]，使患者得到早期及時治療而明顯改善了其預后。但穿刺標本由于癌組織量過少，形態(tài)上與甲狀腺良性病變(benign thyroid lesions，BTL)差距不大，使部分穿刺病例術前得不到確切的病理診斷。半乳糖凝集素-3(Galectin-3)和細胞角蛋白19(CK19)是用于甲狀腺手術標本鑒別診斷的常用抗體，文獻[2]報道其在甲狀腺良惡性病變的鑒別診斷中具有顯著意義。但在甲狀腺穿刺活檢標本中的應用國內外少見報道。本研究通過分析Galectin-3、CK19和Ki67蛋白在PTC和BTL的表達差異，探討這3種抗體聯(lián)合檢測在甲狀腺穿刺標本PTC鑒別診斷中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料收集吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院2010年1月—2011年8月甲狀腺穿刺病理標本，選擇PTC標本20例，其中男性9例，女性11例，年齡23～57歲。BTL標本16例，其中結節(jié)性甲狀腺腫5例，甲狀腺腺瘤樣增生7例，淋巴細胞性甲狀腺炎3例，肉芽腫性甲狀腺炎1例；男性7例，女性9例，年齡24～55歲。

1.2 形態(tài)學觀察以上標本均為10%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，HE染色制片。顯微鏡觀察各組病例的形態(tài)特點。

1.3 蛋白表達檢測及結果判定應用免疫組化EnVision法檢測36例陽性染色標本中3種蛋白表達，Galectin-3、CK19和Ki67均為即用型抗體(購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司),按試劑盒說明書步驟進行染色。用PBS代替一抗作陰性對照,用已知陽性的PTC組織作為陽性對照。Ki-67陽性為細胞核的棕黃色顆粒，細胞核著色細胞數(shù)<1%判定為陰性，著色細胞數(shù)>1%判定為陽性；Galectin-3陽性為細胞漿的棕黃色顆粒，CK19陽性為細胞膜的棕黃色顆粒，結果按陽性細胞所占百分比并參考著色強度確定分級：陽性細胞數(shù)<10%為陰性(-)，陽性細胞11%～25%為弱陽性(+)，陽性細胞數(shù)26%～50%為中度陽性()，陽性細胞數(shù)>51%為強陽性()。

1.4 統(tǒng)計學分析采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計分析,組間率的比較采用χ2檢驗。

2 結 果

2.1 病理形態(tài)學特點穿刺標本PTC病變組織長約0.1～1.0 cm，直徑多為0.1 cm，癌細胞排列成乳頭狀和(或)濾泡狀結構，間質纖維化常見，部分伴鈣化，多向周邊甲狀腺組織浸潤性生長，細胞核增大呈橢圓形，核染色淺呈毛玻璃樣，常見核內包涵體及核溝，核溝沿細胞核長軸排列(圖1，見插頁四)；BTL中結節(jié)性甲狀腺腫為增生的甲狀腺濾泡間見多條纖維條帶；甲狀腺腺瘤樣增生為部分甲狀腺濾泡聚集增生，與正常甲狀腺組織界限清楚；淋巴細胞性甲狀腺炎為增生萎縮的甲狀腺濾泡間散在淋巴組織及淋巴濾泡形成；肉芽腫性甲狀腺炎為甲狀腺濾泡間見灶狀肉芽腫性炎癥。BTL中增生的濾泡狀結構，可有或無細胞核的異型性，即核增大毛玻璃樣，部分有核溝及核內包涵體，但無乳頭狀結構及周邊浸潤。

2.2 各種蛋白的免疫組織化學表達Galectin-3陽性染色為細胞漿呈彌漫性或顆粒狀棕黃色(圖2A，見插頁四)，部分組織僅甲狀腺濾泡膠質黃染需判斷為陰性。CK19陽性染色為細胞漿棕黃色顆粒(圖2B，見插頁四)。Ki67陽性染色為細胞核棕色顆粒，部分細胞核淡染需判斷為陰性。Galectin-3、CK19和Ki67在PTC組陽性率分別為90%(18/20)、95%(19/20)及60%(12/20)，在癌旁正常甲狀腺濾泡陰性表達；在BTL組陽性率分別為12.50%(2/16，均為弱陽性)、31.25%(5/16，均為弱陽性)及62.50%(10/16)，在病變旁正常甲狀腺濾泡陰性表達。經(jīng)統(tǒng)計學分析，Galectin-3 和CK19在PTC與BTL 組間表達率比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=533.89，P<0.01；χ2=72.12，P<0.01)，而Ki67在PTC與BTL組織中表達均較低，2組比較差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.10，P>0.05)。

3 討 論

Galectin-3是相對分子質量為31 000的β半乳糖蛋白，參與多種生物學過程，如細胞之間以及細胞與基質間的相互作用，調節(jié)細胞增殖與黏附、細胞凋亡、血管生成等過程，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及轉移等[3-4]。目前研究[5-8]報道：Galectin-3在甲狀腺癌、胃腸道癌、胰腺癌、子宮內膜腺癌、乳腺癌以及平滑肌肉瘤等惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及轉移過程中起著重要的作用。研究[9]表明：Galectin-3在不同性質甲狀腺病變中的表達有明顯差異,即在PTC中的表達率最高,其次是甲狀腺濾泡癌，在結節(jié)性甲狀腺腫和濾泡性腺瘤中則無表達或弱陽性表達，因而目前普遍認為Galectin-3是鑒別甲狀腺良惡性病變最可靠的一線蛋白標記物。最近Htwe等[10]研究發(fā)現(xiàn)：Galectin-3在PTC組織中心部的表達強于其在癌灶周邊甲狀腺內浸潤的細胞巢，認為Galectin-3參與甲狀腺乳頭狀癌細胞的黏附作用而影響其轉移。

CK19屬細胞角蛋白家族成員，常用于甲狀腺、肝膽胰腺系統(tǒng)及肺等部位腫瘤的病理診斷。研究[11]表明：CK19在PTC組織中多呈彌漫性強陽性表達，在非典型增生和濾泡癌中呈弱陽性或灶狀陽性表達，在濾泡上皮增生和正常甲狀腺組織多不表達。但以往對于Galectin-3和CK19的研究多限于甲狀腺乳頭狀癌的手術標本，在穿刺標本的應用一直少有報道[12]。

近年由于免疫組化技術水平的提高和臨床對術前穿刺活檢診斷要求的增加，本文作者應用免疫組化法對甲狀腺穿刺小標本進行了染色，36例甲狀腺良惡性病變標本Galectin-3、CK19以及Ki67均得到成功染色，發(fā)現(xiàn)Galectin-3和CK19在PTC組穿刺標本中的陽性率和染色強度均顯著高于BTL組，表明應用免疫組化方法檢測Galectin-3和CK19蛋白表達，可用于甲狀腺穿刺標本良惡性病變的鑒別診斷。而Ki67在2組表達率均較低，對良惡性病變沒有明顯的鑒別意義。

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