王新 （山東省濟(jì)南市長(zhǎng)清區(qū)平安獸醫(yī)站 250306） 邢兆苗 （山東省濟(jì)南市長(zhǎng)清區(qū)歸德獸醫(yī)站）

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豬病的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

王新 （山東省濟(jì)南市長(zhǎng)清區(qū)平安獸醫(yī)站 250306） 邢兆苗 （山東省濟(jì)南市長(zhǎng)清區(qū)歸德獸醫(yī)站）

1 豬的血尿診斷

1.1 尿中的潛血檢查

腎、膀胱及尿路的出血性疾病以及溶血性疾病，如豬瘟、豬丹毒、新生仔豬溶血病等，在其尿液中均含有血液或血紅蛋白，但若僅有少量，肉眼直接看不到，必須借助化學(xué)方法來(lái)測(cè)定。常用聯(lián)苯胺測(cè)定法。

1.1.1 原理 血紅蛋白中的鐵，具有過氧化物酶的作用，可分解過氧化氫放出氧，使聯(lián)苯胺氧化呈綠色或藍(lán)色。

1.1.2 試劑 （1）聯(lián)苯胺冰醋酸飽和液；（2）3%過氧化氫溶液。

1.1.3 測(cè)定方法 取被檢尿液3~5ml，置潔凈試管中煮沸，以破壞其他可能存在的過氧化物酶。冷卻后加入聯(lián)苯胺冰醋酸飽和液數(shù)滴，再加3%過氧化氫溶液數(shù)滴，混合，數(shù)秒鐘后即可呈現(xiàn)反應(yīng)。

1.1.4 結(jié)果判定 若供檢尿呈綠色或藍(lán)色，為陽(yáng)性反應(yīng)，顏色的深度(綠、藍(lán)綠、藍(lán)色、深藍(lán))，可表示反應(yīng)的強(qiáng)弱。若5min后仍不變色，則為陰性反應(yīng)。

1.2 糞中的潛血檢查

糞便中潛血陽(yáng)性，見于胃潰瘍、胃穿孔及胃腸道的出血性疾病。

1.2.1 原理與試劑 與尿的潛血檢查相同。

1.2.2 測(cè)定方法 取潔凈棉簽兩根，滴以生理鹽水，一支棉簽上涂糞，另一支作對(duì)照，均置酒精燈上加溫片刻，以破壞可能存在的幾種過氧化物酶。待冷，各加1%聯(lián)苯胺冰醋酸溶液及3%過氧化氫液各2滴，觀察顏色出現(xiàn)的快慢及深淺。

1.2.3 結(jié)果判定 如果涂糞棉簽呈藍(lán)色，而對(duì)照棉簽顏色不變，為陽(yáng)性反應(yīng)；假若兩支棉簽均呈藍(lán)色，為假陽(yáng)性反應(yīng)；若兩支棉簽均不變色，為陰性反應(yīng)。檢驗(yàn)結(jié)果，可按以下規(guī)定記錄：加試劑后立即出現(xiàn)深藍(lán)或深綠色者為最強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)。加試劑后初現(xiàn)淺藍(lán)色，0.5min內(nèi)漸現(xiàn)深藍(lán)或深綠色者，為強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)。

1.3 糞便的顯微鏡檢查

本法是借助顯微鏡觀察檢查糞便中的寄生蟲蟲卵和幼蟲，同時(shí)也可了解到被檢豬的消化能力和胃腸道有無(wú)炎癥病變。直接涂片法：取潔凈載玻片1片，先滴1大滴生理鹽水(若用50%甘油水溶液更好)，再以竹簽挑取被檢糞便少許，與載玻片上的生理鹽水混勻，涂成薄層，即可鏡檢。本法簡(jiǎn)便易行，常用于檢查糞便中有無(wú)寄生的蠕蟲卵，由于取糞量很少，檢出率較低，所以要求每個(gè)樣品多涂5~6片。若在涂片中同時(shí)見到多量的紅細(xì)胞和白細(xì)胞，則表示腸道有炎癥。

2 豬的血液常規(guī)檢查

血液常規(guī)檢查的項(xiàng)目有多種，但是目前用于豬病診斷的項(xiàng)目不多，常用的有血紅蛋白含量測(cè)定、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)等。必須指出的是，血液常規(guī)檢查僅僅是為臨診診斷提供一些數(shù)據(jù)，是一種輔助診斷手段，在操作時(shí)要嚴(yán)格遵循操作規(guī)程和注意事項(xiàng)，力求準(zhǔn)確，避免差錯(cuò)，同時(shí)應(yīng)與臨診檢查密切結(jié)合，才能得到正確的結(jié)論。

2.1 血紅蛋白含量測(cè)定

健康豬的血紅蛋白值為10.5g/100ml(變動(dòng)范圍9.5~ 12.0，若是血紅蛋白的含量增多，見于各種原因引起的血液濃縮，如劇烈的腹瀉、嘔吐、出大汗及某些中毒病。血紅蛋白含量降低，見于仔豬貧血及各種慢性消耗性疾病，如慢性豬瘟、仔豬蛔蟲病等

2.2 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)是將一定量供檢血經(jīng)一定倍數(shù)稀釋后，計(jì)算其一定容積內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)，并換算為每立方毫米血液的含量，健康豬的紅細(xì)胞數(shù)平均值為600萬(wàn)/m3(變動(dòng)范圍為500~700萬(wàn))。紅細(xì)胞增多，為血液濃縮，如脫水、出大汗、胸膜炎的滲出期等；紅細(xì)胞減少，為各類貧血性的疾病或慢性消耗性的疾病。計(jì)算按下列公式進(jìn)行：每立方毫米血液內(nèi)紅細(xì)胞總數(shù)=x/80×400(小方格總數(shù))×稀釋倍數(shù)×10。x為計(jì)數(shù)5個(gè)中方格(80個(gè)小方格)的紅細(xì)胞數(shù)。如血液稀釋200倍，為計(jì)算方便，也可將計(jì)數(shù)5個(gè)中方格(80個(gè)小方格)內(nèi)的紅細(xì)胞總數(shù)，乘以10000，即得每立方毫米血液內(nèi)的紅細(xì)胞總數(shù)。

2.3 白細(xì)胞計(jì)數(shù)

白細(xì)胞計(jì)數(shù)，對(duì)某些疾病的輔助診斷有重要的意義。多數(shù)細(xì)菌性感染和炎癥，都能使白細(xì)胞增多，如豬丹毒、肺炎、鏈球菌感染等。而一些病毒性的傳染病則能使白細(xì)胞減少，如豬瘟、流行性感冒等；某些嚴(yán)重疾病的后期，機(jī)體高度衰竭時(shí)，亦可見白細(xì)胞減少；長(zhǎng)期應(yīng)用某種藥物(如氯霉素)，也可引起白細(xì)胞減少。健康豬白細(xì)胞的平均值為13000個(gè)m3(變動(dòng)范圍為11000~16000個(gè))。方法：（1）取清潔、干燥的小試管1支，以0.5ml吸管準(zhǔn)確吸取白細(xì)胞稀釋液0.38ml，放入試管中。（2）稀釋血液。以血紅蛋白吸管準(zhǔn)確吸取供檢血液至20m3處，用干棉球擦去管尖外壁所附的血液，立即將被檢血吸入已裝稀釋液的試管底部，并吸取上清液反復(fù)洗凈沾在吸管內(nèi)壁上的血液數(shù)次，然后振搖試管1~2min，使血液與稀釋液充分混合，即可成為20倍稀釋的血液。（3）充液的步驟和操作，同紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。（4）計(jì)數(shù)的方法與紅細(xì)胞計(jì)數(shù)相同，但白細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)用低倍顯微鏡即可，計(jì)數(shù)四角處4個(gè)大方格(每個(gè)大方格包括16個(gè)中方格)內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)。

3 細(xì)菌的分離、培養(yǎng)和鑒定

豬的細(xì)菌性疾病種類很多，危害不小，常見的細(xì)菌病有仔豬黃痢、白痢、豬水腫病、副傷寒、豬丹毒、豬肺疫、鏈球菌病等，其中有的疾病可以一目了然(如仔豬黃痢、白痢等)，易于診斷，有些疾病則一時(shí)難以確診(如副傷寒、豬接觸傳染性胸膜肺炎等)，而更多的細(xì)菌病是并發(fā)或繼發(fā)感染的，為了做到及時(shí)、正確地診斷豬病，規(guī)模化的豬場(chǎng)有必要開展細(xì)菌的分離、培養(yǎng)和鑒定工作，同時(shí)還可將分離出的細(xì)菌，通過抑菌試驗(yàn)篩選出敏感性強(qiáng)、療效好的抗菌藥物進(jìn)行治療。掌握了細(xì)菌學(xué)的檢查技術(shù)，還可開展對(duì)豬舍消毒效果的測(cè)定，飲用水、飼料中的細(xì)菌學(xué)檢查等項(xiàng)工作。

化驗(yàn)室開展這項(xiàng)工作，需要一定的設(shè)備和條件，操作人員應(yīng)該具備獸醫(yī)微生物學(xué)的基本知識(shí)和實(shí)驗(yàn)室的操作技術(shù)、要求做到正確、熟練，其內(nèi)容包括病料的采集，細(xì)菌的分離培養(yǎng)，形態(tài)觀察，生化試驗(yàn)和動(dòng)物接種試驗(yàn)等。

4 藥物敏感試驗(yàn)

抗菌藥物在諸病防治上已得到了廣泛的使用，但是對(duì)某種抗菌藥物長(zhǎng)期或不合理地使用，可引起這些細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性。如果盲目地濫用抗菌藥物，不僅造成藥物的浪費(fèi)，同時(shí)也延誤了治療時(shí)機(jī)。藥物敏感試驗(yàn)，是一項(xiàng)藥物體外抗菌作用的測(cè)定技術(shù)，通過本試驗(yàn)，可選用最敏感的藥物進(jìn)行臨珍治療，同時(shí)也可根據(jù)這一原理，測(cè)定抗菌藥物的質(zhì)量，以防偽劣假冒產(chǎn)品的過期失效藥物進(jìn)入豬場(chǎng)。常用的藥敏感試驗(yàn)的方法有紙片法等三種，具體介紹一種：紙片法。各種抗菌藥物的紙片，市場(chǎng)有售，是一種直徑6mm的圓形小紙片，要注意密封保存，藏于陰暗干燥處，切勿受潮。注意有效期，一般不超6個(gè)月。

4.1 試驗(yàn)材料

經(jīng)分離和鑒定后的純培養(yǎng)菌株，營(yíng)養(yǎng)肉湯，瓊脂平皿，棉拭子，鑷子，酒精燈，藥敏紙片若干。

4.2 試驗(yàn)步驟

將測(cè)定菌株接種到營(yíng)養(yǎng)肉湯中，置37~c條件下培養(yǎng)12h，取出備用。用無(wú)菌棉蘸取上述菌液，均勻涂于瓊脂平皿上。待培養(yǎng)基表面稍干后，用無(wú)菌鑷子分別取所需的藥敏紙片均勻貼在培養(yǎng)基的表面，輕輕壓平。將培養(yǎng)皿置37℃溫箱12~18h后，測(cè)量各種藥敏紙片抑菌圈直徑的大小。

（2012–06–21）

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