孫秋艷 韓偉濤 王彩霞

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靈芝多糖對雞新城疫疫苗抗體滴度的影響

孫秋艷①韓偉濤②王彩霞①

（①山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院 山東 濰坊 261061 ②山東濰坊市海洋環(huán)境監(jiān)測中心）

90只14日齡公雞隨機(jī)均分成3組，用新城疫LaSota弱毒疫苗點(diǎn)眼滴鼻免疫的同時(shí)，2個(gè)試驗(yàn)組分別肌肉注射高、低劑量的靈芝多糖溶液，注射1次/d，連續(xù)注射3次，對照組注射生理鹽水。各組分別于免疫后7、14、21、28、35、42d翼下靜脈采血，分離血清，用微量血凝抑制(HI)測定新城疫抗體效價(jià)。結(jié)果表明，靈芝多糖高、低劑量組的HI抗體效價(jià)明顯高于對照組；靈芝多糖的高劑量組抗體效價(jià)明顯高于低劑量組；表明靈芝多糖對新城疫疫苗的抗體滴度有明顯的增強(qiáng)作用，靈芝多糖高劑量組對新城疫疫苗抗體滴度的增強(qiáng)作用更顯著。

靈芝多糖 新城疫疫苗 抗體滴度

目前的養(yǎng)禽生產(chǎn)中長期大量使用抗生素、雌性激素，但長期使用這樣的藥物帶來諸多弊端，如引起雞腸道菌群失調(diào)、耐藥株增多、免疫功能下降、畜產(chǎn)品中藥物殘留嚴(yán)重超標(biāo)等。所以天然、低毒、無藥物殘留的中藥成了醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域都是倍受關(guān)注的課題，近年來中藥活性成分的研究成為中獸藥的研究重點(diǎn)。許多中藥活性成分與疫苗合用，可以增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能和抗病能力[1、2，3]，使抗體在血液中或粘膜表面維持更長時(shí)間，發(fā)揮持久的免疫效果。大量研究表明，靈芝多糖(GLP)是一種良好的中藥活性成分，現(xiàn)代藥理學(xué)和臨床研究表明，GLP具有多種生理活性和藥理作用。GLP能顯著提高吞噬細(xì)胞的吞噬能力，增強(qiáng)體液免疫和細(xì)胞免疫功能[4,5,6,7]，還能提高紅細(xì)胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活性[8,9]，對人體有顯著的抗腫瘤作用、抗癌[10,11]作用。GLP還具有免疫調(diào)節(jié)作用、抗衰老作用[12]、降血糖作用、降血脂的作用、抗氧化作用[12]、保護(hù)肝臟[13]和鎮(zhèn)痛作用等[14,15]。本試驗(yàn)利用GLP的免疫調(diào)節(jié)作用，與新城疫LaSota弱毒疫苗配合使用，來探討靈芝多糖對雞新城疫疫苗免疫雞血清抗體滴度的影響，通過測定新城疫抗體效價(jià)和免疫器官指數(shù)的動(dòng)態(tài)變化，評價(jià)GLP糖對ND疫苗的免疫增強(qiáng)效果，旨在為開發(fā)中藥活性成分免疫增強(qiáng)劑提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 GLP的提取 靈芝購自山東省濰坊市藥材公司。按照常規(guī)水提醇沉法提?。簞⒂⒚返热薣11]稱取靈芝200g，研磨至粉末，加水2000ml，80℃水浴3h，重復(fù)4次。合并4次濾液3000r/min離心20min。所得上清液濃縮至1/5體積，濃縮液加入3倍量95%乙醇，過夜，棄上清，3000r/min離心20min，所得沉淀真空干燥，得GLP7.12g。使用前用雙蒸水配制成0.07g/ml和0.035g/ml，高壓滅菌，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 新城疫LaSota弱毒疫苗 購自齊魯動(dòng)物保健品有限公司，生產(chǎn)批號：150252007；新城疫標(biāo)準(zhǔn)抗原和陽性血清，由山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院防檢系微生物與傳染病試驗(yàn)室提供。

1.1.3 試驗(yàn)動(dòng)物 由山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院動(dòng)物飼養(yǎng)房提供1日齡海蘭褐公雞，隔離飼養(yǎng)至14日齡，試驗(yàn)期間的飼養(yǎng)管理按常規(guī)方法進(jìn)行。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組 海蘭褐公雞養(yǎng)至14日齡(平均母源抗體效價(jià)為4 log2，隨機(jī)分為3組，每組30只，分別用新城疫LaSota弱毒疫苗點(diǎn)眼滴鼻首免，3羽份/只，2個(gè)試驗(yàn)組為靈芝多糖的高(GLPH)、低(GLPL)劑量組，分別肌肉注射0.07g/ml和0.035g/ml的GLP，0.1ml/羽，1次/d，連續(xù)注射3d，對照組(Control)注射等量生理鹽水；28日齡每只頸部皮下注射新城疫LaSota弱毒疫苗二免。

1.2.2 雞新城疫HI抗體滴度的測定 于免疫后7、14、21、28、35、42d翼下靜脈采血0.5ml，2000r/min離心5min分離血清，用微量血凝抑制法測定雞新城疫HI抗體滴度。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理 所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和Duncan’s多重比較，以P=0.05為顯著水平。試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 GLP對新城疫抗體滴度的影響

見表1。與對照組相比，注射GLP的試驗(yàn)組產(chǎn)生抗體的速度要比對照組快，在免疫后第14d就能達(dá)到高水的抗體。所有注射GLP的試驗(yàn)組的抗體滴度均高于對照組，試驗(yàn)組在免疫后14、21、28、35、42d的同期抗體水平顯著高于對照組(P<0.05)，高劑量組的抗體水平顯著高于低劑量組(P<0.05)。免疫后第14d試驗(yàn)組的抗體滴度顯著高于對照組，免疫后第21d高劑量組抗體水平顯著高于低劑量組(P<0.05)，免疫28d所有組抗體滴度都達(dá)到最高峰值，免疫后42d所有組的抗體滴度都開始降低，試驗(yàn)組仍維持高水平的抗體。

注：同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)字母不同表示差異顯著(P<0.05)，字母相同表示差異不顯著(P>0.05)。

3 結(jié)論

體液免疫是機(jī)體抗御傳染病的主要因素之一，抗體是介導(dǎo)體液免疫的重要分子，抗體滴度的高低直接反應(yīng)機(jī)體的體液免疫狀態(tài)。在免疫后第7天GLP驗(yàn)組的抗體效價(jià)都高于對照組，但差異不顯著，其原因可能是由于GLP作為免疫增強(qiáng)劑作用于機(jī)體免疫器官幫助機(jī)體產(chǎn)生高水平的抗體需要一個(gè)過程。在免疫后14d試驗(yàn)組抗體水平均顯著高于對照組，說明GLP可以加快抗體的產(chǎn)生速度。在免疫后28d靈芝多糖試驗(yàn)?zāi)杲M的抗體效價(jià)達(dá)到最高峰，GLP高劑量組的抗體滴度為12.3Log2，比對照組高3.7 Log2，且從21d開始到第42d都維持高水平的抗體滴度；低劑量組的抗體滴度為11.3 Log2，比對照組高2.7 Log2，同高劑量組一直到第42d都維持高水平的抗體滴度，說明GLP能夠延長較高抗體滴度的維持時(shí)間，對雞新城疫疫苗的免疫效果有顯著的增強(qiáng)作用。在免疫后第21d開始高劑量組的抗體滴度顯著高于低劑量組，說明在一定限度內(nèi)，新城疫抗體滴度會(huì)隨著GLP的注射量的增加而增加。本試驗(yàn)結(jié)果表明，GLP不僅可以加快抗體的產(chǎn)生速度，還可以顯著提高機(jī)體產(chǎn)生抗體的水平，明顯改善機(jī)體的體液免疫機(jī)能。GLP在試驗(yàn)所選取的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)高劑量組比低劑量組的免疫增強(qiáng)效果好，為進(jìn)一步研究GLP的免疫增強(qiáng)效果提供了理論依據(jù)。

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（2012–04–19）

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