潘亞磊，翟遠(yuǎn)坤，武祥龍，梅其炳,2

(1.西北工業(yè)大學(xué)生命學(xué)院，陜西 西安 710072；2.第四軍醫(yī)大學(xué)藥理教研室，陜西 西安 710032)

杜仲(EucommiaulmoidesOliv.)，又名木棉(木草圖經(jīng))，為杜仲科杜仲屬多年生落葉喬木，我國(guó)特有的藥用植物，國(guó)家二級(jí)保護(hù)植物。杜仲活性成分在抗腫瘤、防治骨質(zhì)疏松、治療心腦血管疾病、抗衰老、增強(qiáng)免疫力、安胎等方面有著良好的功效[1]，因此，杜仲活性成分的提取及分離純化越來(lái)越受到人們的重視。

作者在此對(duì)杜仲活性成分的提取及分離純化方法進(jìn)行綜述，以期為杜仲活性成分的開(kāi)發(fā)與綜合利用提供幫助。

1 提取方法

1.1 水提法

水提法是以水為溶劑，大多輔以加熱等方式，從杜仲中提取易溶于水的成分(如綠原酸和多糖等極性較大的化合物)。

王茜等[2]比較了水、不同濃度乙醇、甲醇和丙酮水溶液等提取溶劑對(duì)杜仲葉綠原酸得率的影響，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)對(duì)綠原酸得率的主要影響因素進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，50 ℃水提綠原酸得率比較高，為1.06%，從而確定水作為綠原酸提取溶劑，在優(yōu)化條件下粗產(chǎn)品綠原酸得率為76.51%、純度為30.88%。魏銳等[3]利用響應(yīng)面分析法優(yōu)化了杜仲葉綠原酸的水提工藝，綠原酸的提取率達(dá)92.55%。董娟娥等[4]用10%的堿水在100 ℃下以提取過(guò)藥用有效成分后的杜仲葉為原料提取酸性多糖，并優(yōu)化了工藝條件。袁菊麗[5]用水超聲提取杜仲皮中多糖，以多糖含量和得率為指標(biāo)，優(yōu)化了提取工藝條件，杜仲皮多糖得率為1.72%。

水提法具有成本低、無(wú)污染、能耗少、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，但適用范圍較窄，對(duì)于不易溶于水的成分提取率低。

1.2 乙醇提取法

乙醇是一種良好的溶劑，通過(guò)調(diào)整乙醇和水的比例，可以滿足大多數(shù)活性成分的提取需要。

都國(guó)棟[6]用50%乙醇在pH值約為4、體系溫度為50 ℃的條件下，回流振蕩浸提杜仲葉2次，每次提取3 h，綠原酸提取率超過(guò)95%，浸膏提取率約43%，綠原酸含量28%。陳曉青等[7]研究發(fā)現(xiàn)，65%甲醇和72%乙醇對(duì)桃葉珊瑚苷的浸提效果最好，當(dāng)乙醇濃度高于72%時(shí)，浸提率下降，同時(shí)隨著提取劑濃度的增大，所提取溶液的顏色加深、粘度增大，給后處理帶來(lái)困難?？紤]到提取溶劑的毒性及生產(chǎn)成本，選擇72%乙醇作為提取溶劑。

乙醇提取法具有成本低、提取效率高、耗時(shí)短、清潔無(wú)污染、適用范圍廣、可提取杜仲中多種活性成分、溶劑容易回收、可重復(fù)利用等優(yōu)點(diǎn)。

1.3 超聲提取法

超聲提取法是利用超聲波的空化作用、機(jī)械作用、熱效應(yīng)等加快物質(zhì)分子運(yùn)動(dòng)頻率和速度，增大溶劑穿透力，從而提高目標(biāo)成分浸出率的方法[8]。

超聲作用可以改變植物的組織，破碎細(xì)胞，加速溶解有效成分，促進(jìn)擴(kuò)散和傳質(zhì)。超聲提取適用于多種天然植物有效成分的提取，如生物堿、萜類(lèi)化合物、黃酮化合物、脂質(zhì)和揮發(fā)油等[9]。鄧翀等[10]以甲醇和水為溶劑，采用超聲法對(duì)杜仲葉中總木脂素進(jìn)行提取，并通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)對(duì)超聲提取時(shí)間、甲醇濃度、溶劑用量等3個(gè)因素進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲提取時(shí)間影響顯著，優(yōu)化條件下的木脂素平均含量達(dá)0.8843%。陳偉[11]通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確定超聲浸提杜仲葉中綠原酸的最佳工藝條件為：乙醇濃度30%、提取時(shí)間30 min、料液比1∶25、提取次數(shù)3次，綠原酸含量達(dá)到0.4113%；超聲浸提杜仲葉中總黃酮的最佳工藝條件為：乙醇濃度50%、提取時(shí)間20 min、料液比1∶20、提取次數(shù)3次，總黃酮含量達(dá)到1.4639%。齊惠麗[12]采用水提法、醇提法和超聲法提取杜仲葉中綠原酸，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，超聲法得率最高、溶劑用量最少、提取時(shí)間最短。

超聲法具有省時(shí)、節(jié)能、高效等優(yōu)點(diǎn)，并且提取中無(wú)加熱過(guò)程，因此可避免加熱引起的藥物成分結(jié)構(gòu)變化，能用于熱敏性成分的提取[13]。

1.4 微波提取法

微波又稱超高頻率電磁波，是一種波長(zhǎng)在1～1000 mm(相對(duì)頻率為300～300 000 MHz)的電磁波。微波提取技術(shù)主要是基于微波具有的熱特性，可以使物料被加熱，從而促進(jìn)有效成分的溶出。加熱原理主要有兩個(gè)方面：一方面是通過(guò)介電損耗，具有永久偶極的分子在2450 MHz的電磁場(chǎng)中產(chǎn)生共振頻率，使分子高速旋轉(zhuǎn)，平均動(dòng)能迅速增加，從而升高溫度；另一方面是通過(guò)離子傳導(dǎo)，離子化的物質(zhì)在超高頻的電磁場(chǎng)中超高速運(yùn)動(dòng)，因摩擦產(chǎn)生熱效應(yīng)[14]。高頻電磁波到達(dá)物料內(nèi)部后，由于吸收微波能，物料內(nèi)溫度迅速升高，細(xì)胞瞬時(shí)破碎，被提取物進(jìn)入提取介質(zhì)中，從而提高提取效率[15]。

Li等[16]應(yīng)用二元正交分析法對(duì)微波輔助水提杜仲中京尼平苷酸和綠原酸的提取時(shí)間、微波功率、溶劑用量和溶劑組成等條件進(jìn)行了優(yōu)化，京尼平苷酸和綠原酸的提取時(shí)間分別為40 s和30 s，大大縮短了提取時(shí)間。陳偉[11]應(yīng)用微波輔助法提取杜仲葉中綠原酸和總黃酮，確定微波浸提杜仲葉中綠原酸的最佳工藝條件為：乙醇濃度70%、提取時(shí)間25 min、料液比1∶30、微波功率600 W，綠原酸含量達(dá)到0.3425%；微波浸提杜仲葉中總黃酮的最佳工藝條件為：乙醇濃度50%、提取時(shí)間25 min、料液比1∶30、微波功率400 W，總黃酮含量達(dá)到0.7672%。彭密軍[17]將微波提取技術(shù)應(yīng)用于杜仲活性成分提取，同時(shí)與常規(guī)浸提、超聲波提取等方法進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)微波提取效果最佳。

微波提取法具有提取時(shí)間短、效率高、溶劑消耗量少、易于操作、節(jié)能、無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物中有效成分的提取[18]。

1.5 酶提取法

酶是一種生物反應(yīng)催化劑，具有高效性、專(zhuān)一性和反應(yīng)條件溫和的特點(diǎn)。在藥用植物有效成分提取過(guò)程中，當(dāng)存在于細(xì)胞原生質(zhì)體中的有效成分向提取介質(zhì)擴(kuò)散時(shí)，必須克服細(xì)胞壁及細(xì)胞間質(zhì)的雙重阻力，應(yīng)用纖維素酶作用于藥用植物材料，使細(xì)胞壁及細(xì)胞間質(zhì)中的纖維素、半纖維素等物質(zhì)降解，減小細(xì)胞壁、細(xì)胞間質(zhì)等傳質(zhì)屏障對(duì)有效成分從胞內(nèi)向提取介質(zhì)擴(kuò)散的傳質(zhì)阻力，從而提高有效成分提取率[19]。

彭小文[20]考察了纖維素酶、果膠酶以及兩者混合對(duì)綠原酸提取率的影響，結(jié)果顯示，綠原酸提取率隨著酶量的增加而上升，當(dāng)纖維素酶加量為0.02%時(shí)提取率達(dá)到最高，但此后再增加酶量，提取率不再升高；優(yōu)化酶作用的溫度、pH值、時(shí)間等條件后，綠原酸的提取率穩(wěn)定在92.0%左右。袁靜等[21]采用分步添加纖維素酶和果膠酶的方法提取綠原酸，先在pH值為5、溫度為45 ℃時(shí)加入纖維素酶作用10 min，然后在pH值為4、溫度為55 ℃時(shí)加入果膠酶作用10 min，最后用水提取杜仲葉中綠原酸，處理并重結(jié)晶后得到純品，結(jié)果表明雖然酶法比傳統(tǒng)方法粗產(chǎn)品產(chǎn)量少，但由于其中雜質(zhì)含量低，綠原酸含量提高5.7%，綠原酸提取率也提高2.4%。Luo等[22]研究發(fā)現(xiàn)，酶法提取杜仲葉中抗氧化成分比水提法效率更高，酶提取法是替代常規(guī)方法的一種有效方法。

酶提取法具有提取時(shí)間短、提取率高、雜質(zhì)含量低、無(wú)溶劑殘留、所需設(shè)備簡(jiǎn)單、可操作性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。酶反應(yīng)在較溫和的條件下將植物組織分解，使有效成分暴露出來(lái)，較大幅度地提高了藥物有效成分的提取率和純度[23]，且其溫和的反應(yīng)條件有利于保持提取物的生物活性，在熱敏性物質(zhì)提取中具有獨(dú)特的應(yīng)用。但酶法目前在杜仲有效成分提取中的應(yīng)用較少。

1.6 超臨界CO2流體萃取法

超臨界流體指處于臨界溫度和臨界壓力以上的流體。CO2由于適中的臨界條件、無(wú)毒、無(wú)燃爆危險(xiǎn)等優(yōu)點(diǎn)成為最常用的超臨界流體[24]。超臨界流體萃取(Supercritical fluid extraction，SFE)是利用超臨界條件下的液體作為萃取劑，從液體或固體中萃取出特定成分的技術(shù)[25]。

李秋紅等[26]應(yīng)用超臨界CO2流體提取杜仲葉中總黃酮，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確定最佳工藝為：萃取時(shí)間2.5 h、壓力300 MPa、溫度45 ℃、夾帶劑(乙醇)用量3.5 mL·g-1，在此條件下，總黃酮提取率為73.26%、純度為19.82%。麻成金等[27]將超臨界CO2流體萃取應(yīng)用于杜仲籽油的提取中，并與常規(guī)溶劑(石油醚)提取、微波提取進(jìn)行了比較，認(rèn)為超臨界CO2流體萃取所得杜仲籽油的品質(zhì)最優(yōu)，是提取優(yōu)質(zhì)杜仲籽油的首選方法。此外，Li等[28]應(yīng)用超臨界CO2流體萃取桃葉珊瑚苷也取得了良好效果。

超臨界CO2流體萃取法工藝簡(jiǎn)單、效率高，可以在近常溫的條件下提取分離，產(chǎn)物容易進(jìn)一步分離，對(duì)于提取分離脂溶性物質(zhì)、揮發(fā)性成分和高熱敏性物質(zhì)等有效成分具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)[27,28]。但是該法對(duì)設(shè)備的要求及能耗相對(duì)較高，從而限制了其廣泛應(yīng)用。

2 分離純化方法

2.1 溶劑萃取法

溶劑萃取法通常依據(jù)相似相溶的原理選擇溶劑，利用物質(zhì)在兩種不互溶(或微溶)溶劑中溶解度或分配比的不同來(lái)達(dá)到分離或純化的目的。溶劑萃取法易受到溶劑極性大小、pH值、提取溫度、提取次數(shù)、溶劑用量和樣品粒度等多種因素的影響[29]。柳娜等[30]對(duì)杜仲中木脂素類(lèi)化合物純化工藝進(jìn)行了研究，將溶劑萃取作為初級(jí)純化，即先用乙酸乙酯萃取浸提液3次以除去部分雜質(zhì)，再用正丁醇萃取乙酸乙酯萃余液2次，合并正丁醇的萃取液，減壓蒸餾濃縮再進(jìn)行后續(xù)純化。

近年來(lái)發(fā)展的雙水相體系萃取在杜仲活性成分的分離純化中也得到了應(yīng)用，當(dāng)物質(zhì)進(jìn)入雙水相體系后，由于表面性質(zhì)、電荷作用和各種力(如憎水鍵、氫鍵和離子鍵等)的存在和環(huán)境的影響，使其在上、下相中的濃度不同。對(duì)于某一物質(zhì)，只要選擇合適的雙水相體系，控制一定的條件，就可以得到合適的分配系數(shù)，從而達(dá)到分離純化的目的[31]。彭勝等[32]建立了一種由聚乙二醇與葡聚糖形成的雙水相體系萃取分離杜仲葉中桃葉珊瑚苷的新方法，桃葉珊瑚苷純度達(dá)到48.67%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于粗提物中的8.75%。

溶劑萃取法具有應(yīng)用范圍廣、操作簡(jiǎn)單、萃取溶劑可以回收再利用的特點(diǎn)，但萃取所得某一相中仍然含有多種性質(zhì)類(lèi)似的化合物，更適合杜仲中活性物質(zhì)的初級(jí)分離。

2.2 大孔樹(shù)脂色譜法

大孔吸附樹(shù)脂具有很大的比表面積，是吸附性和分子篩性原理相結(jié)合的分離材料，一方面通過(guò)分子間作用力(范德華引力或氫鍵)對(duì)被吸附的分子進(jìn)行吸附;另一方面樹(shù)脂具有一定的孔徑，不同分子大小的化合物經(jīng)過(guò)樹(shù)脂柱時(shí)，又起到一定的分子篩作用，從而達(dá)到良好的分離效果[33]。

陳偉[11]通過(guò)靜態(tài)吸附分離實(shí)驗(yàn)和動(dòng)態(tài)分析篩選出HPD600為純化綠原酸和總黃酮的最優(yōu)材料。此外，XAD-5和NKA-2型大孔樹(shù)脂在杜仲綠原酸的分離中也具有較好的效果[6,34]。曹慧[35]經(jīng)萃取和吸附除雜后選擇A型大孔吸附樹(shù)脂純化杜仲中京尼平苷和京尼平苷酸，總收率分別達(dá)到84.15%和73.49%。戚向陽(yáng)等[36]采用D101型樹(shù)脂有效吸附分離杜仲皮中的雙環(huán)氧木脂素二糖苷，將上樣液pH值調(diào)至10～12,分別用水、30%乙醇進(jìn)行洗脫，收集30%乙醇洗脫液并進(jìn)行濃縮和真空干燥，粗提物的產(chǎn)率為1.74%,其松脂醇二葡萄糖苷(PG)和丁香脂醇二葡萄糖苷(SG)含量分別為8.1397%和2.9431%。李輝等[37]用HZ-820型樹(shù)脂進(jìn)行柱層析分離純化桃葉珊瑚苷，重結(jié)晶后純度高達(dá)96.82%。

大孔樹(shù)脂色譜法具有選擇性好、吸附量大、效率高、易洗脫、再生容易和成本低等優(yōu)點(diǎn)，特別適用于水溶性化合物的分離純化。在杜仲木脂素、環(huán)烯醚萜、皂苷、黃酮、綠原酸等的純化中應(yīng)用廣泛，效果好。

2.3 硅膠色譜法

硅膠色譜法是根據(jù)物質(zhì)在硅膠上的吸附性不同而使物質(zhì)得到分離，一般情況下極性較大的物質(zhì)易被硅膠吸附，極性較小的物質(zhì)不易被硅膠吸附，整個(gè)過(guò)程就是吸附、解吸、再吸附、再解吸的分離過(guò)程[33]。

曹慧等[38]采用硅膠色譜法分離環(huán)烯醚萜類(lèi)化合物，采用干法上硅膠柱，用不同配比的氯仿和甲醇混合液洗脫，同時(shí)用高效液相色譜法跟蹤檢測(cè)，所得京尼平苷酸和京尼平苷的純度分別達(dá)到98.69%和96.54%。柳娜等[30]采用硅膠色譜法同時(shí)分離純化杜仲中松脂醇二葡萄糖苷和丁香脂醇二葡萄糖苷，純度分別為90.86%和91.73%。李輝等[39]采用硅膠色譜法從杜仲粕中分離純化桃葉珊瑚苷，經(jīng)重結(jié)晶后可獲純度為96.56%的產(chǎn)品。

硅膠色譜法在杜仲中木脂素類(lèi)、環(huán)烯醚萜類(lèi)和苷類(lèi)化合物的分離中應(yīng)用較廣，一般采用梯度洗脫結(jié)合高效液相色譜等先進(jìn)檢測(cè)手段可以得到較純化合物。但是硅膠色譜法周期一般較長(zhǎng)，硅膠也不易再生。

2.4 制備型高效液相色譜法

制備型高效液相色譜(PHPLC)克服了傳統(tǒng)的分析型高效液相色譜分離樣品量少的缺點(diǎn)，使產(chǎn)品的分離量達(dá)到克數(shù)量級(jí)及以上，并最終實(shí)現(xiàn)了工業(yè)化[40]。戚向陽(yáng)等[36]對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理后，再經(jīng)PHPLC分離純化和重結(jié)晶，得到松脂醇二葡萄糖苷和丁香脂醇二葡萄糖苷白色結(jié)晶，純度達(dá)到色譜純。彭密軍等[41]采用PHPLC法，以乙醇-水-乙酸為流動(dòng)相、選用臺(tái)階梯度洗脫方式同時(shí)制備了京尼平苷酸、京尼平苷、桃葉珊瑚苷等3種環(huán)烯醚萜類(lèi)成分。

制備型高效液相色譜法具有柱效高、分離速度快等特點(diǎn)，是制備純化天然產(chǎn)物和化學(xué)合成產(chǎn)物的極好手段，在醫(yī)藥工業(yè)、生化技術(shù)和精細(xì)化學(xué)品的生產(chǎn)中已有重要的應(yīng)用[41,42]。但制備型高效液相色譜法只適用于純度較高、成分較單一的一種或幾種物質(zhì)的純化，對(duì)樣品要求較高，否則很難達(dá)到良好的分離度。

2.5 其它分離純化方法

凝膠色譜法、制備薄層色譜法、膜過(guò)濾和新材料技術(shù)在杜仲活性成分的分離純化中也有應(yīng)用。

凝膠色譜法是根據(jù)分子篩效應(yīng)對(duì)不同分子量的化合物實(shí)現(xiàn)分離，張玲等[43]以凝膠色譜法從杜仲葉中分離得到4種組分，純度均超過(guò)95%，但目前凝膠填料較貴。程德軍等[44]通過(guò)兩次制備薄層色譜得到的綠原酸純度超過(guò)91.6%，所建立的純化制備方法簡(jiǎn)便、直觀，對(duì)綠原酸有很好的分離效果，適合于數(shù)百毫克級(jí)到克級(jí)的制備。彭小文[20]以微濾膜和納濾膜處理綠原酸水提液后，有利于后續(xù)分離純化。Li等[45]應(yīng)用新型分離材料分子印跡聚合物對(duì)綠原酸進(jìn)行分離純化，取得了良好效果。

3 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，杜仲中不同類(lèi)活性成分提取和分離純化可采用相同的方法，而同一類(lèi)化合物又可以采用不同方法進(jìn)行提取和分離純化。為全面開(kāi)發(fā)杜仲活性成分，針對(duì)杜仲活性成分提取和分離純化方法，提出如下幾點(diǎn)建議：(1)采用微波或超聲波輔助乙醇進(jìn)行提取，提取過(guò)程中先用低濃度的乙醇，然后定時(shí)加入乙醇，逐步增大乙醇濃度，可達(dá)到高效充分提取各活性成分的目的。(2)提取液濃縮后采用不同極性有機(jī)溶劑依次萃取，進(jìn)行除雜和初步分離，有利于后續(xù)純化。(3)木脂素類(lèi)、環(huán)烯醚萜類(lèi)和苷類(lèi)化合物的分離既可以采用大孔樹(shù)脂色譜法也可以采用硅膠色譜法，應(yīng)優(yōu)先選擇大孔樹(shù)脂色譜法。(4)大孔吸附樹(shù)脂可同時(shí)分離多種化合物，應(yīng)用乙醇梯度洗脫法，分別收集各梯度洗脫液進(jìn)行鑒定和后續(xù)純化。(5)應(yīng)用高效液相色譜或者制備型高效液相色譜等現(xiàn)代檢測(cè)純化工具，收集相同組分，可達(dá)到事半功倍的效果。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李竹，晏媛，李青.杜仲的藥理活性研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥事，2004，18(2)：131-132.

[2] 王茜，李智，何琦，等.杜仲葉中綠原酸提取分離工藝條件的研究[J].離子交換與吸附，2008，24(1)：73-80.

[3] 魏銳，田惠玲，周建軍，等.響應(yīng)面分析法優(yōu)化杜仲葉中綠原酸水提工藝[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39(7)：3965-3967，3970.

[4] 董娟娥，梁宗鎖，靳愛(ài)仙，等.杜仲葉酸性多糖提取分離及含量測(cè)定[J].林業(yè)科學(xué)，2006，42(10)：59-64.

[5] 袁菊麗.超聲提取杜仲多糖的工藝優(yōu)化[J].應(yīng)用化工，2011，40(5)：817-818.

[6] 都國(guó)棟.杜仲葉中綠原酸的提取、分離純化工藝研究[D].貴陽(yáng)：貴州大學(xué)，2006.

[7] 陳曉青，賀前鋒，曹慧，等.杜仲皮中桃葉珊瑚甙的提取及純化[J].中南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2005，36(1)：60-64.

[8] 張濤，王桂清.植物源抑菌殺菌物質(zhì)提取方法研究進(jìn)展[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011,(13):59-62.

[9] 姜紅波.植物有效成分提取方法的研究[J].應(yīng)用化工，2011，40(3):528-530,534.

[10] 鄧翀，顏永剛，楊乖利，等.正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化杜仲總木脂素提取工藝[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2011，18(8)：45-46.

[11] 陳偉.杜仲葉片綠原酸、總黃酮的提取分離純化技術(shù)研究[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

[12] 齊惠麗.杜仲葉中綠原酸提取工藝研究[D].天津：天津大學(xué)，2007.

[13] 鐘玲，尹蓉莉，張仲林.超聲提取技術(shù)在中藥提取中的研究進(jìn)展[J].西南軍醫(yī)，2007，9(6)：84-86.

[14] 韓麗.實(shí)用中藥制劑新技術(shù)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002：148-149.

[15] 高虹，谷文英，丁霄霖.利用微波輔助提取測(cè)定姬松茸中麥角甾醇含量[J].浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版)，2007，33(1)：113-118.

[16] Li Hui，Chen Bo，Zhang Zhaohui，et al.Focused microwave-assisted solvent extraction and HPLC determination of effective constituents inEucommiaulmodiesOliv.(E.ulmodies)[J].Talanta，2004，63(3)：659-665.

[17] 彭密軍.杜仲中高純活性成分的分離制備新工藝研究[D].長(zhǎng)沙：中南大學(xué)，2004.

[18] Spigno G，De Faveri D M.Microwave-assisted extraction of tea phenols：A phenomenological study[J].Journal of Food Engineering，2009，93(2)：210-217.

[19] 張樹(shù)政．酶制劑工業(yè)[M]．北京：科學(xué)出版社，1984：65-80．

[20] 彭小文.膜分離集成樹(shù)脂技術(shù)制取杜仲綠原酸的工藝研究[D].武漢：湖北工業(yè)大學(xué)，2010.

[21] 袁靜，毛建.酶法提取杜仲葉中綠原酸的實(shí)驗(yàn)研究[J].四川師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2007，30(5)：657-659.

[22] Luo Jiyang，Tian Chengrui，Xu Jianguo，et al.Studies on the antioxidant activity and phenolic compounds of enzyme-assisted water extracts from Du-zhong (EucommiaulmoidesOliv.) leaves[J].Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry，2009，24(6)：1280-1287.

[23] Jones N M,Bernardo-Gil M G,Lourenco M G.Comparison of methods for extraction of tobacco alkaloids[J].J AOAC Int，2001，84(2):309-316.

[24] Johnston K P，Harrison K L，Clarke M J，et al．Water-in-carbon dioxide microemulsions:An environment for hydorophiles including proteins[J]．Science，1996，271(5249)：624-627.

[25] Turner C，Eskilsson C S，Bjorklund E.Collection in analytical-scale supercritical fluid extraction[J].Journal of Chromatography A，2002，947(1)：1-22.

[26] 李秋紅，羅莉萍，葉文峰.超臨界CO2萃取杜仲葉總黃酮的研究[J].食品科學(xué)，2006，27(12):553-555.

[27] 麻成金，張永康，馬美湖，等.微波和超臨界CO2萃取杜仲籽油工藝研究[J].食品科學(xué)，2006，27(6)：131-135.

[28] Li Hui，Hu Jiangyu，Yang Huiou，et al.Extraction of aucubin from seeds ofEucommiaulmoidesOliv. using supercritical carbon dioxide[J].Journal of AOAC International，2009，92(1)：143-150.

[29] 汪茂田，謝培山，王忠東，等．天然有機(jī)化合物提取分離與結(jié)構(gòu)鑒定[M]．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004:54-57．

[30] 柳娜，陳曉青，杜暉，等.杜仲中木脂素類(lèi)化合物純化工藝研究[J].化學(xué)通報(bào)，2006，69(4)：302-305.

[31] 徐長(zhǎng)波，王巍杰．雙水相萃取技術(shù)研究進(jìn)展[J]．化工科技，2009，17(2)：75-79．

[32] 彭勝，彭密軍，卜曉英，等.雙水相體系萃取分離杜仲葉中桃葉珊瑚甙的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2010，22(2)：264-267.

[33] 谷成燕.AB-8大孔樹(shù)脂與硅膠柱層析分離姜酚的對(duì)比[D].濟(jì)南：山東大學(xué)，2009.

[34] 盧琪，段家彩，高麗，等.杜仲綠原酸的分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定[J].食品科學(xué)，2010，31(14)：275-279.

[35] 曹慧.杜仲中降壓活性成分的分離和表征研究[D].長(zhǎng)沙：中南大學(xué)，2005.

[36] 戚向陽(yáng)，陳維軍，張聲華.杜仲中雙環(huán)氧木脂素二糖苷分離純化技術(shù)的研究[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè),2005，25(4)：47-50.

[37] 李輝，文赤夫，李亞男，等.杜仲粕中桃葉珊瑚苷的分離和純化[J].食品科學(xué)，2011，32(2)：32-35.

[38] 曹慧，陳曉青，肖建波，等.杜仲中京尼平甙酸的硅膠柱色譜分離純化及反相高效液相色譜/液相色譜-電噴霧質(zhì)譜/核磁共振鑒定[J].色譜，2005，23(5)：534-537.

[39] 李輝，汪蘭，彭玉丹，等.硅膠柱層析法分離純化杜仲粕中桃葉珊瑚苷[J].食品科學(xué)，2010，31(14)：58-61.

[40] 楊振寰，劉霞.制備高效液相色譜在天然產(chǎn)物分離中的應(yīng)用[J].中成藥，2005，27(12)：1444-1448.

[41] 彭密軍，周春山，董朝青，等.制備液相色譜-臺(tái)階梯度法分離純化杜仲中三種環(huán)烯醚萜化合物[J].色譜，2004，22(2)：184.

[42] Puri S，Handa G，Kalsotra A K，et al.Preparative high-performance liquid chromatographic separation of naphthodianthrones from St.John′s Wort[J].Journal of Chromatographic Science，2006，44(4)：177-180.

[43] 張玲，劉青梅，楊性民，等.杜仲葉綠原酸總黃酮的分離純化及檢測(cè)[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009,(12)：122-125.

[44] 程德軍，梁冰，董海英,等.兩次制備薄層色譜分離純化杜仲葉中的綠原酸[J].西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2007，33(3)：542-545.

[45] Li Hui，Liu Yingju，Zhang Zhaohui，et al.Separation and purification of chlorogenic acid by molecularly imprinted polymer monolithic stationary phase[J].Journal of Chromatography A,2005,1098(1-2)：66-74.