張 淼，董寶婧，苗 芳，周 樂(lè)

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，陜西 楊凌712100； 2.西北農(nóng)林科技大學(xué)農(nóng)學(xué)院，陜西 楊凌712100； 3.西北農(nóng)林科技大學(xué)理學(xué)院，陜西 楊凌712100)

自由基可攻擊生命大分子造成組織損傷，從而導(dǎo)致疾病與衰老。所以，尋找適當(dāng)?shù)耐庠葱钥寡趸瘎宄w內(nèi)自由基，對(duì)治療疾病和保護(hù)人體健康大有裨益。近年來(lái)，研發(fā)高效、低毒的天然抗氧化劑和抗衰老保健品，已成為新的研究熱點(diǎn)之一[1]。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)材料 2010年7月底，在秦嶺采集夏枯草全草，陰干后,粉碎,裝袋備用。

1.2夏枯草不同溶劑提取物的制備 取夏枯草全草粗粉40 g，以70%乙醇，料液比為1∶20，45 ℃條件下進(jìn)行超聲提取2 h，提取3次，合并提取液，減壓濃縮。加石油醚去除葉綠素后，依次用等體積的乙酸乙酯、正丁醇和水萃取，每級(jí)重復(fù)3次，得到乙酸乙酯、正丁醇和水提取物。

1.3夏枯草不同溶劑提取物抗氧化活性測(cè)定 抗氧化活性測(cè)定所用的2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)購(gòu)于上海阿拉丁試劑有限公司；酚嗪硫酸甲酯(PMS)、1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基(DPPH·)購(gòu)于美國(guó)Sigma公司；氮藍(lán)四唑(NBT)、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.4數(shù)據(jù)處理 采用SPSS V13.0和Excel軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析。

2 結(jié)果與分析

2.1夏枯草不同溶劑提取物對(duì)DPPH·的清除活性 夏枯草不同溶劑提取物對(duì)DPPH·均有清除能力，且在一定濃度范圍內(nèi)清除能力與濃度呈正相關(guān)。當(dāng)提取物濃度達(dá)到一定值后，隨著濃度的增加，對(duì)DPPH·的清除活性增加逐漸緩慢或趨于平緩。夏枯草3種溶劑提取物相比較，乙酸乙酯提取物對(duì)DPPH·的清除活性最強(qiáng)(IC50=0.154 mg·mL-1)，強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照BHT提取物(IC50=0.311 mg·mL-1)，正丁醇提取物的清除能力弱于乙酸乙酯提取物(IC50=0.204 mg·mL-1)，但也強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照BHT提取物，水提物清除活性(IC50=0.402 mg·mL-1)略弱于BHT提取物(圖1)。夏枯草3種溶劑提取物及陽(yáng)性對(duì)照BHT清除DPPH·的能力由強(qiáng)到弱依次為乙酸乙酯提取物>正丁醇提取物>BHT提取物>水提取物。

2.2夏枯草不同溶劑提取物對(duì)·OH的清除活性 夏枯草不同溶劑提取物都具有清除·OH的活性，且清除能力與濃度呈正相關(guān)。在正丁醇提取物、乙酸乙酯提取物和BHT提取物中，乙酸乙酯提取物的清除能力最強(qiáng)，在濃度為0.6 mg·mL-1時(shí)清除活性就已達(dá)到88.37%，正丁醇提取物活性稍差于乙酸乙酯提取物，在濃度為0.7 mg·mL-1時(shí)清除活性達(dá)到85.24%(圖2)，而水提物對(duì)·OH的清除活性較弱，在0.3～0.7 mg·mL-1范圍內(nèi)清除活性不及10%(圖2)。夏枯草3種溶劑提取物及陽(yáng)性對(duì)照BHT清除·OH的活性由強(qiáng)到弱依次為BHT提取物(IC50=0.266 mg·mL-1)>乙酸乙酯提取物(IC50=0.406 mg·mL-1)>正丁醇提取物(IC50=0.538 mg·mL-1)>水提物(IC50=1.244 mg·mL-1)。

圖1 夏枯草不同溶劑提取物對(duì)DPPH·清除活性Fig.1 DPPH·radical-scavenging activity of different extracts of Prunella vulgaris

圖2 夏枯草不同溶劑提取物對(duì)·OH的清除活性Fig.2 Hydroxyl radical-scavenging activity of different extracts of Prunella vulgaris

圖3 夏枯草不同溶劑提取物對(duì)的清除活性Fig.3 Superoxide radical-scavenging activity of different extracts of Prunella vulgaris

2.4夏枯草不同溶劑提取物的還原力 夏枯草不同溶劑提取物均具有還原力，且與提取物濃度呈劑量依賴(lài)關(guān)系。3種提取物相比較，乙酸乙酯提取物的還原能力最強(qiáng)，正丁醇提取物次之,水提物較差。各提取物還原力均低于陽(yáng)性對(duì)照BHT提取物。夏枯草3種溶劑提取物及陽(yáng)性對(duì)照BHT提取物還原力由強(qiáng)到弱依次為BHT提取物>乙酸乙酯提取物>正丁醇提取物>水提物(圖4)。

圖4 夏枯草不同溶劑提取物的還原力Fig.4 Reducing power of different extracts of Prunella vulgaris

3 討論

本研究采用4種評(píng)價(jià)方法對(duì)夏枯草不同溶劑提取物抗氧化活性進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，夏枯草提取物具有良好的抗氧化活性。但由于抗氧化反應(yīng)機(jī)制不同，不同評(píng)價(jià)方法中各提取物可能表現(xiàn)出不同的抗氧化活性。Su等[13]采用多方法體系對(duì)4種草藥提取物的抗氧化活性進(jìn)行評(píng)估發(fā)現(xiàn)，各方法測(cè)定結(jié)果有所差異，這種差異性主要表現(xiàn)在提取物具有良好的DPPH·清除活性和亞鐵離子螯合活性，但還原能力較差。Chen等[14]從黑靈芝(Ganodermaatrum)子實(shí)體中提取并純化出一種活性多糖，用多體系對(duì)其抗氧化活性進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)此種多糖在不同體系中均表現(xiàn)較高活性，從而證明其有顯著抗氧化活性。馬小媛和錢(qián)衛(wèi)平[15]認(rèn)為，單一的檢測(cè)方法不能夠綜合評(píng)價(jià)某種物質(zhì)的抗氧化能力?？梢?jiàn)，有必要采用多體系綜合評(píng)價(jià)有效物質(zhì)的抗氧化活性。綜合本研究各測(cè)定結(jié)果，夏枯草不同溶劑提取物在一定濃度范圍內(nèi)，其抗氧化活性與有效物質(zhì)濃度呈正相關(guān)，但當(dāng)提取物達(dá)到一定濃度后，便不再表現(xiàn)出更高的抗氧化能力，這是由于自由基消耗殆盡或反應(yīng)趨于平衡。所以，抗氧化體系中抗氧化劑濃度的選用應(yīng)考慮到實(shí)際條件和底物濃度，參照生物體內(nèi)自由基濃度范圍，使評(píng)價(jià)更有實(shí)際意義。

夏枯草乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物的抗氧化活性較強(qiáng)，尤其是乙酸乙酯提取物，這可能與夏枯草中黃酮類(lèi)物質(zhì)有關(guān)。有國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，黃酮類(lèi)物質(zhì)具有很強(qiáng)的抗氧化能力。Kodama等[16]認(rèn)為，黃酮類(lèi)化合物兒茶素是綠茶中最主要的抗氧化成分。吳曉寧等[17]研究表明，烏蕨(Stenolomachusanum)黃酮類(lèi)物質(zhì)具有顯著的還原力、抗脂質(zhì)體氧化和清除自由基等作用。Bergman等[18]對(duì)菠菜(Spinaciaoleracea)水提物中的黃酮類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行研究分析，證實(shí)它有比一般人工抗氧化劑強(qiáng)的抗氧化能力。此外，王川等[19]證實(shí)夏枯草黃酮對(duì)豬油有抗氧化作用。但目前對(duì)夏枯草抗氧化物質(zhì)研究較少，尚不能確定其種類(lèi)及結(jié)構(gòu)，需要進(jìn)一步對(duì)各部分的成分進(jìn)行深入研究。

夏枯草提取物具有良好的抗氧化活性，加之植物藥的天然低毒性，有開(kāi)發(fā)為天然抗氧化劑和抗衰老保健品的潛力，具有廣泛的發(fā)展前景。

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