包海蘭，梁靚靚，陳蘇寧

功能性消化不良(Functional dyspepsia，F(xiàn)D)是一種常見的功能性胃腸疾病，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前尚未完全明確［1］，以往研究表明，本病與胃腸運(yùn)動(dòng)障礙、內(nèi)臟敏感性增高、胃腸激素和神經(jīng)遞質(zhì)變化、自主神經(jīng)功能失調(diào)、精神社會心理因素、幽門螺桿菌(HP)感染、胃酸、性激素、遺傳基因等諸多因素相關(guān)［2－3］。其中，“胃腸運(yùn)動(dòng)障礙”和“胃腸激素和神經(jīng)遞質(zhì)的改變”在發(fā)病過程中起重要作用。目前發(fā)現(xiàn)的胃腸激素有40余種，其中胃泌素(GAS)及生長抑素(SS)一直是研究熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)研究胃痛消痞方對實(shí)驗(yàn)大鼠血清及胃腸組織中GAS及SS含量的影響。

1 材料和方法

1.1 材料 選擇健康♂SPF級Wistar大鼠40只，12周，體質(zhì)量180～220 g，由中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物使用許可證號SYSK(遼)2003－0019。大鼠GAS及SS(ELISA法)試劑盒購自美國R＆D公司;兔抗鼠GAS及SS購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司;免疫組化染色試劑盒購自北京中杉金橋有限公司。

1.2 方法

1.2.1 分組及造模 采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為4組，即正常對照組、模型組、胃痛消痞方(中藥)組，西沙必利(西藥)組，每組10只。除正常對照組外，其余3組均采用改良夾尾刺激法制造FD肝郁脾虛模型，即每日用長海綿鑷子鉗夾大鼠尾巴末端1/3處，以令其尖叫掙扎但不破皮為度(如有抓傷破皮，則用0.5%碘伏消毒受傷部位，以防感染)，使其暴怒并與其他大鼠撕打，每次持續(xù)30 min，2次/d，連續(xù)刺激3周。造模期間，各組大鼠自由進(jìn)食及飲水。大鼠出現(xiàn)躁動(dòng)等緊張、焦慮反應(yīng)，且進(jìn)食量明顯減少，即為造模成功。

1.2.2 藥物制備及給藥 造模成功后，胃痛消痞方(柴胡、白芍、延胡索、炒枳實(shí)、炒砂仁、炒麥芽、焦山楂、炒雞內(nèi)金、黨參、炙甘草、炒白術(shù)等中藥組成)，由中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院藥局提供，每1 mL合劑相當(dāng)于原藥材1.125 g;西沙必利，上海滬源醫(yī)藥有限公司產(chǎn)品，5 mg/片，臨用時(shí)加蒸餾水制成混懸液，每 1 mL混懸液含西沙必利0.25 mg。給藥劑量依據(jù)人和鼠給藥劑量換算公式dB=dARB/RA(WA/WB)1/3進(jìn)行計(jì)算，中藥組給予胃痛消痞方9 g/kg，西藥組給予西沙必利2 mg/kg，模型組及正常對照組給予灌服等量蒸餾水，1次/d灌胃，持續(xù)3周。

1.2.3 取材 在給藥第21天，禁食不禁水12 h，麻醉處死全部大鼠，心臟取血，約3 mL/只，靜置，4℃離心(3 500 r/min，20 min)，收集上清，置于－20℃凍存待測，用于 ELISA法檢測血清中GAS、SS的含量;每只大鼠取胃竇及十二指腸部組織約100 mg，將標(biāo)本投入4%多聚甲醛液中固定24 h后，石蠟包埋。

1.2.4 ELISA法檢測血清中GAS、SS的含量ELISA檢測方法嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行操作。

1.2.5 免疫組化法檢測胃組織中GAS、SS的表達(dá) 各組動(dòng)物于造模及用藥結(jié)束前1 d(第20天)，禁食12 h(不禁水、藥)，第21天處死后，立即剖腹，定位于距幽門胃端、腸端各0.5 cm處，連同幽門一起取出。將標(biāo)本投入4%多聚甲醛液中固定24 h后，石蠟包埋，5 μm連續(xù)切片。依照試劑盒行GAS及SS免疫組織化學(xué)染色。

2 結(jié)果

2.1 各組干預(yù)對大鼠血清、胃竇及十二指腸組織中GAS的影響 各組大鼠血清及胃竇十二指腸組織中GAS含量見表1、圖1和圖2。結(jié)果表明，與正常對照組比較，模型組大鼠血清及組織中GAS含量明顯降低(P＜0.05);與模型組比較，中藥組及西藥組均可顯著增高血清及組織GAS表達(dá)，但均低于正常對照組(P＜0.05);中藥治療組GAS水平高于西藥組(P＜0.05)。

表1 各組大鼠血清及胃竇十二指腸組織中GAS的含量(ng/L)

圖1 胃組織中GAS表達(dá)(400×)注:A.正常對照組，B.模型組，C.西藥組，D.中藥組

圖2 腸組織中GAS表達(dá)(400×)注:A.正常對照組，B.模型組，C.西藥組，D.中藥組

2.2 各組干預(yù)對大鼠血清、胃竇及十二指腸組織中SS的影響 各組大鼠血清及胃竇、十二指腸組織中SS含量見表2、圖3和圖4。結(jié)果表明，與正常對照組比較，模型組大鼠血清及組織中SS含量明顯增高(P＜0.05);與模型組比較，中藥組及西藥組血清及組織SS水平顯著降低，且均低于正常對照組(P＜0.05);中藥組SS水平低于西藥組(P＜0.05)。

表2 各組大鼠血清及胃竇十二指腸組織中SS的含量(pg/mL)

圖3 胃組織中SS表達(dá)(400×)注:A.正常對照組，B.模型組，C.西藥組，D.中藥組

圖4 腸組織中SS表達(dá)(400×)注:A.正常對照組，B.模型組，C.西藥組，D.中藥組

3 討論

胃腸動(dòng)力障礙、心理因素等對 FD影響較大［4－6］，胃腸運(yùn)動(dòng)功能障礙在FD發(fā)病機(jī)制中的作用一直備受重視，并被認(rèn)為是引起上消化道癥狀的主要原因，而胃腸激素與胃腸運(yùn)動(dòng)密切相關(guān)，胃腸運(yùn)動(dòng)受到相關(guān)激素的影響和神經(jīng)遞質(zhì)的調(diào)控。有學(xué)者從胃腸激素方面對FD的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)FD患者存在胃腸激素分泌異常［7］。

GAS刺激壁細(xì)胞分泌胃酸和營養(yǎng)黏膜的生長，能促進(jìn)胃腸平滑肌收縮，增加胃腸道的運(yùn)動(dòng)［8－9］。SS以旁分泌方式調(diào)節(jié)G細(xì)胞GAS的分泌，并對胃腸道的分泌、吸收、運(yùn)動(dòng)功能有普遍的抑制作用［10］，對胃黏膜有直接的保護(hù)作用。SS可抑制許多細(xì)胞因子的釋放，其作用表現(xiàn)在對胃腸道具有廣泛的直接和間接調(diào)節(jié)作用［11］，它對多種生理功能具有抑制作用。GAS和SS的平衡對保持胃黏膜胃酸分泌和維持正常胃腸道功能有著重要作用。GAS和SS的分泌失調(diào)可以導(dǎo)致疾病，病理狀態(tài)下又可導(dǎo)致其分泌失調(diào)。胃黏膜G細(xì)胞主要分布在胃竇部，D細(xì)胞在胃竇、胃體和胃底均有分布，而以胃竇部較多。胃腸黏膜內(nèi)G、D細(xì)胞的比值相對恒定，這有利于維持正常的胃腸功能。

本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)D模型組大鼠血漿、胃竇及十二指腸組織中GAS水平下降，而SS水平升高。表明胃痛消痞方及西沙必利可能促進(jìn)GAS的分泌，抑制SS的分泌。兩組血漿及組織中GAS及SS分泌量差異顯著，表明胃痛消痞方優(yōu)于西沙必利。而唐海英等［12］研究發(fā)現(xiàn)，SS抑制胃酸的分泌，抑制胃排空，還可以通過內(nèi)分泌和旁分泌途徑來抑制胃泌素的分泌。可見胃痛消痞方及西沙必利通過促進(jìn)胃泌素的分泌，抑制生長抑素的分泌來刺激胃泌素分泌，進(jìn)而對FD大鼠協(xié)同起到體液和胃腸道動(dòng)力調(diào)節(jié)作用。

FD屬中醫(yī)“痞滿”［13］、“胃脘痛”、“嘈雜”等范疇。該病的發(fā)生不僅與胃有直接關(guān)系，而且與肝脾密切相關(guān)。雖然導(dǎo)致FD發(fā)病的因素較多，但脾胃虛弱是根本，肝郁是關(guān)鍵。治療上著重調(diào)理情志與脾胃，復(fù)其升降。胃痛消痞方以柴胡、白芍疏肝解郁，調(diào)理氣機(jī);炒白術(shù)、黨參健脾益氣助運(yùn);砂仁、枳實(shí)化濕行氣，散結(jié)消痞;焦山楂、炒麥芽，炒雞內(nèi)金疏理中焦以醒脾，健脾消食以化積［14］。肝郁則可見脘腹脹滿疼痛，延胡索行氣止痛，炙甘草調(diào)藥緩中，全方將疏肝解郁與健脾消食兩法有機(jī)結(jié)合起來，從而使木達(dá)土旺。共奏疏肝健脾、理氣和胃之功效。在FD與GAS、SS關(guān)系方面，SS對胃排空的抑制作用主要影響胃及十二指腸間的協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)，并通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)SS升高與胃排空遲緩呈顯著正相關(guān)。劉松林等［15］研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)D大鼠血中GAS的含量降低，通過用藥提高GAS含量，通過其效應(yīng)而發(fā)揮促胃動(dòng)力作用。SS對胃腸道有廣泛的抑制作用，抑制胃腸運(yùn)動(dòng)及膽囊收縮，對胃腸其他激素分泌也有廣泛抑制作用。目前，西醫(yī)治療FD采用的是藥物治療，首選促胃腸動(dòng)力藥，常用5－HT4受體激動(dòng)劑［16－17］，如西沙必利、莫沙必利等，但西沙必利療程較長，停藥易復(fù)發(fā)，且其不良反應(yīng)也有較多報(bào)道。我們根據(jù)FD的臨床表現(xiàn)及病機(jī)使用胃痛消痞方治療，結(jié)果表明，F(xiàn)D可以引起大鼠GAS、SS水平改變，胃痛消痞方可促進(jìn)FD大鼠胃泌素的釋放，降低生長抑素的釋放。

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