摘 要： 本文主要介紹了近年來國內(nèi)外幾種常用的DNA提取方法：CTAB法、SDS法，并在對其進行了簡單的歸納總結(jié)與比較分析同時，介紹了一些新的改良方法和其他植物提取方法。
　　關(guān)鍵詞： 植物DNA 提取方法 研究進展
　　
　　植物DNA的制備是分子生物學對各類植物進行更深入一步研究的基礎，所制備出的DNA質(zhì)量的好壞將直接關(guān)系到后期分子生物學試驗研究的成敗。目前國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)并使用的DNA提取方法有很多，其中被最為廣泛應用的DNA提取方法是傳統(tǒng)的CTAB法和SDS法。由于不同植物的材料組分各異，因此對不同植物DNA的提取存在著不同的效果。目前許多學者都在致力于研究不同的植物DNA提取方法。他們在探索新方法的同時，也針對不同的植物，在傳統(tǒng)的提取方法上進行著一些新的改良。
　　1.十六烷基三乙基溴化銨（CTAB）法
　　在目前眾多的DNA提取方法中，CTAB法是其中最為廣泛應用的一種。它既可以裂解細胞，又可以有效地去除多酚類和多糖類物質(zhì)的沉淀，因而經(jīng)常被應用于植物的DNA提取工作中。
　　1.1原理及方法
　　CTAB是一種陽離子去污劑，可溶解細胞膜。同時它能與核酸形成復合物，這些復合物在高鹽溶液中（0.7mol/L NaCl）是可解離的，從而可使DNA和多糖物質(zhì)分開。當溶液鹽濃度降低到一定程度（0.3mol/L NaCl）時，這些復合物將會從溶液中形成沉淀，隨后通過離心技術(shù)就可將CTAB-核酸的復合物與蛋白類、多糖類物質(zhì)分開。而對于富含多酚、多糖物質(zhì)的植物組織，則通過增加提取緩沖液中β-巰基乙醇的用量，便可有效地控制酚類物質(zhì)的氧化褐變及DNA的降解，用氯仿/異戊醇來沉淀蛋白質(zhì)，從而提高產(chǎn)物的純度。最后用乙醇來沉淀DNA，除去CTAB。
　　1.2適用范圍及一些改良
　　由于CTAB提取法能夠有效地去除多糖及酚類物質(zhì)的沉淀，因而適用于從含酚類及糖類物質(zhì)較高的植物材料中提取DNA。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)CTAB提取法在落羽杉屬樹木、黑木相思、野生稻、野燕麥、枸杞、花生的DNA的提取中，相比較其他提取方法來說都是最好的提取方法。
　　為了縮短提取流程，提高提取質(zhì)量，研究人員在傳統(tǒng)方法的基礎上，針對不同植物的特點，對一些提取步驟進行了改進。李先進［１］在對四種藥用蕨類DNA提取的比較研究中發(fā)現(xiàn)，由于酚類物質(zhì)極其容易被氧化，因此可以在最開始研磨材料的時候加入4%PVP，以防止研磨中細胞組織破裂后酚的氧化，從而獲得更為理想的DNA。黃永蓮［2］首先將材料在4℃放置1—2天，以便于其葉片中的多糖類物質(zhì)的降解；然后在用CTAB處理的同時加入蛋白酶K，提高提取緩沖液中β-巰基乙醇用量，增加氯仿/異戊醇的量和使用次數(shù)，以及縮短異丙醇沉淀DNA的時間。用此改良的CTAB法提取菠菜和榕樹葉片DNA，獲得了良好的效果。袁燕［3］對蒜頭果基因組進行DNA提純的研究中發(fā)現(xiàn)，EDTA的濃度在20—30mmol/L時，提取DNA的效果較好，同時在提取的過程中，往研缽中加入少量PVP和VitC固體與蒜頭果種仁共同研磨，不僅能阻止多糖、多酚氧化物等與DNA的結(jié)合和反應，而且能除去大部分油脂和雜質(zhì)，可以大大提高DNA的純度。
　　2.十二烷基磺酸鈉（SDS）法
　　SDS提取法與CTAB提取法一樣，也為常用的DNA提取方法。在DNA的提取過程中，有機溶劑的抽提效果及裂解液的裂解效果都是影響有機物質(zhì)去除的先決條件，不同的有機溶劑和裂解液對于不同種類的植物DNA提取作用也有所差異。所以有很多植物比較適合使用SDS提取法對其進行DNA的提取。
　　2.1原理及方法
　　SDS是一種陰離子去污劑，它能夠裂解細胞。使用氯仿等有機溶劑抽提蛋白質(zhì)和糖類，并且用乙醇或異丙醇來沉淀DNA。SDS提取法提取流程和CTAB提取法一樣。
　　2.2適用范圍及一些改良
　　在對老芒麥的基因組DNA分離的研究試驗中，李景環(huán)［１0］發(fā)現(xiàn)，SDS提取法是一種快速、簡便、有效的基因組DNA小量提取法。另外，在一些研究中還發(fā)現(xiàn)，SDS提取法能替代操作過程較煩瑣的大量法提取基因組DNA，從而給研究工作帶來便利。
　　在毛白楊成熟葉片基因組DNA提取的研究中李繼東［4］通過比較發(fā)現(xiàn)，SDS提取法是提取出質(zhì)量高純度高的毛白楊成熟葉片DNA的最佳方法，同時發(fā)現(xiàn)，如果將PVP添加到裂解液中，可以大大減少了試驗的操作步驟，提取效果同樣很好。另外也有研究發(fā)現(xiàn)，SDS高鹽介質(zhì)法又較常規(guī)SDS法省去了添加液氮研磨和水浴加熱抽提等操作，可使得DNA提取試驗的操作變得簡便快速。
　　3.高鹽低pH法
　　運用高鹽低pH提取法對植物的DNA進行提取也較為普遍，此方法所用的試劑僅有無機鹽和異丙醇，而醋酸鉀又是常用的無機鹽試劑。由于高鹽低pH提取法沒有反復抽提的過程，其所需要的試驗材料也較少，因此比較適合應用于瀕臨滅絕的瀕危物種植物的DNA提取。
　　郝朝運［5］在對忍冬科部分植物DNA提取方法的研究中發(fā)現(xiàn)，用高鹽低pH法能有效地防止組織破碎及沉淀時的電離化作用和酚類化合物的進一步氧化，避免了采用酚、氯仿等有毒試劑，同時低pH的醋酸鉀溶液也是有效的蛋白質(zhì)沉淀劑。在高鹽提取緩沖液中加入一定量的β-巰基乙醇，則可有效去除木本植物中含量較多的酚類物質(zhì)，從而提高提取DNA的質(zhì)量。所以該方法尤其適合以一年生或兩年生枝條為材料提取的植物總DNA，不但純度高、產(chǎn)量大，而且所用試劑無毒、操作簡便。最重要的是，本方法所用植物材料（枝條）不受季節(jié)限制，容易獲得和保存，具有較高的實際操作意義。
　　4.植物DNA的其他提取法
　　4.1改良尿素法
　　通過大量試驗后，曹文波［6］研究出了改良尿素法，在原尿素法基礎上在裂解液中添加β-ME、用預冷的無水乙醇取代異丙醇沉淀核酸、采用水平離心和快速倒出用于洗滌的乙醇等操作。并從玉米和水稻葉片中提取出了高質(zhì)量的基因組DNA。此種方法的DNA產(chǎn)率高、快速省時、可在常溫下進行操作且成本耗用低。所以用改良的方法能夠獲得純度高、濃度大的基因組DNA。
　　4.2優(yōu)化的植物總DNA提取方法
　　黃萱［7］改進了Clark利用CTAB提取植物基因組DNA的方法，在試驗過程中，通過在研磨材料時加入液氮、用剪去端部的吸頭轉(zhuǎn)移含有DNA的溶液，并且將加入RNase A消化RNA的步驟改在最后進行等一系列改進，以獲得高質(zhì)量的DNA。郭紅媛、佘茂云［8］對CTAB法與SDS法進行了總結(jié)，研究出了一種適于棉花總DNA的提取方法，得到的DNA滿足分子生物學的進一步研究的需要，效果顯著。
　　關(guān)于植物DNA的提取方法雖然前人已經(jīng)做了大量的研究，也總結(jié)出很多諸如CTAB法、SDS法、改良尿素法等適用范圍不同的植物DNA提取方法。但基于現(xiàn)在分子生物學的不斷深入研究，而DNA又作為分子生物學研究的基礎，同時依據(jù)不同植物的特點，不同植物的最適合DNA的提取方法也還在不斷探究中。
　　
　　參考文獻：
　?。?］李先進，彭正松，張正英.四種藥用蕨類DNA提取的比較研究［J］.綿陽師范學院學報，2008，27，（8）：85-87，97.
　?。?］黃永蓮，劉媛，黃真池.植物總DNA的提取方法的改進［J］.湛江師范學院學報，2007，28，（3）：25-30.
　?。?］袁燕，王德斌，郭麗紅.對改良CTAB法對蒜頭果基因組DNA提純效果的影響的研究［J］.云南民族大學學報，2008，17，（2）：143-146.
　?。?］李繼東，梁啟偉，吳文娟.毛白楊成熟葉片基因組DNA提取方法的比較研究［J］.河南科學，2009，27，（3）：285-288.
　?。?］郝朝運，劉鵬，郭衛(wèi)東.忍冬科部分植物DNA提取方法的研究［J］.浙江師范大學學報（自然科學版），2006，29，（1）：92-98.
　　［6］曹文波，鄭璐璐，謝文海.一種提取植物基因組DNA的方法——改良尿素法［J］.華中師范大學學報（自然科學版），2008，4，（3）：448-451.
　?。?］黃萱，高麗美，張永彥.一種優(yōu)化的植物總DNA提取方法［J］.西北植物學報，2004，24，（6）：1103-1106.
　　［8］郭紅媛，佘茂云.一種改良的棉花總DNA提取方法［J］.山西農(nóng)業(yè)科學，2009，37，（2）：3-5.