摘要：目的：采用微生態(tài)學(xué)的研究方法探討“腸病及肺”的機(jī)理。方法：建立大鼠便秘模型，觀察其結(jié)腸和肺部微生態(tài)變化。結(jié)果：便秘模型組的腸道需氧菌、真菌、大腸桿菌較正常對(duì)照組顯著增多（P<0.01），而厭氧菌、類(lèi)桿菌和雙歧桿菌顯著減少（P<0.01）；同時(shí)，便秘模型組的肺部需氧菌增多，厭氧菌顯著減少（P<0.05），真菌顯著增多（P<0.01）。結(jié)論：肺腸微生態(tài)學(xué)上的菌群對(duì)應(yīng)規(guī)律性變化可能是“腸病及肺”的機(jī)制之一。
　　關(guān)鍵詞：肺與大腸相表里；腸病及肺；便秘；微生態(tài)學(xué)
　　中圖分類(lèi)號(hào)：R37文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A
　　文章編號(hào)：1007-2349（2011）03-0054-02
　　“肺與大腸相表里”的理論源于《內(nèi)經(jīng)》，肺與大腸不僅在生理上相互聯(lián)系，病理上相互影響，治療上也相互為用（肺病治腸、腸病治肺、肺腸合治）。筆者參照文獻(xiàn)［1］方法，建立大鼠便秘模型，并對(duì)結(jié)腸和肺組織進(jìn)行微生態(tài)學(xué)觀察，研究‘腸病及肺’的生物學(xué)機(jī)制。
　　1材料與方法
　　1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)Wistar雄性大鼠40只，體重（180±20）g，購(gòu)自成都達(dá)碩生物科技有限公司（動(dòng)物合格證號(hào)：scxk（m）2008-15），標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)。
　　1.2藥物及試劑復(fù)方地芬諾酯片（DC）（批號(hào)：09033001，焦作博愛(ài)藥業(yè)）；阿拉伯樹(shù)膠粉（進(jìn)口分裝）（炭粉液的配制：阿拉伯樹(shù)膠50g，加水400mL煮沸至溶液透明，稱(chēng)取活性碳末25g，加至上述溶液中煮沸3次，待溶液涼后加水定容至500mL，于4℃冰箱保存，臨用前搖勻）。
　　1.3主要儀器及設(shè)備ACS-3C型電子天平（廣州）；BL-420F型生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都）；OLYMPUSBX60光學(xué)顯微鏡（日本）；OLYMPUSDP70彩色圖文系統(tǒng)（日本）。
　　1.4大鼠便秘模型制作予復(fù)方地芬諾酯片灌胃，劑量10mg/kg，1次/日，30min后再灌炭粉指示液，造模后記錄大鼠排出首粒黑便的時(shí)間和在6h內(nèi)排出糞便的粒數(shù)及重量，共1周。
　　1.5肺腸微生態(tài)學(xué)檢測(cè)收集支氣管肺泡灌洗液進(jìn)行肺部細(xì)菌檢測(cè)，支氣管肺泡灌洗液收集方法：大鼠麻醉后，取仰臥位，固定架上固定，打開(kāi)胸腔，暴露氣管，V型切口切開(kāi)，插管，用0.02%PBS灌洗肺臟5～6次，收集灌洗液，以1500r/min離心5min，取上清液4℃保存待測(cè)。取新鮮的糞便1粒即刻放入制備好的轉(zhuǎn)移液中，做菌群的培養(yǎng)、計(jì)數(shù)和種類(lèi)鑒別觀察。轉(zhuǎn)移液的制備及具體檢測(cè)程序參照文獻(xiàn)［2］進(jìn)行。
　　1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以（Ax-G?！纒）形式表示，采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，行組間配對(duì)t檢驗(yàn)，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2結(jié)果
　　2.1大鼠DC便秘模型的復(fù)制實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)，模型大鼠的一般生物學(xué)特征為，不同程度出現(xiàn)腹脹狀態(tài)，懶動(dòng)、少食，倦怠蜷縮，被毛蓬松無(wú)澤，活動(dòng)減少，反應(yīng)遲緩，體重明顯減輕，攝食量減少。解便次數(shù)減少，排便較對(duì)照組困難，糞便的外觀明顯變小，質(zhì)地干硬，粒數(shù)減少、干濕重量均減輕（P<0.05），表明造模成功，見(jiàn)表1。
　　病理切片[KG-*3]HE染色光鏡觀察發(fā)現(xiàn)，正常對(duì)照組大鼠結(jié)腸黏膜完好，無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn)及潰瘍形成，黏膜上皮完整、連續(xù)，腺體排列規(guī)則，結(jié)構(gòu)清楚；便秘模型組大鼠結(jié)腸表現(xiàn)為局部充血、水腫、黏膜輕度糜爛；結(jié)腸黏膜上皮欠完整，腺體排列欠規(guī)則，黏膜腺體破壞，殘存的黏膜充血、水腫，黏膜及黏膜下大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　2.2大鼠腸道菌群檢測(cè)結(jié)果觀察結(jié)腸微生態(tài)的變化，結(jié)果顯示，便秘模型組的腸道需氧菌、真菌、大腸桿菌較正常對(duì)照組顯著增多（P<0.01），而厭氧菌、類(lèi)桿菌和雙歧桿菌顯著減少（P<0.01）。見(jiàn)表2。
　　2.3大鼠肺部菌群檢測(cè)結(jié)果便秘模型組的肺部需氧菌增多，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，厭氧菌顯著減少（P<0.05），真菌顯著增多（P<0.01）。見(jiàn)表3。
　　3討論
　　“肺與大腸表里”理論起源于《黃帝內(nèi)經(jīng)》，《靈樞?本輸》云：“肺合大腸，大腸者，傳導(dǎo)之府”。肺與大腸臟腑相表里，經(jīng)脈相互屬絡(luò)。在生理學(xué)中，傳統(tǒng)上認(rèn)為肺是呼吸器官，大腸是消化器官，二者的活動(dòng)均由神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)調(diào)節(jié)控制，沒(méi)有直接的關(guān)聯(lián)。隨著現(xiàn)代研究對(duì)肺的非呼吸功能、腸的非消化吸收功能的揭示，二者之間直接聯(lián)系的途徑不斷被發(fā)現(xiàn)，并日益變得復(fù)雜。以往的實(shí)驗(yàn)研究，側(cè)重于“肺病及腸”［3~4］，對(duì)“腸病及肺”研究較少，因而研究“腸病及肺”的生物學(xué)機(jī)制有重要意義。
　　觀察發(fā)現(xiàn)，便秘模型組的腸道需氧菌、真菌、大腸桿菌較正常對(duì)照組顯著增多，而厭氧菌、類(lèi)桿菌和雙歧桿菌顯著減少；同時(shí)，便秘模型組的肺部需氧菌增多，厭氧菌顯著減少，真菌顯著增多。說(shuō)明便秘模型大鼠在“腸病”的時(shí)候，其腸道菌群出現(xiàn)紊亂，同時(shí)，這一病理狀態(tài)導(dǎo)致了肺部的微生態(tài)也隨之發(fā)生了變化，各種類(lèi)型的菌群與正常對(duì)照組比較發(fā)生了顯著的改變，引起微生態(tài)失衡。
　　正常菌群定居于機(jī)體的特定空間，在數(shù)量上維持一定的比例，其本身不僅對(duì)機(jī)體無(wú)害，而且能通過(guò)占位效應(yīng)、營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)、分泌抑菌或殺菌物質(zhì)等，形成一道生物屏障，抵抗外來(lái)或過(guò)路的病原微生物的入侵［5］。菌群失調(diào)指定居于特定部位的正常菌群的數(shù)量及比例的改變，最常見(jiàn)的為腸道菌群失調(diào)，表現(xiàn)為腸道菌群中占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)的革蘭陽(yáng)性桿菌減少，而革蘭陰性桿菌增多，臨床表現(xiàn)為嚴(yán)重腹瀉及腸功能紊亂，濫用抗生素造成腸道菌群失調(diào)等，均可使腸道的潛在致病菌移位至口咽部，下行引起下呼吸道感染［6］。
　　微生態(tài)失衡可能導(dǎo)致腸道細(xì)菌移位，腸道細(xì)菌移位會(huì)引起炎癥介質(zhì)大量釋放。腸道細(xì)菌移位是指腸道內(nèi)活的細(xì)菌穿過(guò)腸道黏膜層進(jìn)入固有層，繼而到達(dá)腸系膜淋巴結(jié)以及更遠(yuǎn)處器官［7］。目前認(rèn)為當(dāng)機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)過(guò)度或失調(diào)時(shí)，寄生于腸道內(nèi)的微生物及其毒素，越過(guò)腸黏膜屏障，大量侵入正常情況下是無(wú)菌的腸道以外的組織，如腸壁漿膜、腸系膜淋巴結(jié)、門(mén)靜脈以及其他遠(yuǎn)處器官，其結(jié)果可能引發(fā)腸源性的全身感染，并且觸發(fā)SIRS甚至MODS［8］。Deitch［9］的研究認(rèn)為，腸道不僅是人體內(nèi)最大的貯菌所和內(nèi)毒素庫(kù)，而且是觸發(fā)全身炎性介質(zhì)釋放的啟動(dòng)器，腸道內(nèi)細(xì)菌或內(nèi)毒素的移位，和胃腸道相關(guān)淋巴組織及其他腸黏膜細(xì)胞產(chǎn)生促炎反應(yīng)釋放大量促炎介質(zhì)關(guān)系密切，它們共同的病理生理學(xué)基礎(chǔ)，是腸道的缺血再灌注損傷；腸道缺血再灌注損傷后的直接結(jié)果，是損害腸黏膜屏障和激發(fā)腸道促炎反應(yīng)。通過(guò)對(duì)便秘模型大鼠的微生態(tài)學(xué)研究，筆者認(rèn)為，肺腸微生態(tài)學(xué)上的菌群對(duì)應(yīng)規(guī)律性變化可能是“腸病及肺”的機(jī)制之一。
　　參考文獻(xiàn)：
　?。?］高洋，溫志軍，楊波，等.針刺對(duì)便秘大鼠模型排便功能的影響［J］.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，24（3）：245~246.
　?。?］丁維俊，周邦靖，翟慕東，等.參苓白術(shù)散對(duì)小鼠脾虛模型腸道菌群的影響［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，29（8）：508.
　　［3］靳文學(xué)，楊宇.從粘膜免疫系統(tǒng)看肺與大腸相表里［J］.四川中醫(yī)，2005，23（12）：1~2.
　?。?］靳文學(xué)，白亞輝，楊宇.加味升降散對(duì)過(guò)敏性哮喘豚鼠黏膜sIgA免疫影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)中醫(yī)急癥，2007，16（4）：447~448.
　　［5］RowlandsBJ，SoongCV，GardinerKR.Thegastrointestinaltractasabarrierinsepsis［J］.BrMedBulletin，1999，55（1）：196.
　?。?］NieuwenhuijzenGAP，DeithEA，GorRJA.Infection，thegutandthedevelopmentofthemultipleorgandysfunctionsyndrome［J］.EurJSurg，1996，16（2）：259.
　?。?］MarshallJC，ChristonN，MeakinsJL.Thegastrointestinaltract，theundrainedabscessofmultipleorganfailure［J］.AnnSurg，1993，218（2）：111~119.
　?。?］BergRD.Bacteriatranslocationfromthegastrointestinaltract［J］.TrendsMicrobial，1995，3（4）：149~154.
　　［9］DeitchEA.Theroleofintestinalbarrierfailureandbacterialtranslocationinthedevelopmentofsystemicinfectionandmultipleorganfailure［J］.Archsurg，1990，125（3）：403~404.
　　（收稿日期：2010-11-28）