趙 云， 歐陽(yáng)貴平， 杜才富， 秦信蓉， 金林紅， 袁 凱

(1. 貴州省油菜研究所，貴州 貴陽(yáng) 550008; 2. 貴州大學(xué) 精細(xì)化工研究開(kāi)發(fā)中心 綠色農(nóng)藥與 農(nóng)業(yè)生物工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地 教育部綠色農(nóng)藥與生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550025)

苯并[4,5]呋喃[3,2-d]嘧啶及其衍生物是一類(lèi)廣譜生物活性化合物，如抗炎[1]、抗菌、抗腫瘤[2，3]等。近年來(lái)，苯并[4,5]呋喃[3,2-d]嘧啶類(lèi)化合物在有機(jī)合成和醫(yī)藥上倍受關(guān)注，如SuperGen 公司研制的抗癌候選藥物、酪氨酸激酶抑制劑MP470(Chart 1)，具有廣譜抗癌活性，與化療和放療具有協(xié)同作用，已經(jīng)進(jìn)入一期臨床試驗(yàn)。

為了尋找具有高效抗癌活性的新化合物，本文在前期工作[4，5]的基礎(chǔ)上，以MP470為先導(dǎo)化合物，將1,3,4-三唑等引入苯并[4,5]呋喃[3,2-d]嘧啶中，合成了7個(gè)未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道的雜環(huán)取代苯并[4,5]呋喃[3,2-d]嘧啶類(lèi)衍生物(4a～4e,5f和5g, Scheme 1)，其結(jié)構(gòu)經(jīng)NMR, IR和MS表征。

or

Scheme1

Chart1

初步生物活性測(cè)試結(jié)果表明，4和5對(duì)人前列腺癌細(xì)胞PC3都具有一定的抑制活性，其中4e的抗癌活性最為顯著，接近對(duì)照藥品阿霉素。

本工作對(duì)苯并[4,5]呋喃[3,2-d]嘧啶衍生物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾以提高其抗癌活性，為篩選出具有高抗癌活性的化合物奠定了一定的技術(shù)基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

X-4型數(shù)字顯示顯微熔點(diǎn)儀(溫度計(jì)未校正);JOEL-ECX 500 Hz型核磁共振儀(CDCl3為溶劑,TMS為內(nèi)標(biāo));VECTOR 22型紅外光譜儀(KBr壓片);Agilent 1100 MSD-Trap-VL型質(zhì)譜儀。

1按文獻(xiàn)[6,7]方法合成；其余所用試劑均為國(guó)產(chǎn)化學(xué)純或分析純。

1.2 4和5的合成(以4a為例)

在三口瓶中加入(1-苯基)-5-(2-氯-苯基)-2-巰基-1,3,4-均三唑(2a) 143.5 mg(0.5 mmol),乙腈10 mL和無(wú)水碳酸鉀140 mg(1 mmol),攪拌下于室溫反應(yīng)3 min;加1100 mg(0.5 mmol),于78 ℃～79 ℃反應(yīng)9 h。旋蒸脫溶，殘余物用水洗除碳酸鉀，抽濾，濾餅用乙酸乙酯重結(jié)晶得4a。

用類(lèi)似方法合成4b～4e,5f和5g。4和5的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1,表征數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

表 1 合成4和5的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

*ESI-MSm/z{[M+Na]+}

1.3 體外抗癌活性測(cè)試

培養(yǎng)環(huán)境:飽和濕度,37 ℃, 5%CO2。種細(xì)胞在96孔板上(2 000細(xì)胞/孔)培養(yǎng)24 h;去除上清廢液，在殘余物中加帶藥培養(yǎng)基(供試藥預(yù)溶在DMSO中，使用時(shí)用血清培養(yǎng)基稀釋成10 μmol·L-1) 200 μL/well，培養(yǎng)72 h;去除上清廢液，在殘余物中加0.5 mg·mL-1MTT溶液100μL/well,培養(yǎng)4 h;加10%十二烷基硫酸鈉溶液100 μL/well，培養(yǎng)12 h。冷卻至室溫，靜置20 min～30 min后測(cè)其吸光度值(OD)，并按下式計(jì)算供試藥的抑制率(%)。

表 2 4和5的表征數(shù)據(jù)

續(xù)表2

2 結(jié)果與討論

每樣本用藥劑量重復(fù)六個(gè)孔，每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，取平均值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，在用藥劑量為10 μmol· L-1時(shí)，4b和4e對(duì)PC3的抑制率分別為59.2%和88.1%;4e的體外抗癌活性比較接近對(duì)照藥阿霉素(93.5%)，總體上4和5對(duì)PC3癌細(xì)胞都具有一定的抑制效果。

表 3 4和5對(duì)PC3癌細(xì)胞的抑制率*

*c10 μmol·L-1

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