李忠亮，王曉波，張治然，襲榮剛 (解放軍第210醫(yī)院藥劑科，大連116021)

[本文編輯] 邢文榮

鹽酸依匹斯汀是第二代組胺H1受體拮抗藥和肥大細(xì)胞組胺釋放抑制藥，臨床用于防治成人過敏性鼻炎、過敏性支氣管哮喘等疾病。文獻(xiàn)[1，2]報(bào)道該藥在不同人群間的藥動(dòng)學(xué)有差異，但在中國(guó)不同民族人群間是否也存在藥動(dòng)學(xué)差異尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究采用HPLC法測(cè)定依匹斯汀血藥濃度，研究其在中國(guó)漢族和藏族人中的藥動(dòng)學(xué)，從而為多民族間的合理用藥提供藥動(dòng)學(xué)參考數(shù)據(jù)。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 LC－10ATvp高壓液相系統(tǒng)，包括 Sil－10ADvp自動(dòng)進(jìn)樣器，SPD－10Avp紫外檢測(cè)器，Kromasil C18柱(迪馬公司)，Class－VP色譜工作站(日本島津公司)；TGL－16M臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(湖南賽特湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；XW－80A微型旋渦混合儀(上海滬西分析儀器廠有限公司)；TG328A型分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；MTN－2800W氮吹濃縮裝置(天津奧特塞恩斯儀器有限公司)。

1.2 試藥 鹽酸依匹斯汀片(規(guī)格：10mg／片，德國(guó)勃林格殷格翰制藥有限公司，批號(hào)589415)；鹽酸依匹斯汀對(duì)照品(批號(hào)100437－200601)和替硝唑內(nèi)標(biāo)物(批號(hào)100095－200304)由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；甲醇、乙腈為色譜純；磷酸、三乙胺和二氯甲烷均為分析純；水為重蒸水(解放軍第210醫(yī)院自制)；空白人血漿由本院輸血科提供。

2 方 法

2.1 受試者選擇 選擇漢族健康受試者10名，男女各半，年齡(22.3±1.2)歲，體重(54.8±5.3)kg，身高(166.5±2.1)cm。選擇藏族健康受試者10名，男女各半，年齡(25.7±1.4)歲，體重(61.4±5.6)kg，身高(169.6±2.7)cm。健康受試者三代內(nèi)均為同族婚配。所有受試者體格檢查示肝、腎功能正常，不吸煙、不嗜酒。女性健康受試者受試時(shí)間避開月經(jīng)、妊娠及哺乳期。試驗(yàn)前兩周內(nèi)未服用任何其他藥物。受試者均簽署知情同意書。臨床試驗(yàn)方案經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

2.2 試驗(yàn)方案和血樣采集 試驗(yàn)采用單劑量給藥。受試者于試驗(yàn)前1d晚餐后開始禁食不禁水；于試驗(yàn)當(dāng)日清晨，空腹口服鹽酸依匹斯汀片20mg，溫開水200ml吞服，服藥2h后，可自由飲水；4h后進(jìn)統(tǒng)一清淡低脂飲食。服藥期間禁煙、酒和含咖啡因類飲料，避免劇烈運(yùn)動(dòng)和長(zhǎng)時(shí)間臥床。受試者于服藥前(0h)和服藥后的0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、8、12、24、36、48、60h于肘靜脈取含藥血5ml，置肝素化試管中，在2.1×103×g條件下，離心10min，分離血漿，置－70℃冰箱保存待測(cè)。

2.3 色譜條件 流動(dòng)相：乙腈－0.3%三乙胺(25:75，用磷酸調(diào)pH 值為3.5)；流速1.0ml／min；色譜柱：Kromasil C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，柱溫：30℃，進(jìn)樣量：20μl。

2.4 樣品預(yù)處理 精密量取含藥血漿500μl，置10ml離心管中，加入內(nèi)標(biāo)溶液(400ng／ml替硝唑)10μl，加0.2mol／L Na2CO30.3ml，加二氯甲烷4ml，渦旋30min，在2.7×103×g條件下，離心10min。取有機(jī)層，置5ml離心管中，于37℃ 水浴中氮?dú)饬鞔蹈桑瑲堅(jiān)昧鲃?dòng)相100μl溶解，渦旋1min，移至1.5ml離心管中，在3.8×104×g條件下，離心5min，取上清液20μl進(jìn)樣分析。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 精密稱取鹽酸依匹斯汀對(duì)照品10.0mg，置1000ml容量瓶中，用甲醇定容，制成10.0μg／ml鹽酸依匹斯汀儲(chǔ)備液。精密量取鹽酸依匹斯汀儲(chǔ)備液0.25、0.5、1、2、4、8ml，置100ml容量瓶中，用甲醇定容，即得0.025、0.050、0.100、0.200、0.400、0.800μg／ml系列濃度對(duì)照品溶液。精密稱取替硝唑?qū)φ掌?0.0mg，置50ml容量瓶中，用甲醇定容，制成400μg／ml替硝唑儲(chǔ)備液；使用時(shí)用甲醇稀釋成100ng／ml的工作濃度。

2.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析 用DAS 2.1軟件對(duì)血藥濃度－時(shí)間數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，以非室模型估算主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。tmax和cmax均為實(shí)測(cè)值，AUC采用梯形法計(jì)算。主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后采用SPSS 10.0軟件作正態(tài)分布檢驗(yàn)，對(duì)正態(tài)分布的參數(shù)作t檢驗(yàn)，其余參數(shù)作非參數(shù)檢驗(yàn)，評(píng)價(jià)不同民族間和不同性別間藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的差異是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 方法專屬性 由圖1可見，在選定的色譜條件下，藥物、血漿中內(nèi)源性雜質(zhì)和內(nèi)標(biāo)物分離完全，峰形良好，不干擾依匹斯汀的測(cè)定。內(nèi)標(biāo)樣品替硝唑的濃度為100ng／ml，保留時(shí)間約為3.5min；依匹斯汀的保留時(shí)間約為5.5min，分離度＞1.5。

圖1 人血漿中依匹斯汀的HPLC譜圖Figure 1 HPLC photograms of epinastine in human plasma

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取空白血漿500μl，置10ml離心管中，分別精密加入上述鹽酸依匹斯汀系列對(duì)照品溶液各100μl，制成鹽酸依匹斯汀濃度為5、10、20、40、80、160ng／ml的血漿樣品，按2.4項(xiàng)下方法處理血漿樣品，進(jìn)行色譜分析。以鹽酸依匹斯汀峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比(Y)對(duì)濃度(X)進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：Y＝0.038 4X－0.026 5(r＝0.999 6)，線性范圍5～160ng／ml。本法測(cè)定血漿中鹽酸依匹斯汀的最小檢測(cè)濃度為5ng／ml。

3.3 回收率與精密度實(shí)驗(yàn) 精密量取空白血漿500μl 9份，均分為3組，每組分別精密加入0.050、0.200、0.800μg／ml鹽酸依匹斯汀對(duì)照品溶液100μl，制成相當(dāng)于依匹斯汀血漿濃度分別為10、40、160ng／ml的低、中、高三個(gè)濃度樣品，將血樣按2.4項(xiàng)下方法處理后作HPLC分析，將所得的依匹斯汀峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算方法回收率分別為(95.4±3.6)%、(92.4±1.2)%和(103.2±4.6)%。取上述各濃度血樣于同一天內(nèi)分別測(cè)定5次，連測(cè)5d，計(jì)算日內(nèi)RSD分別為1.5%、2.5%和3.2%(n＝5)，日間 RSD分別為1.3%、2.3%和3.6%(n＝5)。

3.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 同法配制低、中、高三個(gè)濃度(10、40、160ng／ml)血漿樣品，每個(gè)濃度3份，按2.4項(xiàng)下方法操作，一份在室溫放置24h；一份于－70℃冰箱冷凍，反復(fù)凍融3次；一份于－70℃冷凍保存30d。結(jié)果顯示，RSD均＜10%(n＝3)，表明鹽酸依匹斯汀在室溫、－70℃反復(fù)凍融3次以及－70℃冷凍30d的條件下穩(wěn)定性均較好。

3.5 血藥濃度與藥動(dòng)學(xué)參數(shù) 20名健康受試者單劑量口服鹽酸依匹斯汀片20mg后的平均血藥濃度見表1。用DAS 2.1軟件進(jìn)行處理，以赤池信息判據(jù)最小原則 (Akaike’s information criterion，AIC)值作為模型識(shí)別指標(biāo)，結(jié)果符合二室開放模型。不同性別健康受試者單劑量口服鹽酸依匹斯汀片20mg的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表2。

表1 依匹斯汀的平均血藥濃度Table 1 Mean plasma concentrations of epinastine(n＝5，±s，ρB／ng·ml－1)

表1 依匹斯汀的平均血藥濃度Table 1 Mean plasma concentrations of epinastine(n＝5，±s，ρB／ng·ml－1)

時(shí)間(t／h) 男性 女性 漢族 藏族0 0 0 0 0 0.5 20.42±5.18 16.74±5.04 1 44.24±9.51 18.54±5.09 18.37±5.27 42.53±9.72 1.5 52.35±12.64 41.57±9.58 44.35±9.07 47.56±8.24 2 53.42±14.54 50.45±10.52 49.35±10.05 51.39±17.11 2.5 52.47±12.93 51.61±11.32 53.21±14.23 50.74±12.86 3 48.64±11.04 50.71±11.02 52.37±13.11 45.94±10.01 4 45.57±9.92 46.81±10.94 48.45±10.38 29.57±7.95 12 24.52±7.28 40.57±9.24 8 34.52±8.46 43.85±9.07 43.43±8.87 32.45±8.05 32.24±8.35 23.51±6.81 24 10.57±2.27 22.84±6.53 25.48±7.62 9.54±2.33 36 4.85±0.82 9.54±2.07 10.56±2.76 4.94±0.86 48 2.13±0.07 4.21±0.75 5.04±0.93 1.97±0.05 60 0.44±0.01 1.84±0.03 2.03±0.06 0.25±0.010.54±0.02 0.32±0.01

表2 單劑量口服20mg鹽酸依匹斯汀片后的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Table 2 Main pharmacokinetic parameters of epinastine after single oral dose of 20mg epinastine hydrochloride(n＝20，±s)

表2 單劑量口服20mg鹽酸依匹斯汀片后的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Table 2 Main pharmacokinetic parameters of epinastine after single oral dose of 20mg epinastine hydrochloride(n＝20，±s)

組別 cmax(ρB／ng·ml－1) t1／2(t／h) tmax(t／h) Vd(ml／kg)CL(ml·h－1·kg－1)AUC0～60(A／ng·h·ml－1)AUC0～∞(A／ng·h·ml－1)漢族 53.21±14.23 9.32±1.53 1.88±0.36 20.93±6.222.46±0.53 684.62±203.43 789.53±212.31藏族 51.39±17.11 9.36±1.32 1.98±0.32 22.73±9.73 2.58±0.21 702.13±157.22 828.32±244.63男性 53.42±14.54 9.31±1.23 1.89±0.39 20.95±5.23 2.41±0.45 682.52±218.21 792.24±213.82女性 51.61±11.32 9.37±1.71 1.99±0.58 22.92±4.242.59±0.36 713.31±160.32 838.21±242.61

3.6 藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的比較 由表2可見，各組受試者的cmax，t1／2，表觀一級(jí)吸收速率常數(shù)差異均無(wú)顯著性意義(P＞0.05)。20名健康受試者均未發(fā)生明顯不良反應(yīng)，說(shuō)明受試者在試驗(yàn)期間對(duì)單劑量口服鹽酸依匹斯汀片耐受性良好。

4 討 論

20名健康受試者單劑量口服20mg鹽酸依匹斯汀片后，藥動(dòng)學(xué)參數(shù)與文獻(xiàn)[3，4]報(bào)道基本相符。服藥后約1.9h可達(dá)血藥峰濃度。雖然漢族和藏族人群在藥物代謝能力上存在一定的差別，但該藥在兩民族間體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，故臨床上對(duì)這兩個(gè)民族用藥不需考慮民族間的差異。性別在生理上的差異影響藥物在體內(nèi)的藥效和藥動(dòng)學(xué)過程，為此，作者考察了單劑量口服20mg鹽酸依匹斯汀片后在性別間的差異，結(jié)果表明，女性的tmax和Vd稍高于男性，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，因此性別因素對(duì)本藥藥動(dòng)學(xué)過程無(wú)明顯影響。

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