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一株多重耐藥雞金黃色葡萄球菌的分離鑒定

王 群 （山東省鄒平縣畜牧獸醫(yī)局 256200）

金黃色葡萄球菌(MRSA)是自然界中分布最廣泛的微生物之一，其致病菌常給人類和動物造成很大的危害。由于長期使用以致濫用抗生素等抗菌藥物進行疾病的預防和治療，葡萄球菌的耐藥性不斷被強化，耐藥株越來越多，對各種抗生素的敏感性越來越差。為防止金黃色葡萄球菌對抗生素耐藥性所造成的影響，采集當?shù)匕l(fā)病雞群分離到的葡萄球菌進行藥敏試驗，確定敏感藥物，為其診治提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 病料來源 病例來源于濱州某雞場急性死亡的產(chǎn)蛋雞和同場發(fā)病的雞。

1.1.2 普通培養(yǎng)基 用市售普通營養(yǎng)瓊脂(由普天試劑有限公司生產(chǎn))經(jīng)高壓滅菌制成。

1.1.3 MH瓊脂平板 MH瓊脂由泰安博傲生物有限公司提供。

1 .2 試驗方法

1.2.1 細菌的分離培養(yǎng)與鑒定 無菌取病料接種到5%綿羊血瓊脂培養(yǎng)板中，經(jīng)37℃培養(yǎng)24h，觀察菌落形態(tài)、生長情況和溶血現(xiàn)象。將純培養(yǎng)菌株進行革蘭氏染色鏡檢。依據(jù)菌落形態(tài)和鏡檢情況，將分離純培養(yǎng)的菌株中疑是葡萄球菌屬的菌株做生化反應并用標準菌株金黃色葡萄球菌作參照，37℃培養(yǎng)24~72h，觀察其生化特性、培養(yǎng)特性，進一步鑒定。

1.2.2 金黃色葡萄球菌溶血型的判定 將分離純化鑒定好的金葡菌分別接種5%綿羊血瓊脂培養(yǎng)板中，37℃培養(yǎng)24h后，觀察溶血型，菌落周圍有1~2mm寬的草綠溶血環(huán)為溶血，菌落周圍形成一個2~4mm寬，界限分明、完全透明的溶血環(huán)的為溶血，菌落周圍形成一個約2mm寬不完全透明顏色較淺的溶血環(huán)為溶血，菌落周圍沒有溶血環(huán)的為不溶血。

1.2.3 藥敏試驗 對已鑒定溶血型的金黃色葡萄球菌用紙片法進行藥物敏感試驗。所選抗菌藥有：萬古霉素、慶大霉素、紅霉素、鏈霉素、青霉素G、氨芐青霉素、磺胺、阿莫西林、林可霉素、安滅菌、卡那霉素、先鋒霉素V、硫酸新霉素、恩諾沙星、強力霉素、復方新諾明、氟哌酸、頭孢氨芐、乙酰螺旋霉素、痢特靈、四環(huán)素等21種，均購北京康農(nóng)興牧科技發(fā)展中心。（1）將待檢菌接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板，37℃培養(yǎng)16~18h，挑取菌落懸于3ml生理鹽水中，混勻后與菌液比濁管比濁。調(diào)整濁度與比濁管(0.5麥氏單位)相同。（2）用無菌棉拭子蘸取茵液，在管壁上擠壓去掉多余菌液，后用棉拭子涂布整個MH培養(yǎng)基表面，反復幾次，保證涂布均勻。（3）待平板上的水分被瓊脂完全吸收后放置藥敏紙片，每個平板等間距放置5張，每張紙片間距不少于24mm，紙片中心距平皿邊緣不少于15mm。在接種后15min內(nèi)貼完紙片。每種藥敏片設3個重復。（4）將平板倒置，37℃培養(yǎng)20h后取出，用游標卡尺測量抑菌圈直徑并記錄，取其平均值，參考NCCLS判斷標準(抑菌圈直徑大于20mm，表現(xiàn)為極敏；抑菌圈直徑在15~20mm，表現(xiàn)為高敏；抑菌圈直徑在10"~14mm，表現(xiàn)為中敏；抑菌圈直徑小于10mm，表現(xiàn)為低敏；無明顯的抑菌圈，表現(xiàn)為耐藥)判斷供試菌株的抑菌效果。

附表 藥敏紙片對雞金黃色葡萄球菌的抑菌效果 （mm）

抗生素抑菌圈直徑抗生素抑菌圈直徑抗生素抑菌圈直徑 萬古霉素12阿莫西林12強力霉素15 慶大霉素9林可霉素20復方新諾明不明顯 紅霉素不明顯安滅菌8氟哌酸不明顯 鏈霉素不明顯卡那霉素10頭孢氨芐23 青霉素G15先鋒霉素V21乙酰螺旋霉素不明顯 氨芐青霉素14硫酸新霉素21痢特靈15 磺胺不明顯恩諾沙星18四環(huán)素7

2 結果與分析

從表看出，21種抗菌藥物中，頭孢氨芐、先鋒霉素V、硫酸新霉素3種藥物的抑菌圈直徑大于20mm，對供試菌株表現(xiàn)為極敏；青霉素G、林可霉素、恩諾沙星、強力霉素痢特靈5種藥物，抑菌圈直徑在15~20mm，對供試菌株表現(xiàn)為高敏；萬古霉素、氨芐青霉素、阿莫西林、卡那霉素4種藥物，抑菌圈直徑在10~14mm，對供試菌株表現(xiàn)為中敏；慶大霉素、安滅菌、四環(huán)素3種藥物，抑菌圈直徑小于10mm，對供試菌株表現(xiàn)為低敏；紅霉素、鏈霉素、磺胺、復方新諾明、氟哌酸、乙酰螺旋霉素6種藥物均無明顯的抑菌圈，對供試菌株表現(xiàn)為耐藥。

（2011–09–16）

S852.61+1

A

1007-1733(2011)12-0041-02