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豬多種疫苗分點同時注射的免疫抗體檢測試驗

沈艷麗①蔡金山①趙志剛②楊繼元②郭春蘭①（①青海省動物疫病預防控制中心 西寧 810001 ②青海省大通縣獸醫(yī)站）

試驗采用口蹄疫、豬瘟和高致病性藍耳病3種疫苗分點同時注射，以探討是否會產(chǎn)生相互干擾。試驗分為5組，每組30頭，用ELISA方法和正向間接血凝試驗檢測免疫抗體，結(jié)果表明，口蹄疫、豬瘟和藍耳病分點同時注射組產(chǎn)生的口蹄疫抗體在14d和21d達到最高值，且抗體水平高于單苗注射組；豬瘟抗體在28d達到最大值，較單苗注射組推遲了1周，藍耳病抗體2個組在43d內(nèi)，S/P值都在零以下，2個免疫程序?qū)λ{耳病免疫抗體的生成時間和水平無明顯差異。

疫苗 免疫抗體 檢測

口蹄疫、豬瘟和高致病性豬藍耳病是國家規(guī)定的強制免疫疫病，青海省主要以散養(yǎng)畜禽為主，養(yǎng)殖戶分散，養(yǎng)殖條件相對較差。農(nóng)村散養(yǎng)戶和規(guī)模養(yǎng)殖場畜禽目前實行春秋兩季集中免疫，各地為節(jié)約時間、節(jié)約勞力、降低成本、對口蹄疫、豬瘟、豬藍耳病3種強制免疫疫苗進行同時注射，各種疫苗之間是否存在拮抗作用，只有通過免疫效果監(jiān)測，建立科學的免疫程序，才能對多種疫苗免疫進行合理程序化安排，避免不同種疫苗作用的相互干擾。為了促進防疫工作開展，減輕基層防疫人員工作強度和物資消耗，筆者進行了口蹄疫疫苗、豬瘟疫苗和藍耳病疫苗分組分點注射的免疫干擾試驗。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 選自張氏集團大通仔豬繁殖場40~60日齡未經(jīng)免疫的仔豬120頭作為試驗豬，免疫前對動物進行基礎抗體滴度測定，豬繁殖與呼吸綜合征(藍耳病)病毒和抗體陰性，口蹄疫感染抗體陰性，免疫抗體低于1:32的選擇為試驗對象。

1.1.2 試驗疫苗 口蹄疫O型滅活苗，生產(chǎn)批號0903018，系中農(nóng)威特生物科技股份有限公司生產(chǎn)，豬瘟活疫苗(脾淋組織苗)，生產(chǎn)批號08079，系中牧實業(yè)股份有限公司成都精華藥械廠生產(chǎn)，高致病性豬藍耳病滅活苗，生產(chǎn)批號09014，系浙江杭州優(yōu)幫生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.1.3 檢測試劑 O型口蹄疫抗體液相阻斷ELISA試劑盒，批號2009062401，豬瘟正相間接血凝診斷液及陽性血清，批號090316，均購自蘭州獸醫(yī)研究所，豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測試劑盒(ELISA)批號09418－EE358，購自北京愛德士元亨生物科技有限公司生產(chǎn)(IDEXX)。

1.1.4 試驗場地與飼養(yǎng)管理 試驗場地位于大通縣黃家寨，附近無其他豬舍，各組單獨一圈，隔離飼養(yǎng)，飼喂相同飼料，整個試驗場地封閉管理，固定飼養(yǎng)人員，嚴格消毒，杜絕無關(guān)人員出入。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗分組 將120頭仔豬，隨機分成5組，第1組30頭，注射O型口蹄疫滅活疫苗，第2組30頭，注射豬瘟活疫苗，第3組30頭，注射高致病性豬藍耳病滅活苗，第4組同時分點注射O型口蹄疫、豬瘟、藍耳病3種疫苗。

1.2.2 免疫方法 單組疫苗免疫，注射部位為左右頸部。3種疫苗和4種疫苗同時分點免疫，注射部位為左右頸部和腿部內(nèi)側(cè)。免疫劑量：口蹄疫疫苗1ml/頭，豬瘟疫苗1頭份/頭，藍耳病滅活苗2ml/頭。

1.2.3 臨床不良反應觀察 所有試驗豬在免疫注射后進行臨床觀察7~10d，主要觀察豬只精神狀況、采食、體溫和不良反應。

1.2.4 免疫抗體檢測 分別于免疫后14、21、28、43d經(jīng)前腔靜脈采血，分離血清，用于抗體檢測。

O型口蹄疫抗體檢測：采用液相阻斷ELISA(LpB-ELISA)方法，具體操作參照試劑盒說明書進行。判定標準：豬血清抗體滴度≥1:64，則判定被檢血清O型口蹄疫抗體合格；抗體滴度<1:64，則判定被檢血清O型口蹄疫抗體不合格。豬瘟抗體檢測：采用間接血凝方法檢測，具體操作參照試劑盒說明書進行。判定標準：抗體效價≥1:32，則判定被檢血清豬瘟抗體合格；抗體效價<1:32，則判定被檢血清豬瘟抗體不合格。藍耳病抗體檢測：采用ELISA方法，具體操作參照試劑盒說明書進行。判定標準：S/P值≥0.4，判定被檢血清藍耳病抗體合格，S/P值<0.4，則判定被檢血清藍耳病抗體不合格。

檢測數(shù)據(jù)按病種進行分類統(tǒng)計，以Lg10的對數(shù)進行分析比較。

2 試驗結(jié)果

2.1 臨床不良反應

除部分豬只免疫當天及第2d體溫稍有升高、食欲下降外，無其他不良反應。單苗注射組與3種疫苗注射組間無明顯差異。

2.2 不同免疫程序口蹄疫抗體產(chǎn)生情況 (見表1、圖1)

表1 口蹄疫抗體檢測結(jié)果(抗體滴度用log10表示)

圖1 口蹄疫抗體檢測曲線圖

從表1和圖1可以看出，第1組和第4組在14d和21d時，抗體水平達到最高值，但維持時間不長，第28天時已開始下降，第4組抗體值高于第1組。

2.3 不同免疫程序豬瘟抗體產(chǎn)生情況 (見表2、圖2)

表2 豬瘟抗體檢測結(jié)果(抗體滴度用log10表示)

圖2 豬瘟抗體檢測曲線圖

從表2和圖2中可以看出，第2組抗體產(chǎn)生時間早，21天達到最高值，而第4組28天抗體達到最高值，較第2組推遲1周。

2.4 不同免疫程序豬藍耳病抗體產(chǎn)生情況

注射藍耳病滅活疫苗的2個組在免疫后43天內(nèi)的平均S/P值都在零以下，2個免疫程序?qū)λ{耳病免疫抗體的生成時間和水平無明顯差異。

3 結(jié)論與討論

（1）口蹄疫O型、豬瘟、豬藍耳病滅活疫苗同時分點免疫注射，臨床上無嚴重不良反應，可推廣應用。（2）4組的口蹄疫免疫抗體水平高于1組，且高抗體水平維持時間較長，表明口蹄疫、豬瘟、藍耳病同時分點免疫的抗體水平要優(yōu)于單苗注射組。（3）從近幾年的檢測來看，青海省豬O型口蹄疫免疫抗體水平很低，一直認為與豬多種疫苗同時注射而產(chǎn)生拮抗作用有關(guān)，從本次試驗結(jié)果來看，多種疫苗同時注射不會產(chǎn)生拮抗作用，相反在一定程度上還有促進協(xié)同抗體產(chǎn)生的作用。（4）從同一品種、相同的飼養(yǎng)環(huán)境以及年齡相當?shù)呢i的抗體檢測結(jié)果中可以看出，注射相同劑量的同一種疫苗后，在不同個體之間的免疫抗體水平存在差異。從本試驗中，豬口蹄疫抗體滴度值始終較低，這可能與試驗所選仔豬有關(guān)，因為是初次免疫、反應敏感性較差，首免后產(chǎn)生的抗體水平低，不能達到規(guī)定的保護效價。本次試驗中口蹄疫抗體合格率也較低，最高只有66.7%，也驗證了本省春秋集中免疫中抗體水平較低這一結(jié)果。因此，今后的防疫工作中，應加大對仔豬等的2次強化免疫工作。（5）豬瘟脾淋苗產(chǎn)生的抗體效價較高，在抗體產(chǎn)生的整個時期，單苗注射組和3種疫苗同時注射組在抗體達到最高值時抗體合格率都在80%以上，且維持時間也較長，因此，在生產(chǎn)實踐中，只要嚴格規(guī)范地進行操作，不需要加大注射劑量，都能達到較高的抗體水平。（6）從本次試驗看出，藍耳病疫苗1次免疫的效果不佳，或因抗體產(chǎn)生的時間較長，由于時間較為倉促，未能確定籃耳病抗體效價上升的確切時間，有待下一步進行補充完善。（7）豬瘟、口蹄疫和藍耳病分點同時注射對3種抗體的產(chǎn)生沒有顯著影響，沒有增加免疫副反應，可在農(nóng)村散養(yǎng)生豬中推廣“同時接種口蹄疫、豬瘟和藍耳病疫苗”的免疫程序。

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（2010–11–01）