鄒傳宗，陳 華

（平?jīng)鲠t(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，甘肅 平?jīng)?744000）

高效液相色譜法在生藥分析中的應(yīng)用

鄒傳宗，陳 華

（平?jīng)鲠t(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，甘肅 平?jīng)?744000）

隨著植物藥越來越受到人們的重視，其需求也不斷增長(zhǎng)，開展植物藥的藥代動(dòng)力學(xué)、毒理學(xué)研究和質(zhì)量控制，開發(fā)快速、靈敏、具有選擇性的分析方法也越來越迫切。高效液相色譜法（HPLC）作為分析化學(xué)成分的有效手段，近年在藥學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用日趨廣泛?，F(xiàn)綜述高效液相色譜法在生藥分析中的應(yīng)用。

高效液相色譜法；生藥分析；應(yīng)用

植物藥越來越受到人們的重視。據(jù)報(bào)道，全世界大約有70%的醫(yī)療依靠各種類型的植物藥。對(duì)植物藥的興趣主要基于以下2個(gè)原因：一是人們普遍認(rèn)為植物藥具有較小的毒性；二是用合成方法尋求新藥物的可能性變得越來越小，同時(shí)已有的西藥對(duì)一些疑難病癥無能為力。隨著對(duì)植物藥需求的不斷增長(zhǎng)，開展植物藥的藥代動(dòng)力學(xué)、毒理學(xué)研究和質(zhì)量控制，開發(fā)快速、靈敏、具有選擇性的分析方法也越來越迫切。高效液相色譜法（HPLC）作為一項(xiàng)分析速度快、分離效率高和操作自動(dòng)化的技術(shù)，是一種非常有效和普遍適用的植物藥分析方法。它較之于以往常用的薄層色譜等方法，無論是在精密度、準(zhǔn)確度上，還是在靈敏度、重現(xiàn)性上都有無與倫比的優(yōu)勢(shì)。目前高效液相色譜法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于植物藥中生物堿、皂苷、黃酮、蒽醌、香豆素等各種中藥有效成分的測(cè)定，還用于中藥及其制劑的質(zhì)量監(jiān)控。高效液相色譜法（HPLC）在生藥中的具體應(yīng)用主要體現(xiàn)在如下幾個(gè)方面。

1 建立單味中藥的高效液相指紋圖譜

2000年，我國(guó)中藥指紋圖譜技術(shù)全面啟動(dòng)。指紋圖譜能根據(jù)中醫(yī)用藥理論，從宏觀的角度完成對(duì)中藥的綜合分析和整體分析，表達(dá)產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性、均一性；有效地鑒別樣品的真?zhèn)位虍a(chǎn)地；指導(dǎo)中藥種植符合GAP的要求。它是中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的一個(gè)飛躍，也是中藥實(shí)現(xiàn)國(guó)際化的關(guān)鍵技術(shù)之一。

余靜等通過對(duì)同一產(chǎn)地（龍江伊春南岔）10批刺五加樣品，采用HPLC-UV、HPLC-MS進(jìn)行分析，得到分離度和重現(xiàn)性均較好的刺五加藥材HPLC-UV及HPLC-MS指紋圖譜，并分別對(duì)水溶性成分指紋圖譜中5個(gè)色譜峰和脂溶性成分指紋圖譜中8個(gè)色譜峰進(jìn)行了初步定性。2個(gè)指紋圖譜相互補(bǔ)充為刺五加的相關(guān)研究提供了較全面的數(shù)據(jù)。同時(shí)表明質(zhì)譜檢測(cè)器對(duì)UV檢測(cè)器是較好的補(bǔ)充。劉艷娥等通過對(duì)10批金銀花藥材樣品進(jìn)行HPLC指紋圖譜研究確定了它們有11個(gè)共有峰。王榮等在對(duì)甘肅地產(chǎn)大黃藥材樣品的5批樣品及其不同用藥部位的HPLC研究中確定了7個(gè)特征峰，并且發(fā)現(xiàn)其中的α值（α=Tri/Trs，Tri為各組分的出峰時(shí)間，Trs為內(nèi)參照峰的出峰時(shí)間）為0.12、0.13、0.28、0.67，它們?cè)跇?biāo)準(zhǔn)對(duì)照藥材中未標(biāo)出。由此認(rèn)為共有7個(gè)色譜峰是大黃藥材鑒定的有力依據(jù)。

對(duì)單味中藥的高效液相指紋圖譜進(jìn)行研究，不僅在基礎(chǔ)理論上為藥材質(zhì)量的評(píng)價(jià)做了大量而有效的工作，而且也為指紋圖譜理論在應(yīng)用領(lǐng)域中的開展提供了簡(jiǎn)便易行的方法。李磊等在對(duì)丹參水溶性成分以HPLC法進(jìn)行研究的過程中，發(fā)現(xiàn)正品丹參共有18個(gè)共有峰，與其他鼠尾草屬植物的指紋圖譜存在較大差異，并且采用歸一化數(shù)藥法處理HPLC指紋圖譜得到不同類別丹參的典型指紋條形碼圖。該條形碼圖簡(jiǎn)單明了，能直觀、快捷地對(duì)不同等級(jí)和質(zhì)量的丹參做出評(píng)價(jià)，對(duì)不同來源及真?zhèn)蔚⒆龀鰷?zhǔn)確鑒別。

2 不同地域、批次藥材中主要化學(xué)成分比較的指紋圖譜研究

對(duì)于部分應(yīng)用時(shí)間長(zhǎng)、療效肯定、成分明確的藥材，通過研究其主要化學(xué)成分的HPLC指紋圖譜，從方法學(xué)的角度講，能夠使研究的方向更加明確，結(jié)果比較確定，能對(duì)藥材質(zhì)量做出更好的評(píng)價(jià)。陳志霞等通過對(duì)化橘紅黃酮成分的HPLC法研究，從不同品種和產(chǎn)地的10批樣品中得到三十余個(gè)峰，其中共有峰20多個(gè)，并發(fā)現(xiàn)大部分光橘紅樣品在51.40 min有一個(gè)含量超過10%的峰，而毛橘紅則檢測(cè)到此峰的含量極低。此外，毛橘紅中的柚皮苷的含量均在70%以下，表明化州柚和柚主要有效部位黃酮類成分的HPLC指紋圖譜有明顯差別。馬翠英等對(duì)10批不同地區(qū)的黃芩樣品采用溶劑系統(tǒng)梯度洗脫后，確定了14個(gè)共有峰的HPLC指紋圖譜。此外，張?chǎng)嵉冗M(jìn)行了三七不同部位皂苷類成分的HPLC指紋圖譜研究，認(rèn)為三七不同部位中皂苷成分大體相同，并確定了17個(gè)特征峰。

3 應(yīng)用于相似藥材的鑒別及質(zhì)量評(píng)價(jià)

許多同科或同屬的藥材，由于其具有相似的功效，在臨床上有時(shí)混用，或在藥材流通中摻偽。與此同時(shí)，某些資源匱乏、稀有的名貴藥材，也存在急需尋找替代品的問題。而上述問題的解決都需要通過有力的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)方法來解決，HPLC就是其中的方法之一。李曉蒙等通過對(duì)5批水牛角和羚羊角樣品的HPLC法測(cè)定，發(fā)現(xiàn)羚羊角與水牛角的氨基酸含量有明顯差異，前者含較高的天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、酪氨酸，而后者則是丙氨酸、頡氨酸的含量相對(duì)較高，2者可以用HPLC法區(qū)分。張聰?shù)葘?duì)中國(guó)紅參和高麗紅參進(jìn)行了HPLC指紋圖譜比較研究，表明國(guó)產(chǎn)紅參和高麗紅參的品質(zhì)十分接近。

4 中藥制劑的HPLC指紋圖譜研究

中藥制劑是中藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一個(gè)重要部分，質(zhì)量控制是影響其全面發(fā)展和國(guó)際化的一個(gè)瓶頸。2002年，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局要求對(duì)中藥注射劑進(jìn)行指紋圖譜研究，而其他劑型的指紋圖譜也相繼有人開展了研究。苗愛軍通過對(duì)2個(gè)不同廠家生產(chǎn)的刺五加注射液的分析，建立其24個(gè)特征峰的HPLC指紋圖譜，并發(fā)現(xiàn)不同廠家的產(chǎn)品共有峰面積的比值有一定差異，認(rèn)為HPLC指紋特征圖譜可以快速區(qū)分不同的產(chǎn)品。而沈嘉等對(duì)不同工藝、不同原料制備的黃連解毒湯制品以及日本漢方黃連解毒湯劑用HPLC法分析，發(fā)現(xiàn)共有15～16個(gè)特征峰為共有峰，而不同生產(chǎn)工藝及原料制品的特征峰與內(nèi)標(biāo)峰的峰高比有顯著區(qū)別，他們認(rèn)為HPLC指紋圖譜可以量化區(qū)分不同原料和生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的同處方復(fù)方中藥的質(zhì)量特征。

5 中藥方劑（見表1）

表1 HPLC在中成藥分析中的應(yīng)用

中藥方劑一般由幾種甚至幾十種中藥材組成，化學(xué)成分非常復(fù)雜。目前我們對(duì)中藥方劑中的有效成分的認(rèn)識(shí)還相當(dāng)有限，有待開發(fā)準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)中藥方劑質(zhì)量的分析方法。人們由分析中藥復(fù)方制劑中的一種活性組分到分析幾種活性組分，逐漸提高評(píng)價(jià)中藥制劑的水平。日本和臺(tái)灣的健康福利部門都已明確規(guī)定，凡申請(qǐng)檢察和注冊(cè)的中藥制劑必須包括至少2個(gè)作為質(zhì)量指標(biāo)的化學(xué)成分的含量分析。

Wen等對(duì)3種含黃芩、葛根的中藥復(fù)方制劑中的黃芩甙、葛根素進(jìn)行了測(cè)定。Lee以0.03%磷酸/乙腈（V/V）為流動(dòng)相在Cosmosil 5C18-AR柱上用梯度洗脫，同時(shí)測(cè)定了由多味藥材構(gòu)成的中藥復(fù)方制劑中的甘草甙、甘草甜素、橙皮甙、桂皮酸、桂皮醛和厚樸酚等6種活性組分。在同樣的柱和流動(dòng)相條件下，Lin等以對(duì)羥基苯甲酸丙酯為內(nèi)標(biāo)，測(cè)定了中藥制劑中的龍膽苦甙、芒果甙、小檗堿、黃芩甙、次黃芩素和甘草酸。表1中列出了近年來為分析中藥制劑中的活性組分開發(fā)的HPLC法。

高效液相色譜法吸取了經(jīng)典液相色譜和氣相色譜2種方法的優(yōu)點(diǎn)，它必將在中藥鑒定以及中藥材的種植、中藥炮制研究、中藥活性成分的分析、生產(chǎn)工藝規(guī)范與優(yōu)化、中藥及其制劑生產(chǎn)的質(zhì)量監(jiān)控等方面起到重要的作用，但由于中藥及其復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)的復(fù)雜性，在中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究中高效液相色譜技術(shù)還有待進(jìn)一步完善。

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1671-1246（2011）08-0156-02