翟美華，朱 琳

(江蘇省南通藥品檢驗(yàn)所，江蘇南通226006)

注射用脂溶性維生素(Ⅱ)為維生素類藥，為腸外營(yíng)養(yǎng)組成部分，用以滿足人體對(duì)維生素的生理需要，在對(duì)藥品質(zhì)量監(jiān)控的抽樣檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，目前臨床使用的產(chǎn)品存在相同名稱不同規(guī)格不同標(biāo)準(zhǔn)的現(xiàn)象并不鮮見(jiàn)，同時(shí)在對(duì)維生素A的含量測(cè)定時(shí)也遇到了一些問(wèn)題，現(xiàn)圍繞標(biāo)準(zhǔn)中維生素A的含量測(cè)定與同行進(jìn)行探討.

1 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

因檢驗(yàn)工作需要獲取了兩份有關(guān)注射用脂溶性維生素(Ⅱ)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，兩者之間存在較大差異(見(jiàn)表1).

表1 兩質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比較

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 儀器、試劑與樣品 Agilent1100色譜系統(tǒng);色譜柱:Agilent ZORBAX Eclipse XDB － C8(4.6 mm ×150 mm，5 μm)，Diamonsil C18(4.6 mm ×150 mm，5 μm);維生素 A 棕櫚酸酯:SIGMA公司提供;甲醇為色譜純，乙醇為分析純;注射用脂溶性維生素(Ⅱ):市場(chǎng)抽樣A公司(樣品1)及B公司(樣品2、3).

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 色譜條件 按表1的兩個(gè)色譜條件測(cè)定.

2.2.2 對(duì)照溶液(參考物質(zhì)溶液)的制備 取維生素A棕櫚酯約20 mg，置100 mL量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過(guò)，即得.

2.2.3 供試品溶液的制備 取注射用脂溶性維生素(Ⅱ)內(nèi)容物適量(約相當(dāng)于維生素A棕櫚酯2 mg)，置10 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過(guò)，即得.

2.2.4 樣品測(cè)定及結(jié)果 取樣品溶液按2.2.1色譜條件分別測(cè)定，以維生素A棕櫚酸酯(標(biāo)準(zhǔn)一規(guī)定:每克維生素A棕櫚酸酯相當(dāng)于0.545 7 g維生素A)為參考測(cè)得兩種色譜條件下的結(jié)果，見(jiàn)表2.

改變色譜條件中色譜柱與流動(dòng)相的配對(duì)情況，得到不同形狀的色譜圖，見(jiàn)表3及圖1.

表2 樣品測(cè)定結(jié)果比較(%)

表3 不同色譜柱與流動(dòng)相的色譜圖對(duì)比表

圖1 不同色譜柱與流動(dòng)相的色譜圖

3 討論

3.1 對(duì)照品的使用 維生素A棕櫚酯對(duì)照品是注射用脂溶性維生素(Ⅱ)質(zhì)量控制中不可或缺的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(參考物質(zhì))，藥品管理法規(guī)定國(guó)務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門的藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)標(biāo)定國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品，國(guó)務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門指定的單位即為中國(guó)藥品生物制品檢定所，但中國(guó)藥品生物制品檢定所所能提供對(duì)照品目錄中沒(méi)有維生素A棕櫚酯.在藥品監(jiān)督抽驗(yàn)和評(píng)價(jià)性抽驗(yàn)檢驗(yàn)過(guò)程中，按國(guó)家有關(guān)規(guī)定必須采用國(guó)家對(duì)照品，對(duì)于無(wú)國(guó)家對(duì)照品的檢測(cè)項(xiàng)目，檢驗(yàn)單位一般不檢驗(yàn)或不對(duì)該項(xiàng)目做結(jié)論，如此現(xiàn)象會(huì)造成對(duì)藥品質(zhì)量監(jiān)控的數(shù)據(jù)缺失而導(dǎo)致監(jiān)管的失控，因此建議在制定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)應(yīng)考慮到對(duì)照品的因素.

3.2 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方面

3.2.1 藥品名稱相同的不同或相同規(guī)格或劑型的制劑，因生產(chǎn)單位的不同而執(zhí)行不同的質(zhì)量檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，此類現(xiàn)象在我國(guó)現(xiàn)階段是一個(gè)不可回避的現(xiàn)實(shí)，藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是保證藥品檢驗(yàn)結(jié)果正確的前提，是保證檢驗(yàn)報(bào)告書正確、科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)年P(guān)鍵，對(duì)于藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)而言只有嚴(yán)格執(zhí)行藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，而對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的正確性、科學(xué)性、嚴(yán)謹(jǐn)性只能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性的探討.制定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的目的是控制其質(zhì)量，標(biāo)準(zhǔn)的制定必須遵循一個(gè)指導(dǎo)原則，即質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法的驗(yàn)證，《中國(guó)藥典》附錄收載了藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法指導(dǎo)原則，可供含量測(cè)定參考的驗(yàn)證內(nèi)容有:準(zhǔn)確度、精密度、專屬性、線性、范圍、耐用性.就耐用性而言是指測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，為使方法可用于常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)，本次實(shí)驗(yàn)涉及的是并非是對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行的驗(yàn)證試驗(yàn)，而是對(duì)測(cè)定方法的探討，因其變動(dòng)的因素不僅有流動(dòng)相的組成還有色譜柱類型的改變.

3.2.2 本次實(shí)驗(yàn)兩個(gè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)針對(duì)的是兩個(gè)規(guī)格的樣品，但它們檢測(cè)的主藥成分是相同的(標(biāo)準(zhǔn)二中的維生素A最終也是以維生素A棕櫚酸酯作為檢測(cè)的參考依據(jù)).標(biāo)準(zhǔn)一處方中的維生素A按《中國(guó)藥典》的要求應(yīng)為維生素A醋酸酯，對(duì)于維生素A醋酸酯與維生素A棕櫚酸酯在高效液相色譜中的分配行為差異未作進(jìn)一步考察，但從同一份樣品兩種方法的檢測(cè)結(jié)果看，標(biāo)準(zhǔn)一采用的色譜條件優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)二采用的色譜條件，因從色譜圖上看多一個(gè)色譜峰就說(shuō)明有一個(gè)物質(zhì)的存在，不考慮量的因素這也是一個(gè)質(zhì)的區(qū)別.對(duì)色譜法的專屬性不僅需說(shuō)明諸成分的色譜位置，且要求各組分之間的分離度符合要求.

3.2.3 按《中國(guó)藥典》的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定維生素A系由維生素A醋酸酯結(jié)晶加精制植物油制成的油溶液.維生素A醋酸酯在植物油中的溶解度較棕櫚酸酯小，天然維生素A主要是全反式維生素A，尚有多種其他異構(gòu)體，維生素A還因其含有多個(gè)不飽和鍵而導(dǎo)致其性質(zhì)不穩(wěn)定.2010年版《中國(guó)藥典》對(duì)維生素A測(cè)定法進(jìn)行了修訂，增加了高效液相色譜法，采用的是正相色譜法，并規(guī)定維生素A醋酸酯主峰與其順式異構(gòu)體的分離度應(yīng)大于3.0.本文所用標(biāo)準(zhǔn)因樣品原因采用的是反相色譜法，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，改變固定相及流動(dòng)相的極性對(duì)測(cè)定結(jié)果有較大影響，辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(C8柱)的分離效果明顯高于十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(C18柱)的分離效果.

3.2.4 從實(shí)驗(yàn)的結(jié)果簡(jiǎn)單分析，影響維生素A含量測(cè)定的因素較多，樣品的穩(wěn)定性是必然的考慮因素，高效液相色譜系統(tǒng)的固定相與流動(dòng)相的優(yōu)化選擇直接影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，從本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，維生素A(維生素A醋酸酯)與維生素A棕櫚酸酯在相同色譜條件下色譜行為直觀上的表現(xiàn)基本一致，但兩種方法測(cè)定結(jié)果存在一定差異，需要對(duì)維生素A(維生素A醋酸酯)與維生素A棕櫚酸酯在測(cè)定中的關(guān)系作進(jìn)一步探討.

3.2.5 試行的藥品標(biāo)準(zhǔn)超過(guò)試行期的使用也較常見(jiàn)，本次實(shí)驗(yàn)涉及的標(biāo)準(zhǔn)由生產(chǎn)單位提供，均為試行標(biāo)準(zhǔn)，試行期均為2年，試行開始日期分別為2005年12月15日和2006年4月28日，均已超過(guò)了標(biāo)準(zhǔn)頒布的試行期限而未有新的替代標(biāo)準(zhǔn).

3.3 小結(jié) 對(duì)本次實(shí)驗(yàn)探討的問(wèn)題:一是制定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)性;二是試行標(biāo)準(zhǔn)的時(shí)效性;三是藥品檢驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(對(duì)照品)應(yīng)用的可行性;四是同類藥品標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)范性;五是藥品質(zhì)量的可控性.