周明星 鄧改改 丁明若 羅友成 劉焱文 汪鋆植

（1.天然產(chǎn)物開(kāi)發(fā)與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（三峽大學(xué)）,三峽大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)院,湖北 宜昌 443002；2.湖北中醫(yī)學(xué)院中藥資源與中藥復(fù)方省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖北 武漢 430065）

皺皮木瓜為薔薇科植物貼梗海棠Chaenomeles Speciosa（Sweet）Nakai的干燥成熟果實(shí),為常用中藥[1],具有平肝舒筋、和胃化濕等功效,主要用于治療濕痹拘攣、腰膝關(guān)節(jié)酸重疼痛、吐瀉、轉(zhuǎn)筋、腳氣水腫等癥[2].湖北省長(zhǎng)陽(yáng)土家族自治縣是我國(guó)皺皮木瓜道地藥材主產(chǎn)區(qū),產(chǎn)量占全國(guó)皺皮木瓜產(chǎn)量的60%以上.木瓜的傳統(tǒng)產(chǎn)地加工方式為鮮切后自然曬干,這種加工方式受自然條件影響大,易引起木瓜霉?fàn)€變質(zhì),每年由此造成的直接經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)30～70%,極大地影響皺皮木瓜的產(chǎn)業(yè)發(fā)展.為保證皺皮木瓜質(zhì)量,筆者對(duì)皺皮木瓜產(chǎn)地加工技術(shù)進(jìn)行了改進(jìn),建立了木瓜鮮切飲片技術(shù).而在《中國(guó)藥典》（2005年版）中,要求對(duì)木瓜中齊墩果酸和熊果酸進(jìn)行檢查,為評(píng)價(jià)鮮切飲片質(zhì)量,實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法（HPLC）,測(cè)定了不同方法制備的木瓜飲片中齊墩果酸和熊果酸含量,并對(duì)其HPLC指紋圖譜進(jìn)行了比較.

1 材料與儀器

1.1 藥材

新鮮皺皮木瓜采于長(zhǎng)陽(yáng)土家族自治縣榔坪鎮(zhèn),由長(zhǎng)陽(yáng)清江藥谷有限公司提供.市售皺皮木瓜飲片購(gòu)自宜昌市康鑫醫(yī)藥經(jīng)銷(xiāo)有限公司.經(jīng)三峽大學(xué)楊進(jìn)副教授鑒定為貼梗海棠Chaenomeles Speciosa（Sweet）Nakai.的果實(shí).

1.2 儀器與試劑

儀器:高效液相色譜儀（Waters 2998）；立式蒸汽滅菌器YXQ-LS-30 SII（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；GZX-9240 MBE數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；雙重蒸餾水器；電子天平（上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司）；EYELA SB-1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛(ài)朗儀器有限責(zé)任公司）.

試劑:乙腈（色譜純,美國(guó) Tedia公司）、甲醇（色譜純,美國(guó)J.T.Baker公司）；甲醇（分析純,天津博迪化工）；齊墩果酸、熊果酸對(duì)照品（購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所）.

2 方法與結(jié)果

2.1 木瓜樣品制備

鮮木瓜,取新鮮木瓜,切厚片,經(jīng)冷凍干燥制成鮮木瓜片.鮮切飲片,取新鮮木瓜,在高壓蒸汽滅菌鍋中經(jīng)蒸氣預(yù)處理后,切片,烘干.傳統(tǒng)飲片,取新鮮木瓜,按傳統(tǒng)加工方法制成飲片.

2.2 參照物溶液制備

精密稱(chēng)取齊墩果酸、熊果酸對(duì)照品適量,分別用色譜甲醇制成1.0 mg/mL對(duì)照品溶液,然后稀釋成濃度為0.1,0.25,0.5,0.75mg/mL對(duì)照品溶液.

2.3 供試品溶液的制備

取不木瓜樣品,粉碎,過(guò)80目篩,精密取不同樣品粉末各0.5 g于100 mL具塞錐形瓶中,精密吸取25mL甲醇,稱(chēng)重,蓋好瓶塞,冷浸過(guò)夜后超聲提取45 min,稱(chēng)量,并用甲醇補(bǔ)足重量,放冷至室溫,過(guò)濾,取續(xù)濾液,減壓濃縮后定容至5 mL,然后用 0.45μ m微孔濾膜過(guò)濾,制得樣品溶液.

2.4 色譜分析條件[2-4]

2.4.1 齊墩果酸和熊果酸含量測(cè)定HPLC分析條件

Diamonsil C18（4.6mm ×250mm,5μ m）色譜柱,流動(dòng)相:甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（265∶35∶0.1∶0.05）,進(jìn)樣量10μ L,流速1.0mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm,柱溫18℃.

2.4.2 指紋圖譜色譜分析條件

Diamonsil C18（4.6mm ×250mm,5μ m）色譜柱,流動(dòng)相:（A）乙腈,（B）水,梯度洗脫,0～50 min（5%～35%A,95%～65%B）,50～110 min（35%～100%A,65%～0%B）,110～120 min（100%A～0%B）；進(jìn)樣量 10 μ L,流速 1.0 mL/min,檢測(cè) 波長(zhǎng) 215 nm.

2.4.3 精密度實(shí)驗(yàn)

取同一供試品溶液,連續(xù)進(jìn)樣5次,計(jì)算出峰時(shí)間和峰面積的精密度,結(jié)果表明各峰出峰時(shí)間的精密度RSD小于0.28%,出峰面積的精密度 RSD小于2.0%.表明實(shí)驗(yàn)精密度良好.

2.4.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一供試品溶液,分別在0,4,8,12,24 h進(jìn)樣,計(jì)算各峰的保留時(shí)間和峰面積（以齊墩果酸為1,熊果酸為2,齊墩果酸出峰在熊果酸前,且較熊果酸峰大）.結(jié)果顯示供試品溶液的指紋圖譜在24 h內(nèi)很穩(wěn)定,各峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.19%,相對(duì)峰面積的RSD小于2.0%.

2.4.5 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)[5]

取同一編號(hào)藥材粉末5份,照前述處理方法制得供試品溶液,分別進(jìn)樣測(cè)定.實(shí)驗(yàn)表明本法重現(xiàn)性良好.

2.5 結(jié)果

2.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程:y=-0.03684+0.000316639x,R=0.9994,n=5；熊果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程:y=-0.04266+0.000309155x,R=0.9997,n=5；x為吸收峰面積,y為質(zhì)量濃度.

2.5.2 樣品中齊墩果酸和熊果酸含量

樣品中齊墩果酸和熊果酸含量見(jiàn)表1.

表1 樣品中齊墩果酸和熊果酸含量表

2.5.3 木瓜飲片HPLC檢測(cè)3D圖

結(jié)果顯示,各成分在檢測(cè)波長(zhǎng)215 nm下均有吸收.實(shí)驗(yàn)共檢測(cè)120min,其中 0～10min除溶劑峰外沒(méi)有其它峰,而在35～65 min基本沒(méi)有峰,10～120 min共有27個(gè)共有峰,共有峰的峰位和峰形表明4批不同樣品在組分上差異較小.但不同加工方法樣品的共有峰和各峰峰面積存在著一定差異,藥材特征峰的峰面積大小有較明顯差異,說(shuō)明不同加工來(lái)源樣本所含的化學(xué)成分含量有差異.

圖3 木瓜飲片總提物HPLC檢測(cè)3D圖

2.5.4 木瓜藥材HPLC指紋圖譜分析結(jié)果

木瓜藥材HPLC指紋圖譜分析結(jié)果見(jiàn)圖4～7.

3 討 論

“資丘皺皮木瓜”規(guī)范化的GAP藥材種植基地建設(shè)為保證木瓜種質(zhì)、規(guī)范栽培、田間管理、采收等生產(chǎn)環(huán)節(jié)提供了保障.但木瓜產(chǎn)地加工技術(shù)沿用傳統(tǒng)方法,易引起木瓜霉?fàn)€變質(zhì),極大地影響了商品質(zhì)量和藥效.因此為保證木瓜飲片質(zhì)量,對(duì)皺皮木瓜飲片生產(chǎn)技術(shù)進(jìn)行改進(jìn)勢(shì)在必行.本文建立的木瓜鮮切飲片技術(shù),保證了木瓜加工過(guò)程中的質(zhì)量.鮮切飲片與傳統(tǒng)飲片相比成分基本一致,標(biāo)示成分含量明顯高于傳統(tǒng)飲片.

目前多數(shù)中藥先在產(chǎn)地加工成中藥材后再運(yùn)輸?shù)疆惖丶庸こ娠嬈?不但增加了生產(chǎn)成本,而且藥材按傳統(tǒng)產(chǎn)地加工方式加工,由于技術(shù)和條件限制,易造成損耗、變質(zhì)和藥效成分流失,嚴(yán)重地影響了中藥質(zhì)量.而社會(huì)的發(fā)展使得交通運(yùn)輸日以便利,中藥行業(yè)的發(fā)展使許多中藥在產(chǎn)地直接加工成飲片成為可能.這樣既可降低飲片加工成本,又可保證確保飲片來(lái)源,穩(wěn)定飲片質(zhì)量[6-7].本文為探討中藥飲片新的加工方法,完善中藥產(chǎn)業(yè)鏈提供了一種可行的方法.

皺皮木瓜鮮加工飲片由于由鮮果直接加工成飲片,干燥速度快,表皮皺縮較輕,與傳統(tǒng)飲片相比性狀差別較大.而人們對(duì)飲片質(zhì)量的把握性狀是最直觀的指標(biāo).因中藥鮮切飲片能否代替?zhèn)鹘y(tǒng)飲片進(jìn)入市場(chǎng),一方面需要得到藥品管理部位和經(jīng)營(yíng)使用單位認(rèn)可,另一方面進(jìn)行藥效學(xué)比較.

[1]中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所.中藥志（第3冊(cè)）[M].2版.北京:人民衛(wèi)生出版杜,1993:215.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:57.

[3]陳豐連,黃錦茶,梁欣健.HPLC法測(cè)定涼粉草中齊墩果酸和熊果酸含量[J].中藥新藥與臨床藥理,2010:21（4）:416-418.

[4]黃志軍.木瓜水溶性部位高效液相色譜法指紋圖譜研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2006,17（10）:1869.

[5]屠鵬飛.高效液相色譜法制定中藥材中中藥注射劑特征指紋圖譜的探討[J].中成藥,2000,22（7）:516.

[6]肖永慶,張 村,李 麗.中藥飲片行業(yè)發(fā)展問(wèn)題與展望[J].醫(yī)學(xué)研究雜志,2009,28（12）:3-6.

[7]肖永慶,張 村,李 麗.淺談中藥飲片規(guī)范化生產(chǎn)和過(guò)程控制[J].醫(yī)學(xué)研究雜志,2010,39（9）:11-14.