周 軍 陳長生

(新疆塔城地區(qū)畜牧科技研究推廣中心，新疆塔城市 834700)

養(yǎng)殖生產(chǎn)中抗生素的濫用，導致病原耐藥性的產(chǎn)生，給疾病的治療和預防帶來了巨大的困難，為了更好的指導養(yǎng)殖場（戶）用藥，筆者分離培養(yǎng)病料中的細菌，同時進行藥敏試驗。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料

于2010年5月無菌采集塔城市某豬場病死豬的心臟血、肝臟、脾臟、喉頭等。

1.1.2 主要器材

全自動鑒定及藥敏測試儀 （ATB Expression）、HPX—9272MBE數(shù)顯不銹鋼電熱培養(yǎng)箱、數(shù)碼顯微鏡、SW-CJ-2FD超凈工作臺、LDIX—40BI型立式自動電熱壓力蒸汽滅菌器、溫箱、冰箱等。

1.1.3 藥敏紙片

藥敏紙片購自北京天壇藥物生物技術開發(fā)公司。

1.1.4 培養(yǎng)基及主要試劑

鮮血瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、各種糖發(fā)酵培養(yǎng)基、西蒙氏枸櫞酸鹽培養(yǎng)基、硝酸鹽、吲哚培養(yǎng)基。甲基紅、溴甲酚紫、α-萘酚酒精溶液、歐立希氏吲哚試劑、營養(yǎng)瓊脂、蛋白胨、葡萄糖、乳糖、蔗糖、氯化鈉、磷酸二氫鉀等。

1.1.5 實驗動物

健康小白鼠6只，體重17～24g雌雄各半；健康家兔1只。

1.2 方法

1.2.1 直接涂片鏡檢

無菌采取病豬的心臟血、肝臟、脾臟、喉頭等直接抹片，進行革蘭氏染色，顯微鏡檢查。

1.2.2 細菌的分離培養(yǎng)

無菌采取病豬的心臟血、肝臟、脾臟、喉頭，接種于鮮血瓊脂平板和普通瓊脂平板中，37℃培養(yǎng)24小時后，純化培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 生化試驗

挑選單個菌落進行常規(guī)生化實驗，觀察結果。

1.2.4 動物接種試驗

挑選單個菌落用蒸餾水稀釋到1個麥氏單位的菌液，取4只小白鼠，每只小白鼠腹腔注射菌液0.2mL；取2只小白鼠腹腔注射蒸餾水0.2mL做對照。同時用菌液滴入家兔一側結膜囊內(nèi)，另一側為對照。

1.2.5 藥敏試驗

將分離的菌株接種于瓊脂平板上，貼上藥敏紙片 （8種藥物），37℃恒溫培養(yǎng)36小時，觀察抑菌圈直徑。

1.2.6 細菌鑒定儀鑒定

取1～2個純化的菌落，用生理鹽水稀釋到0.5個麥氏單位，取細菌菌液200μL接種于一定量的培養(yǎng)液 （按照細菌鑒定儀的說明書操作）；用連續(xù)加樣器將帶有細菌的培養(yǎng)基，分別加入鑒定條的32個孔，每孔135μL，蓋好鑒定條的蓋子，放入溫箱37℃恒溫培養(yǎng)8小時。打開蓋子，用細菌鑒定儀鑒定。

2 試驗結果

2.1 細菌形態(tài)

在顯微鏡下觀察到兩端鈍圓的革蘭氏陽性，微彎曲、細長的小桿菌。有的連成鏈狀，有的呈 “V”型、環(huán)狀或柵欄狀，此外還可見長絲狀的菌體。

2.2 菌落形態(tài)

鮮血培養(yǎng)基出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，普通瓊脂培養(yǎng)基上呈中等大小的扁平菌落，表面光滑、邊緣整齊、不透明；中間也有圓形光滑，透明水樣的極小菌落；在肉湯培養(yǎng)基中呈均勻渾濁，有顆粒沉淀。

2.3 生化試驗

發(fā)酵葡萄糖、水楊苷，24小時即產(chǎn)酸；甘露醇為陰性，在7天內(nèi)不發(fā)酵蔗糖和乳糖。不產(chǎn)硫化氫和吲哚，不還原硝酸鹽以及不利用枸櫞酸鹽。由于條件所限，生化試驗未做全。

2.4 動物試驗

小鼠腹腔注射后，出現(xiàn)體溫升高，精神沉郁，食欲減少或廢絕，口渴，全身衰弱、僵硬、咳嗽、腹瀉、皮疹、呼吸困難、耳部和腹部皮膚發(fā)紺的癥狀；96小時注射菌液的小鼠全部死亡，對照組正常。

解剖發(fā)現(xiàn)脾臟、淋巴結、肺臟、腎上腺、心肌、胃腸道中有較小的壞死灶；取心血、肝臟、脾臟直接做抹片，鏡檢發(fā)現(xiàn)大量呈 “V”型、柵欄狀或長絲狀的革蘭氏陽性桿菌。兔左眼眼結膜滴入菌液72小時出現(xiàn)化膿性結膜炎。

2.5 藥敏試驗

測量抑菌圈的直徑，按其大小報告敏感程度。結果顯示該菌株對頭孢唑林鈉、慶大霉素、復方磺胺甲惡唑、羅紅霉素高敏，對乙酰螺旋霉素、諾氟沙星中敏，青霉素鈉、呋喃唑酮低敏。

2.6 細菌鑒定儀鑒定結果

確診為李氏桿菌。

3 小結

通過鏡檢、生化試驗、細菌鑒定儀鑒定確診為李氏桿菌病，通過藥敏實驗發(fā)現(xiàn)該菌株對頭孢唑林鈉、慶大霉素、復方磺胺甲惡唑、羅紅霉素高敏，建議該豬場使用這些藥物進行治療。

由于該病多呈零星散發(fā)，發(fā)病率較低，且第一頭發(fā)病時，病程短、死亡急，有的僅見神經(jīng)癥狀，有的甚至不見任何癥狀就突然死亡。

一旦發(fā)生該病，常誤診為常見病如偽狂犬病、水腫病、豬瘟、乙腦等，誤診后的治療導致仔豬病死率增加。故在臨床上，要根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀、用藥情況結合剖檢變化和實驗室診斷等進行鑒別診斷，做到早確診早治療。

應采用一頭發(fā)病全窩用藥的措施，保護健康豬群，提高治愈率，減少仔豬的死亡。

目前針對豬李氏桿菌病尚無很好的控制方案，疫苗尚在研制，因此要加強飼養(yǎng)管理，增強豬只抵抗力，處理好豬只糞尿，減少飼料和環(huán)境中的細菌污染，定期消毒，嚴格控制繼發(fā)感染。