黃洪勇，呂路線，王金寶，錢(qián)東麗，師天元（.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院，新鄉(xiāng)市45300；.河南省生物精神病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新鄉(xiāng)市 45300）

齊拉西酮（Ziprasidone，ZIP）是一種新型的非典型廣譜抗精神病藥，和其他非典型抗精神病藥相比，ZIP與5-羥色胺（5-HT）2A的親和力較強(qiáng)，對(duì)H1、α1受體有適度的親和力，與D1、α2受體的親和力較弱，幾乎不與M1受體結(jié)合，臨床適用于治療急性及慢性精神分裂癥以及其他各種精神疾病所引起的明顯陽(yáng)性癥狀、明顯的陰性癥狀和改善患者認(rèn)知功能[1]。同時(shí)，其還能減輕精神分裂癥伴隨的情感障礙。ZIP不增加患者的體重和血清泌乳素水平，無(wú)代謝異常的危險(xiǎn)，錐體外系反應(yīng)發(fā)生率低，性功能障礙不良反應(yīng)較低，QTc間期延長(zhǎng)不明顯[2]。國(guó)外曾以監(jiān)測(cè)患者體內(nèi)齊拉西酮的血藥濃度來(lái)指導(dǎo)臨床用藥、預(yù)警不良反應(yīng)和規(guī)避風(fēng)險(xiǎn)。本文建立以反相高效液相色譜（RP-HPLC）法測(cè)定人體血漿中齊拉西酮濃度的方法，該方法快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高、重現(xiàn)性好，適用于齊拉西酮的臨床研究和不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)。

1 材料

1.1 儀器

1100高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）；XT-120A電子分析天平（瑞士普利賽斯公司）；ULTRE FREEZE-3410超低溫冰箱（丹麥HETO公司）；XK96-A快速渦旋混合器（姜堰市新康醫(yī)療器械有限公司）；LXJ-Ⅱ離心沉淀機(jī)（上海醫(yī)用分析儀器廠）。

1.2 試藥

齊拉西酮對(duì)照品（徐州恩華藥業(yè)集團(tuán)有限責(zé)任公司，批號(hào)：20080101，含量：98.96%）；內(nèi)標(biāo)：地昔帕明（Desipramine，美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：065K1340，含量：98.00%）；乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：美國(guó)Diamonsil?C18反相柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：30℃；流動(dòng)相：乙腈-甲醇-緩沖液（5 mL三乙胺加入1 000 mL水中，冰醋酸調(diào)節(jié)pH值3.2）＝28∶12∶60；流速：1.3 mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液：取齊拉西酮對(duì)照品約10 mg，準(zhǔn)確稱(chēng)定，加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，定容，即得。于冰箱4℃保存?zhèn)溆?，臨用前用甲醇稀釋成所需濃度。

2.2.2 內(nèi)標(biāo)溶液：依法制備出10 μg·mL－1地昔帕明甲醇溶液為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3 血漿樣品處理

取400 μL含藥血漿，加至10 mL具塞錐形玻璃離心管中，加入內(nèi)標(biāo)溶液100 μL，渦旋振蕩1 min，加入二氯甲烷5 mL，渦旋振蕩提取2 min，4 000 r·min－1離心10 min，取有機(jī)層置于一干燥具塞尖底試管中，離心管中再加入二氯甲烷5 mL，同法操作。振蕩混合2次提取液，40℃水浴氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)?00 μL流動(dòng)相復(fù)溶后，4 000 r·min－1離心10 min，取20 μL進(jìn)樣。

2.4 專(zhuān)屬性考察

在“2.1”項(xiàng)色譜條件下，血漿內(nèi)源性物質(zhì)、代謝物及其他雜質(zhì)不干擾主峰的分離和測(cè)定，齊拉西酮和內(nèi)標(biāo)保留時(shí)間分別為6.45 min和11.15 min。齊拉西酮的有效板數(shù)為10 000，分離度19.6，拖尾因子1.02。高效液相色譜圖見(jiàn)圖1。

2.5 線性關(guān)系考察及靈敏度試驗(yàn)

取空白血漿300 μL共8份，分別加入齊拉西酮系列對(duì)照品溶液100μL，使血漿中藥物濃度分別相當(dāng)于0.022、0.044、0.088、0.176、0.352、0.704、1.408、2.816 μg·mL－1，振蕩混勻，然后按“2.3”項(xiàng)下方法處理，記錄色譜。以齊拉西酮血漿濃度（c）對(duì)齊拉西酮峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積的比值（F）進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為c＝2.760 3F－0.073 8（r＝0.999 2，n＝8），結(jié)果表明，齊拉西酮血藥濃度在0.022～2.816 μg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。當(dāng)信噪比（S/N）≥10時(shí)，最低定量限為0.022 μg·mL－1。

圖1 高效液相色譜圖A.空白血漿；B.齊拉西酮對(duì)照品溶液+內(nèi)標(biāo)溶液；C.血漿樣品+齊拉西酮對(duì)照品溶液+內(nèi)標(biāo)溶液；D.患者血樣+內(nèi)標(biāo)溶液；1.齊拉西酮；2.地昔帕明Fig1 HPLC chromatogramsA.blank plasma；B.ziprasidone reference standard+internal standard；C.plasma sample+ziprasidone reference standard+internal standard；D.plasma sample of patient+internal standard；1.ziprasidone；2.desipramine

2.6 回收率及精密度試驗(yàn)

取空白血漿3份，分別按“2.5”項(xiàng)下方法制備濃度為0.044、0.352、1.408 μg·mL－1的齊拉西酮血漿對(duì)照品溶液，然后按“2.3”項(xiàng)下方法處理。每種濃度日內(nèi)平行測(cè)定5次；3種濃度隔日測(cè)定1次，一共5次。分別計(jì)算日內(nèi)、日間精密度，并根據(jù)同一天內(nèi)低、中、高3個(gè)濃度血漿對(duì)照品結(jié)果計(jì)算相對(duì)回收率；另配0.044、0.352、1.408 μg·mL－1對(duì)照品溶液，以此為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算齊拉西酮的絕對(duì)回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率及精密度試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）Tab 1Results of recovery and precision tests（n＝5）

2.7 凍融穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別按“2.5”項(xiàng)下方法制備低、中、高濃度（0.044、0.352、1.408 μg·mL－1）的齊拉西酮血漿質(zhì)控樣品若干份，分別在室溫放置0、2、4、6、12 h，反復(fù)凍融0、1、2、3、4次，于－20 ℃冰箱保存0、5、10、20 d后，按“2.3”項(xiàng)下方法處理，進(jìn)行樣品的色譜測(cè)定。結(jié)果，齊拉西酮測(cè)定含量的RSD≤8.25%，表明血漿中齊拉西酮在室溫下12 h、凍融4次、－20℃冷凍20 d條件下穩(wěn)定。

2.8 患者血樣含量測(cè)定

取患者上肢靜脈血5 mL，離心分取血漿，按“2.5”項(xiàng)下平行處理3份，避光低溫保存至測(cè)定。RP-HPLC法測(cè)定血漿中齊拉西酮的含量，結(jié)果重現(xiàn)性比較好，詳見(jiàn)表2。

表2 患者血樣的測(cè)定結(jié)果（n＝3）Tab 2Results of the determination of blood sample（n＝3）

3 討論

精神分裂癥患者在藥物治療上大多聯(lián)用了一些鎮(zhèn)靜劑如地西泮，因此，這些物質(zhì)不易作為內(nèi)標(biāo)的首選[3]。本文建立的方法選用了患者不常聯(lián)用的地昔帕明作為內(nèi)標(biāo)，避免了患者血樣本身對(duì)分析過(guò)程的影響，擴(kuò)大了方法現(xiàn)實(shí)應(yīng)用中的患者范圍。

有關(guān)齊拉西酮體內(nèi)分析方法主要有高效液相色譜法、液-質(zhì)聯(lián)用法、熒光法等，然而現(xiàn)有的高效液相色譜法保留時(shí)間不太合適[4，5]，基線漂移[6]；液-質(zhì)聯(lián)用法儀器昂貴、色譜柱壽命有限[7]；熒光法需要專(zhuān)門(mén)設(shè)備[8]。筆者建立的RP-HPLC法既可顯著改善峰形，又可使保留時(shí)間適中，減少工作量，具有樣品前處理簡(jiǎn)單、分析儀器普及率高、簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，適用于齊拉西酮的臨床研究和不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)。

（本研究在河南省生物精神病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院）完成，特此致謝?。?/p>

[1]Swainston HT，Scott LJ.Ziprasidone：a review of its use in schizophrenia and schizoaffective disorder[J].CNS Drugs，2006，20（12）：1 027.

[2]Stroup TS，Lieberman JA，Swartz MS，et al.Effectiveness of olanzapine，quetiapine，risperidone，and ziprasidone in patients with chronic schizophrenia following discontinuation of aprevious atypical antipsychotic[J].Am J Psychiatry，2006，163（7）：611.

[3]何海霞，周遠(yuǎn)大，唐 竟，等.高效液相色譜法測(cè)定人血漿中齊拉西酮濃度[J].藥物分析雜志，2006，26（6）：752.

[4]Sudha RB，Venkata RP.Estimation of ziprasidone hydrochloride monohydrate in bulk and capsules by reverse phase HPLC[J].E-Journal of Chemistry，2006，3（12）：169.

[5]李華芳，沈一峰，葛慶華，等.鹽酸齊拉西酮在中國(guó)健康志愿者中的藥代動(dòng)力學(xué)研究[J].上海精神醫(yī)學(xué)，2006，18（4）：222.

[6]Singh A，Rao BM，Deshpande GR，et al.A Rapid stability-indicating LC method for ziprasidone hydrochloride[J].Chromatographia，2007，65（2）：191.

[7]Dirbashi OY，Enein HY，Odaib A，et al.Rapid liquid chromatography-tandem mass spectrometry method for quantification of ziprasidone in human plasma[J].Biomedical Chromatography，2006，20（4）：365.

[8]Raymond FS，Mira F，Christoph UC，et al.Determination of plasma ziprasidone using liquid chromatography with fluorescence detection[J].Journal of Chromatography B，2004，799（2）：201.