林尤恩 劉祖宏 陳尤佳 鄭趙利 (揭陽市人民醫(yī)院化療介入科，廣東 揭陽 5000)

誘捕受體3(decoyreceptor3，DcR3)是最近研究發(fā)現(xiàn)的一類腫瘤壞死因子受體 (TNFR)，某些蛋白配體與DcR3特異性結合后，導致配體不能夠與死亡受體結合，促使腫瘤細胞不能誘導凋亡〔1〕。研究發(fā)現(xiàn)，人類多種惡性腫瘤與DcR3蛋白的表達有關。關于DcR3在胃癌的表達，國內(nèi)外研究比較少，且多采用免疫組化法〔2〕。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗 (ELISA)檢測患者血清DcR3的水平，探討DcR3與胃癌增殖、發(fā)生和轉(zhuǎn)移關系。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選擇2009年1月至2010年12月我院收治經(jīng)病理組織學檢測確診的胃癌患者70例作為研究組，男性42例，女性28例，年齡24～76歲，平均(52.4±16.7)歲，＞60歲43例，＜60歲的27例。腫瘤＞5 cm 39例，＜5 cm 31例。胃癌診斷按照2000年WHO分類標準分為低分化腺癌28例、印戒細胞癌6例、黏液腺癌12例定義為低分化組;管狀腺癌24例定義為高分化組。無淋巴結轉(zhuǎn)移42例，有淋巴結局部轉(zhuǎn)移28例。臨床分期按照2002年美國腫瘤聯(lián)合會(AJCC)制定的TNM分期法分為Ⅰ期13例，Ⅱ期26例，Ⅲ期21例，Ⅳ期10例。另選擇正常健康體檢人群65例，年齡25～75歲，平均(51.3±15.6)歲。

1.2 方法 對所有患者檢測DcR3。檢測的方法:所有患者入院后次日，空腹采外周靜脈血5 ml，室溫靜置取上層血清，分裝在－80℃冰箱冷凍備用。ELLSA法檢測Human DcR3 ELISA試劑盒購自上海研鑫生物科技有限公司。實驗步驟嚴格按照試劑盒說明書進行操作。按比例配制試劑稀釋液、洗滌緩沖液等，倍比稀釋標準蛋白，按順序?qū)⒁严♂尩难鍢颖竞透鳚舛葮藴实鞍追謩e加入對應孔中，滴入生物素-結合物，室溫孵育120 min，洗板后滴入抗生物素蛋白鏈菌素-辣根過氧化物酶，室溫孵育60 min，洗板，加入四甲基聯(lián)苯胺，室溫避光10～20 min，加入終止液，以630 nm和450 nm雙波長用酶標儀測量吸光值，根據(jù)標準曲線，計算出各樣本孔濃度值，乘以稀釋倍數(shù)測出所有患者血清DcR3水平〔3〕。

1.3 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件。計量資料以±s表示，采用t檢驗;計數(shù)資料采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 研究組和對照組血清DcR3的比較 胃癌患者血清DcR3〔(183.43±78.45)pg/ml〕的水平顯著高于正常人〔(116.65±97.43)pg/ml〕，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

2.2 胃癌患者血清DcR3與胃癌相關因素的關系 胃癌患者血清DcR3與腫瘤患者TNM分期、淋巴轉(zhuǎn)移與分化程度密切相關(P＜0.05);與年齡、性別及腫瘤大小不相關(P＞0.05)。見表1。

表1 胃癌中DCR3的表達與病理因素的關系

3 討論

胃癌是我國常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率比較高，目前公認的胃癌的治療方法為手術治療，但研究表明術后5年生存率僅為55%左右，胃癌患者治療失敗的主要原因是腫瘤的轉(zhuǎn)移和浸潤〔4，5〕。胃癌組織結構、細胞形態(tài)和生物學行為比較復雜，組織學分型也比較多〔6〕。目前臨床上術前依靠腹部超聲、CT、X線鋇餐等影像學以及纖維胃鏡檢查診斷淋巴結和臨近臟器轉(zhuǎn)移及腫瘤浸潤深度，但是準確率并不高，大多數(shù)患者僅僅在術后通過病理學檢查證實。組織病理學檢查作為腫瘤診斷的重要手段，但是其存在有一定的主觀性〔7，8〕。對于胃癌早期診斷，目前缺少有效的檢測方法。

DcR3為腫瘤壞死因子受體(TNFR)家族新成員，與TNFR基因超家族成員有同源性的表達序列標簽，能和腫瘤壞死因子超家族成員Fas配體、TLlA以及LIGHT相結合，抑制其與受體LTβR和HVEM/TR2的特異性結合，對它們介導的細胞凋亡起負調(diào)控的功能。DcR3由271個氨基酸組成。由于缺乏跨膜序列，因此屬于分泌性蛋白分子〔9～11〕。一方面DcR3可以與凋亡因子FasL特異性結合，使惡性腫瘤細胞避免FasL依賴的細胞毒作用，從而阻斷腫瘤細胞凋亡。已有研究表明，DcR3基因無論在基因水平還是在蛋白水平，在許多惡性腫瘤均出現(xiàn)過度表達，而在正常組織 DcR3的表達較少〔12，13〕。也有研究證實以DcR3為靶點，制作DcR3反義RNA、DcR3中和抗體、DcR3疫苗等方法，通過降低血清DcR3的表達來阻止腫瘤細胞的增殖，也從另一個方面表明了DcR3可能在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用〔14〕。

本組研究可見，胃癌患者血清DcR3的水平顯著高于正常人，可見血清DcR3對于胃癌診斷存在比較重要的意義。

本組研究證實，TNM分期高、淋巴轉(zhuǎn)移和低分化癌患者具有較高的血清DcR3水平，而年齡大小、性別及腫瘤大小血清DcR3水平表達差異不大。反映了當胃癌病情加重的情況下，血清DcR3是增高的。提示DcR3表達水平可能與腫瘤的惡性程度有關。對胃癌患者檢測血清DcR3水平，可以作為腫瘤切除是否復發(fā)、是否轉(zhuǎn)移、是否徹底的有效理論依據(jù)，進而判斷胃癌的惡性程度、病情進展。通過檢測血清DcR3水平，可以對患者更準確地進行TNM分期提供理論依據(jù)。

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