曹 健，王 芳，張喆，張 卿，張恩娟

(第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院藥學(xué)部，重慶 400037)

口腔潰瘍油是醫(yī)院制劑，主要成分為酸達克羅寧、醋酸潑尼松龍、醋酸氯己定等。制劑中醋酸氯己定可殺菌、消炎，潑尼松龍也具有抗炎作用，酸達克羅寧有止痛作用，諸藥聯(lián)用可改善口腔潰瘍癥狀。長期臨床實踐表明，該制劑對口腔黏膜潰瘍療效顯著。筆者采用雙波長反相高效液相色譜法對口腔潰瘍油的鹽酸達克羅寧、醋酸潑尼松龍、醋酸氯己定進行了含量測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Waters 600 Controller型高效液相色譜儀，可變紫外檢測器。鹽酸達克羅寧對照品(供含量測定用，批號為0756－200110)，醋酸潑尼松龍對照品(供含量測定用，批號為0796－200615)，醋酸氯己定對照品(供含量測定用，批號為0796－200615)，均由中國藥品生物制品檢定所提供;口腔潰瘍油(醫(yī)院自制制劑，批號為090713，100113，100323);甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Waters C18柱 (150 mm × 4.6 mm，5 μm);流動相:0.02 mol/L 磷酸二氫鉀(含 0.4% 三乙胺，pH=2.5)－ 甲醇(60 ∶40);流速:1.2 mL/min;檢測波長:醋酸潑尼松龍、醋酸氯己定為243 nm，鹽酸達克羅寧為259 nm;柱溫:25℃;進樣量:20 mL。色譜圖見圖1和圖2。

圖1 259 nm波長時的高效液相色譜圖

圖2 243 nm波長時的高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取105℃干燥至恒重的鹽酸達克羅寧、醋酸潑尼松龍、醋酸氯己定對照品 100.0，10.7，10.6 mg，置 50 mL 量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液，精密量取2 mL至25 mL量瓶中，以流動相稀釋到刻度，搖勻，即得對照品溶液。精密量取口腔潰瘍油2 mL，置25 mL量瓶中，用少量流動相洗滌移液管并稀釋至刻度，搖勻，精密量取稀釋液5 mL，置25 mL量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。按處方比例，稱取鞣酸、冰片，加甘油攪拌均勻，制得口腔潰瘍油陰性溶液，精密量取2 mL，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密量取對照品貯備液 1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，置25 mL量瓶中，用流動相溶液稀釋至刻度，搖勻，按2.1項下的色譜條件，精密吸取20 μL注入色譜儀測定。以峰面積(Y)對質(zhì)量濃度(X)進行線性回歸，得回歸方程，鹽酸達克羅寧 Y=27968.6X －141772(r=0.9999)，醋酸潑尼松龍 Y=38105.4X －34800.6(r=0.9999)，醋酸氯己定 Y=52200.4 X －50021.2(r=0.9991)。結(jié)果表明，鹽酸達克羅寧質(zhì)量濃度在 80～240 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，醋酸潑尼松龍質(zhì)量濃度在8.56～25.68 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，醋酸氯己定質(zhì)量濃度在8.46～25.44 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗:取2.2項下對照品溶液，按2.1項下色譜條件重復(fù)進樣6次，每次20 μL，記錄峰面積值。結(jié)果鹽酸達克羅寧、醋酸潑尼松龍、醋酸氯己定峰面積的 RSD分別為0.89%，1.23%，1.56%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取 2.2 項下同一供試品溶液，分別于 0，1，2，4，8，12 h時進樣1次。結(jié)果鹽酸達克羅寧、醋酸潑尼松龍、醋酸氯己定峰面積值的 RSD 分別為 0.82% ，1.04% ，1.21%(n=6)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗:取同一批次口腔潰瘍油，共6份，依法制成供試品溶液并按2.1項下色譜條件測定含量。結(jié)果樣品中鹽酸達克羅寧、醋酸潑尼松龍、醋酸氯己定的平均含量分別為159.68 μg/mL(RSD=1.08%)，15.408 μg/mL(RSD=0.95%)，15.632 μg/mL(RSD=1.16%)。

回收率試驗:精密量取口腔潰瘍油陰性溶液2 mL，以流動相稀釋至25 mL量瓶中，搖勻，精密量取稀釋液5 mL，至25 mL量瓶中，共 3 份，分別精密加入對照品貯備液 1.5，2.0，2.5 mL，流動相稀釋至刻度，搖勻，測定含量并計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果(n=3)

2.4 樣品含量測定

精密量取不同批號口腔潰瘍油2 mL，按2.2項下方法制成供試品溶液，依法測定。記錄峰面積，按外標法計算其中鹽酸達克羅寧、醋酸潑尼松龍、醋酸氯己定的含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=6)

3 討論

對鹽酸達克羅寧、醋酸潑尼松龍、醋酸氯己定的單組分或兩組分的含量測定方法均有報道[1－4]，但3個組分同時測定的方法未見報道，且處方中冰片、鞣酸、甘油對主藥測定的干擾較大。本試驗考察了流動相分別為甲醇－含0.4%三乙胺(pH=2.5)的0.02 mol/L磷酸二氫鉀，比例分別為 60 ∶40，55 ∶45，50 ∶50，48 ∶52，45 ∶55，40 ∶60，還考察了 Hypersil ODS 柱 (150 mm ×4.6 mm，5 μm)的分離情況，結(jié)果表明，選擇現(xiàn)有色譜條件測定，色譜峰形較好，分離度較好，能夠滿足3組分的同時測定。

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